芹黄素对人眼Tenon囊成纤维细胞增生的影响

背景青光眼滤过手术后人Tenon囊成纤维细胞（HTFs）的增生是滤过手术失败的主要原因，寻找抑制术后HTFs增生的药物可提高滤过手术的成功率。目的观察芹黄素对HTFs体外生长的抑制效应并探讨其作用机制。方法斜视手术中获取的人眼Tenon囊组织剪成1mm×1mm×1mm的组织块，进行原代培养，免疫荧光法进行细胞波形蛋白检测以鉴定培养的HTFs。取第3～5代HTFs接种于96孑L板中，加入0、20、40、80、160μmol／L芹黄素后继续培养，于24、48、72h后分别取一块96孔板，在酶联免疫检测仪上检测560nm波长处各组细胞的吸光度（A。）值，磺基罗丹明B（SRB）法测定细胞的增生能力。分别在培养基中加入40、80、160μmol／L芹黄素，同时在不同浓度芹黄素组培养基中均加入10汕g／LBrdU，继续培养48h，在各组同一个视野下分别拍摄荧光显微镜和光学显微镜照片，计算BrdU的标记率，以未添加任何芹黄素（0μmol／L）组为对照组。用Hoechst33258染色后在荧光显微镜下观察培养细胞的形态学改变，采用流式细胞技术检测细胞的凋亡情况和细胞周期的变化。结果培养的细胞生长状态良好，免疫荧光法检测可见细胞对波形蛋白呈阳性反应，为细胞质中均匀的绿色荧光，确定培养的细胞为HTFs。SRB法检测结果显示，HTFs的增生值（A。）随着芹黄素浓度的增加而逐渐下降，同浓度芹黄素组HTFsA。值随着作用时间的延长逐渐下降，差异均有统计学意义（F㈣u：480．306，P=0．000；F目目=555．144，P=0．000）。0、40、80~mol／L芹黄素作用HTFs48h后BrdU的标记率分别为（87．860＋-0．632）％、（61．520＋-4．306）％、（23．480~4．472）％，各组之间的总体比较差异有统计学意义（F=299．347，P=0．000），其中40μmol／L、80μmol／L芹黄素组HTFsBrdU的标记率均明显低于0μmol／L芹黄素组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。Hoechse33258染色发现，不同浓度芹黄素组的细胞数目减少，随着芹黄素浓度的增加，细胞核固缩和变形的细胞数目增加。流式细胞术检测发现，随着芹黄素浓度的增加，G。／G，期细胞的百分数逐渐增加，而S期和G：／M期细胞的百分数逐渐下降，差异均有统计学意义（Fc㈣1=58．621，P=0．000；Fs=32．357，P=0．001；Fc2／M=83．998，P=0．000）。0、40、80、160~mol／L芹黄素作用72h后，细胞的凋亡率分别为（4．77±0．21）％、（13．24±1．35）％、（18．33±1．86）％、（31．58±2．77）％，4个组的总体差异有统计学意义（F=204．791，P〈0．05）。结论芹黄素通过诱导细胞凋亡，并将细胞阻滞于C／C期而抽柏JHTFs的士曾堆苴椎田里剂骨和时问俯觞幛，