带教本科临床生物化学检验实验教学体会

临床生物化学检验是我国医学检验专业学生必修的专业课程之一,实验课在整门课程教学中占有极其重要的地位。随着医学检验相关新设备、新仪器的不断出现,临床生物化学检验成为具有极强实践性的医学检验专业。而如何调整实验教学内容与方法,培养实用型检验技术人员,则显得尤为迫切与重要。本文对多年实验带教经验和体会进行总结,旨在对临床生物化学检验实验教学改革有所帮助。

浅析质量控制在医学检验技术专业教学中的现状及解决策略

医学检验质量控制是保证检测结果准确性的关键,在疾病诊断、治疗和预后评估均有重要意义。目前对医学检验技术专业学生质量控制意识的培养主要是在临床实践阶段,而在校期间质量控制意识的培养缺乏,导致学生对质量控制在基础实践以及临床医学检验工作中的重要性认识不足。质量控制意识的培养应贯穿于整个教学过程,有利于学生树立质控观念,正确认识职业特征,培养基本专业素质,为检验医学领域培养高素质应用型人才。

结核感染T细胞斑点试验检测胸腔积液和外周血对结核性胸膜炎的诊断价值

目的评价结核感染T细胞斑点试验（T—SPOT．TB）检测胸腔积液和外周血对结核性胸膜炎（TBP）的诊断价值。方法前瞻性纳入2013年6月～2015年8月潍坊市人民医院疑诊为结核性胸腔积液患者84例．分离患者胸腔积液单个核细胞（PEMCs）及外周血单个核细胞（PBMCs）进行T—SPOT．TB检测。比较两种标本MTB特异性抗原ESAT-6和CFP-10刺激后斑点形成细胞（SFCs）数量及其诊断特性，SFCs数量均值采用中位数（M）或四分位数间距（P25，P75）表示。结果根据临床诊断和分组标准，最终诊断TBP患者48例，非结核性胸膜炎（NTBP）患者36例；PBMCs和PEMCs T—SPOT．TB检测诊断TBP的灵敏度为81．3％和97．9％（P〈0．05），特异性为88．9％和80．6％（P〉0．05），阳性预测值为90．7％和87．0％（P〉0．05），阴性预测值为78．1％和97．6％（P〈0．05）。TBP患者PEMCs标本中ESAT6和CFP10的SFCs分别为1350（103．3，2750．0）、757．5（51．3，2512．5），PBMCs中分别为49．0（5．0，420．0）、39．5（4．3，390．5），PEMCs标本中形成的斑点数量显著高于PBMCs标本（4～15倍）（Z=4．7，P〈0．05；Z=4．3，P〈0．05）。结论PEMCsT—SPOT．TB检测对诊断TBP的灵敏度和阴性预测值高于PBMCs，但特异性和阳性预测值低于PBMCs，PEMCs和PBMCs同步检测临床诊断价值更大。

组织工程化软骨修复关节软骨损伤研究进展

关节软骨自身修复能力差,其损伤后的有效治疗成为临床难题。软骨组织工程中种子细胞、支架及生物活性因子是目前研究的热点。体内软骨生长的微环境中含有多种生物活性因子,各因子间相互影响构成纵横交错的关系网。然而,外源性因子半衰期短,易降解,很难达到修复损伤软骨需要的浓度。转基因技术在组织工程中的应用实现了外源性生物活性因子在局部持续并高效的表达,促进了损伤软骨修复。该文就组织工程化软骨修复关节软骨损伤研究进展作一综述。

P2X7R在结核分枝杆菌感染中的作用研究进展

结核病是一种全球范围内的人畜共患病,由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)引起,其防治形势日趋严峻。嘌呤能离子通道型受体7(purinergic ligand-gated ion channel 7 receptor,P2X7R)是嘌呤受体的一个亚型,在机体抗MTB感染过程中发挥重要作用。现对P2X7R在MTB感染中的作用研究进展进行综述,有助于阐明结核病的发病机制并为其治疗提供新的策略。

microRNA-140真核表达载体的构建及鉴定

目的构建miR-140真核表达载体并检测其在兔软骨细胞中的表达情况。方法以人全血标本基因组为模板,PCR扩增出带有酶切位点的miR-140序列,将该序列定向克隆入pBudCE4.1载体中,构建pBudCE4.1-miR-140真核表达载体。将核定位信号肽偶联核激酶底物短肽(nucleus localization signal linked nucleic kinase substrate short peptide,NNS)修饰的壳聚糖(^(NNS)CS)分别与pBud CE4.1-miR-140重组质粒及pBudCE4.1空质粒形成纳米复合物,分别瞬时转染体外分离培养的正常兔原代关节软骨细胞,实时荧光定量PCR方法检测miR-140的表达情况。结果构建的pBudCE4.1-miR-140真核表达质粒酶切鉴定和测序结果均正确,表明miR-140成功克隆入pBudCE4.1载体中。实时荧光定量PCR结果表明,与^(NNS)CS/pBudCE4.1对照组相比,^(NNS)CS/pBudCE4.1-miR-140转染组软骨细胞中miR-140表达升高约14.5倍(P<0.05)。结论成功构建了pBudCE4.1-miR-140真核表达载体,瞬时转染后软骨细胞可以有效地高表达miR-140,为将来探究miR-140在软骨损伤修复中的作用机制奠定了基础。

P2X7受体与白血病关系的研究进展

嘌呤能离子通道型7(P2X7)受体是2型嘌呤能受体家族(P2)成员之一,广泛表达于各种免疫细胞,其激活后参与多种生理和病理过程。近年研究发现,P2X7受体参与白血病的发生发展过程,P2X7受体激活后可通过促进白血病细胞增殖、抑制白血病细胞凋亡、导致P2X7受体基因多态性变化等,在白血病免疫反应中发挥重要作用。P2X7受体介导的嘌呤能信号通路是治疗白血病的潜在药物靶点。

P2X7受体与乳腺癌发生发展关系的研究进展

P2X7受体(P2X7 purinergic receptor,P2X7R)属于双跨膜阳离子通道型受体,在体内受ATP门控,激活后可产生诸如阳离子通道开放、信号通路激活、炎症介质释放和细胞凋亡等效应,在多种肿瘤及炎症性疾病的发生发展过程中发挥重要作用。研究表明,P2X7R在乳腺癌中表达异常,并通过激活一系列信号通路,影响乳腺癌的发生和发展;多种microRNA也可通过调节P2X7R基因的表达而促进乳腺癌的发生发展。文章对P2X7R的研究进展及其异常表达与乳腺癌的关系进行了综述。

潍坊地区人工喷泉中一株军团菌的分子生物学鉴定

目的对潍坊地区喷泉水中检测出的1株军团菌进行分子生物学鉴定和系统发育分析,为潍坊市军团菌病的预防和控制提供有益信息。方法于2016年7~9月采集潍坊市不同水源的水样,采用抽滤浓缩法浓缩获得细菌浓缩液,用细菌基因组试剂盒提取浓缩菌液中的总细菌基因组DNA,使用针对军团菌属16SrRNA基因片段的特异性引物PCR特异性扩增军团菌属16SrRNA基因片段并测序,与从GenBank获得的另外31株军团菌的16SrRNA的基因序列进行对比分析,采用MrBayesv3.2软件对16SrRNA基因片段序列数据矩阵进行贝叶斯分析并绘制基因进化树。结果 PCR扩增潍坊市水样军团菌属特异性16SrRNA基因片段(386bp),其中一喷泉水样阳性。测序分析该菌株(命名为WF-S)的16SrRNA基因序列与最新发现的沙特军团菌16SrRNA基因序列的遗传距离较近,相似度达99.4%,在构建的贝叶斯基因进化树中与沙特军团菌以其后验概率0.89聚类为一枝。结论 WF-S为一株沙特军团菌,在潍坊地区首次发现,也是国内首次报道的沙特军团菌。

P2X7受体胞外段蛋白的克隆、表达、纯化及鉴定

目的:克隆嘌呤能离子通道型受体7(P2X7R)胞外段编码序列,体外表达和鉴定重组P2X7R胞外段蛋白。方法:采用德泰生物密码子优化软件MaxCodon^TM Optimization Program(V13),对P2X7R胞外段蛋白氨基酸编码序列进行优化并设计PCR扩增引物。采用重叠PCR扩增目标基因,通过限制性酶切位点NdeⅠ和HindⅢ,将P2X7R胞外段编码序列定向插入原核表达载体pET30a(+),构建pET30a-P2X7R重组表达质粒,转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3+)表达菌种中,进行融合表达,诱导剂异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达。重组蛋白含6×His纯化标签,亲和层析(Ni-IDA树脂)纯化后,SDS-PAGE凝胶电泳和Western blot鉴定纯化产物。结果:PCR扩增的P2X7R胞外段蛋白编码序列长度为885 bp,成功构建重组pET30a-P2X7R质粒,并转化至E.coli BL21(DE3+)菌株中。融合型表达的重组蛋白分子量约为34 kD,可被抗His标签单克隆抗体特异性识别。结论:成功克隆P2X7R胞外段蛋白编码序列、诱导表达并纯化了重组P2X7R胞外段蛋白,为今后制备抗人P2X7R胞外段蛋白的单克隆抗体奠定了坚实的基础。

核定位信号肽偶联核激酶底物短肽修饰壳聚糖介导微小RNA-140对兔关节软骨细胞作用的研究

目的探讨核定位信号肽偶联核激酶底物短肽(nucleus localization signal linked nucleic kinase substrate short peptide,NNS)修饰壳聚糖(chitosan,CS)(^(NNS)CS),介导人微小RNA-140(micro RNA-140,miR-140)基因转染,对体外培养的兔关节软骨细胞的作用。方法将重组质粒GV268-miR-140和空质粒GV268分别与^(NNS)CS复合形成^(NNS)CS/pDNA纳米复合物。取新生新西兰大耳白兔膝关节软骨,采用胰蛋白酶和胶原酶联合消化法分离培养原代软骨细胞。取第2代软骨细胞分为3组:正常细胞对照组(A组)、^(NNS)CS/GV268空质粒转染组(B组)、^(NNS)CS/GV268-miR-140转染组(C组),B、C组细胞分别以^(NNS)CS/GV268及^(NNS)CS/GV268-miR-140纳米复合物瞬时转染。转染后,实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,RT-qPCR)检测外源mi R-140的表达;AnnexinⅤ-FITC/PI双染色法及MTT法分别检测外源miR-140对软骨细胞凋亡及增殖活力的影响;RT-qPCR检测软骨细胞中Sox9、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)、组蛋白去乙酰化酶4(histone deacetylase 4,Hdac4)基因表达。结果 RT-qPCR检测示,C组外源miR-140表达水平较A、B组明显上调(P<0.05)。与A、B组比较,C组软骨细胞凋亡率明显降低,细胞增殖活力明显增加,细胞内Sox9、Aggrecan基因相对表达量明显上调、Hdac4基因相对表达量明显下调(P<0.05);A、B组间以上指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 ^(NNS)CS可携带外源基因进入软骨细胞并高效表达,高表达的miR-140能提高体外培养软骨细胞的生物活性,为其用于治疗软骨损伤性疾病提供了实验依据。

甲状腺激素受体β与肿瘤关系研究进展

甲状腺激素受体(thyroid hormone receptors,TRs)是一种配体依赖性转录因子,由TRα和TRβ基因编码。在哺乳动物中已发现多个不同的TR亚型,分别由TRα和TRβ基因由于转录起始位点的不同或选择性剪接而产生的若干同工体。近年来被越来越多的研究证实TRs除参与调控机体正常的发育和代谢平衡外,还具有对肿瘤发生的调节作用,尤其是TRβ亚型在肿瘤的发生、发展及转移等过程中发挥重要的生物学作用,表现出了明显的肿瘤抑制功能。在多种肿瘤组织中可检测到TRβ表达的降低甚至缺失。TRβ参与调控细胞内多个信号转导通路,与肿瘤的发生发展密切相关。对TRβ参与的细胞内调控机制的研究有助于在分子水平上对肿瘤的发生发展作更深入的了解,以发掘新的肿瘤治疗靶点。本文主要对TRβ与肿瘤关系的研究进展进行综述。

P2X7受体在结肠癌进展中的作用

P2X7受体是以三磷酸腺苷(ATP)为配体的离子通道型受体,在多种免疫细胞和组织中广泛表达,其激活后可参与多种生理和病理过程。P2X7受体在结肠癌中异常表达,并在结肠癌的进展中发挥抑癌和促癌双重作用。P2X7受体被细胞外的ATP激活后,可通过多种机制有效抑制结肠癌细胞的增殖,并诱导细胞凋亡。另外,P2X7受体还能促进结肠癌的生长、侵袭和转移。了解P2X7受体的激活及其效应机制对于结肠癌的治疗具有重要意义。

P2X7受体与炎症相关性疾病

P2X7是一种在多种免疫细胞中广泛表达的以ATP为配体的阳离子通道受体,它的激活能引起和加重炎症反应。当细胞处于损伤、缺氧或炎症状态时, P2X7受体可被释放到胞外的大量ATP激活,进而通过活化NLRP3炎症小体、调节基因转录等方式,影响炎症介质(IL-1β、IL-18等)的释放从而参与多种炎症性疾病,如糖尿病肾病、系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)等。近年来,细胞外ATP-P2X7受体信号通路已成为炎症性疾病研究较多的通路之一。大量研究表明, P2X7受体是治疗炎症性疾病的潜在靶点。该文将对P2X7受体及其参与的炎症相关性疾病的关系作一综述。