IGF-1基因克隆及其产物的测序鉴定

基因过表达在基础实验和基因治疗应用中都是常用的手段,而质粒的扩增在基因过表达过程中是不可或缺的技术,如何规范、高效地对质粒进行扩增和提取是基因治疗应用的前提,也是困扰很多基础研究人员的难题。利用现有的实验技术,在降低实验成本基础上,建立过表达质粒扩增、提取的最优方案。首先采用传统方法制作LB培养基和感受态细胞,对转化后的质粒进行大量扩增培养,之后使用商业试剂盒对质粒进行提取,反复试验后对商业试剂盒质粒提取过程进行优化,提高效率,最终获得高纯度和浓度的质粒溶液。经超微量分光光度计、琼脂糖凝胶电泳检测和sanger测序等多种方式检测验证后与NCBI数据库中目标基因序列一致,提示扩增、提取成功。经优化后的质粒扩增、提取方案标准、高效,成本低廉,是质粒基因克隆的最佳选择。

尿源性干细胞的提取及鉴定

目的:对人尿源性干细胞(hUSCs)进行分离提取和鉴定,为干细胞的应用打下基础。方法:无菌操作下收集2例年龄20~40岁的健康成人约200 mL新鲜中段尿,离心法初步提取尿液细胞,用干细胞培养液筛选培养hUSC,细胞传代至第3代时冻存,流式细胞技术鉴定第4代hUSCs表面标志物,用成脂试验检测干细胞的诱导分化能力。结果:2例均提取成功,在培养第7天时成功提取出hUSCs,并体外培养形成集落,流式细胞术鉴定干细胞表面抗原CD44、CD105和CD73呈高表达,CD45和HLA-DR呈低表达,表明具有间充质干细胞的特性,成脂试验检测干细胞具有诱导分化能力。结论:运用特殊的干细胞培养基成功培养出hUSCs并保存,可建立成熟稳定的培养技术和体系。

PEG-rhG-CSF和rhG-CSF治疗化疗后中性粒细胞减少症的荟萃分析

目的聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子(PEG-rhG-CSF)和重组人粒细胞集落刺激因子(rhGCSF)是临床中治疗恶性肿瘤化疗后中性粒细胞减少症(CIN)的主要药物,为全面评价二者在疗效和不良反应方面的差异,需要分析现有相关试验研究,以更好地指导临床。方法对2005年6月至2023年6月发表的收录于Pub Med、Embase、Web of Science和中国生物医学文献资料库的中英文文献进行检索。结果对9项随机对照研究进行比较。结果显示,PEG-rhG-CSF和rh G-CSF干预后CIN发生率比较,差异无统计学意义[n=695,RR=0.49,95%CI(0.24,1.02),P=0.06],提示二者疗效相当。而二者在不良反应发生率上比较,差异有统计学意义[n=695,RR=0.66,95%CI(0.55,0.78),P<0.00001]。两项对比可信度方面均表现良好,无发表偏倚和异质性,Egger’s结果分别为[95%CI(-5.56,2.45),P=0.390]和[95%CI(-3.24,1.81),P=0.532]。结论PEG-rhG-CSF和rh G-CSF疗效相当,但是在不良反应发生率上PEG-rh G-CSF明显低于rh G-CSF。