烟曲霉提取物通过EGFR-MEK-ERK1/2信号通路上调支气管上皮细胞黏蛋白5AC表达

目的探讨烟曲霉提取物(AFE)对人支气管上皮细胞(16HBE)黏蛋白5AC(MUC5AC)表达的影响及其可能的信号转导通路。方法本研究为实验研究。将16HBE分为4组:正常溶剂对照组、AFE处理组、AFE+选择性EGFR酪氨酸激酶抑制剂(AG1478)作用组和AFE+MAPK激酶抑制剂(PD98059)作用组。用免疫荧光、免疫组织化学、RT-PCR、Western blot及ELISA等方法测定EGFR、ERK1/2、磷酸化EGFR、磷酸化ERK1/2及MUC5AC的表达。结果8~24 mg/L AFE与16HBE共孵育24 h,各组细胞EGFR相对灰度值分别为0.4±0.1、1.0±0.4、1.3±0.3、1.8±0.8,ERK1/2相对灰度值分别为1.2±0.4、2.4±0.5、3.2±0.7、4.3±0.8,可剂量依赖性上调EGFR和ERK1/2表达;16 mg/L AFE与16HBE共孵育1 h,磷酸化EGFR的相对灰度值为1.2±0.2,磷酸化ERK1/2的相对灰度值为2.23±0.50,可诱导EGFR和ERK1/2磷酸化;16HBE与10μmol/L的AG1478作用可抑制AFE诱导的EGFR和ERK1/2的磷酸化,与30μmol/L的MAPK激酶抑制剂PD98059作用可抑制ERK1/2的磷酸化,而不影响EGFR的磷酸化。16 mg/L的AFE可上调16HBE MUC5AC的表达,MUC5AC mRNA光密度比值为2.2±0.2,与AG1478或PD98059作用可抑制AFE诱导MUC5AC表达。结论烟曲霉可上调16HBE细胞MUC5AC的表达,激活EGFR-ERK1/2信号通路是烟曲霉上调16HBE细胞MUC5AC的表达机制之一。