浅谈数字化病理教学的利与弊及改进方案

随着科技的飞速发展,数字信息化已经波及到社会的各个角落。我国在数字化病理方面进步迅速,目前许多高校、医院及其他科研机构都建立起数字化病理系统的可视化数据库。近年来许多高校开始实行数字化切片在病理实验教学中的应用,数字化病理切片的应用能够很大地提高学生对病理组织图像的辨识能力,调动了学生的学习兴趣,改善了实验课的课堂教学效果。尽管数字化切片教学对传统的切片教学起到了很大的辅助作用,但是病理形态学数字化教学仍然存在的许多问题。为了克服上述缺点,我们初步提出了自己的构想。

以病理学为主线多学科融合性教学在应用型人才培养中的应用

培养应用型医学人才是地方高等医学院校的主要任务,而多学科融合性教学是完成此任务的重要教学方法。目前我校以病理学为主线的多学科融合性教学取得较好的教学效果,主要经验为:制定切实可行的应用型人才培养方案;选取高素质的融合性教学授课对象;形成多学科融合性教学团队;整合优化实验教学;确定以临床疾病诊疗为教学最终目标。

APOC1蛋白在胃癌中的表达及临床意义

目的探讨载脂蛋白C1(APOC1)在胃癌中的表达水平及其与临床病理特征的关系。方法应用TCGA数据库分析胃癌组织中APOC1的表达情况。收集70例胃癌组织和癌旁正常胃黏膜组织标本,采用免疫组织化学法和Western blot检测两组标本中APOC1蛋白的表达情况,分析APOC1蛋白表达的阳性表达率与胃癌患者的性别、年龄、分化程度、肿瘤直径、Lauren’s分型、淋巴结转移、TNM分期等临床病理特征的关系;采用Kaplan-Meier Plotter对胃癌患者的生存情况进行分析。结果通过TCGA数据库分析发现APOC1在胃癌中的表达高于癌旁正常胃黏膜组织。免疫组化结果显示APOC1蛋白在胃癌组织中的表达显著高于癌旁正常胃黏膜组织;Western blot实验显示在新鲜胃癌组织中检测到APOC1蛋白表达水平高于癌旁组织。APOC1蛋白在胃癌中的表达与TNM分期、淋巴结转移呈明显正相关;与患者年龄、性别、肿瘤直径、Lauren’s分型和分化程度无关;生存分析发现APOC1低表达组的OS、FP、PPS均显著长于高表达组(P<0.05)。结论 APOC1在胃癌组织中表达上调且与胃癌进展相关,其异常表达与胃癌患者的预后不良密切相关。APOC1有望成为胃癌诊断和评估预后的有效指标。

miR-181通过Prox1促进人乳腺癌细胞系MCF-7的增殖并抑制凋亡

目的观察miR-181、同源异型盒转录因子(Prox-1)对乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响,探讨miR-181及Prox-1在乳腺癌发生发展中的作用。方法荧光定量PCR检测癌旁乳腺组织、导管内癌组织、浸润性导管癌组织中miR-181的表达;pRFP-miR-181-inhibitor质粒转染乳腺癌细胞系MCF-7,荧光定量PCR和Westernblot检测Prox1mRNA及蛋白水平;EdU检测细胞增殖;TUNEL试剂盒检测细胞凋亡。结果与癌旁乳腺组织比较,导管内癌组织、浸润性导管癌组织内miR-181mRNA表达上调(P<0.01);抑制MCF-7细胞内的miR-181的表达,Prox1在蛋白水平明显上调(P<0.05);MCF-7细胞的增殖能力减弱(P<0.05)而凋亡增强(P<0.05)。结论miR-181可能通过抑制Prox1促进细胞的增殖、抑制细胞的凋亡,参与了乳腺癌的发生。

外泌体介导miR-335-5p通过靶向LKB1对胶质瘤细胞上皮-间质转化的影响

目的探讨外泌体中microRNA-335-5p(miR-335-5p)被胶质瘤细胞摄取并作用于肝激酶B1(liver kinase B1,LKB1)影响胶质瘤细胞侵袭的分子机制。方法通过外泌体提取试剂盒提取外泌体;运用透射电镜、粒度仪、Western blot法鉴定分离获取的外泌体;RT-PCR检测不同肿瘤细胞来源外泌体中miR-335-5p的表达量;外泌体摄取实验检测胶质瘤细胞对外泌体的摄取情况;Transwell实验检测加入外泌体后胶质瘤细胞的侵袭能力;双荧光素酶报告实验验证miR-335-5p是否靶向结合LKB1;Transwell实验检测转染miR-335-5p mimic后胶质瘤细胞的侵袭能力;Western blot法检测转染miR-335-5p mimic后胶质瘤细胞中LKB1和上皮-间质转化相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin和vimentin)的表达水平。结果LN229细胞来源的外泌体中miR-335-5p表达水平明显高于H4细胞来源的外泌体;过表达miR-335-5p后LN229细胞侵袭能力增强;miR-335-5p靶向结合LKB1 mRNA的3′UTR区;miR-335-5p通过负向调控LKB1诱导胶质瘤细胞发生上皮-间质转化。结论外泌体中的miR-335-5p被胶质瘤细胞摄取并通过抑制LKB1蛋白表达诱导细胞发生上皮-间质转化,从而促进胶质瘤细胞的侵袭。

翻转课堂结合案例式教学模式在局部解剖学中的应用

目的分析翻转课堂结合案例教学模式在局部解剖学教学中的应用效果。方法随机选择潍坊医学院2016级临床医学专业4个班级为研究对象,两个班为实验班,另外两个班为对照班。实验班采取“翻转课堂+案例式教学”的模式,对照班全程采取传统授课方式。教学结束后通过考试及调查问卷等方法,评价两种教学模式的教学效果。结果实验班学生理论考试主观题得分、总成绩、期中测验成绩、平时成绩及最终学习成绩均高于对照班(P<0.05)。问卷调查结果显示:实验班学生在激发学习积极性、培养自主学习和临床思维能力、提高分析和解决问题能力等方面高于对照班(P<0.05)。结论在局部解剖学教学中采用翻转课堂结合案例教学模式,可以提高教学效果,对于局部解剖学教学改革具有较大启发。

干扰LASP1基因表达对胃癌细胞BGC823增殖、迁移及侵袭能力的影响

背景与目的:LASP1是一种新的肌动蛋白结合蛋白,参与细胞骨架的重组调控及细胞迁移,在多种恶性肿瘤中高表达,并与肿瘤的增殖、侵袭和转移密切相关。但目前LASP1在胃癌发生、发展中的作用少见报道。该研究旨在探讨LASP1在胃癌增殖和侵袭中的作用及分子机制。方法:利用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)检测LASP1在不同胃癌细胞系中的表达,应用RNA干扰技术抑制BGC823细胞中LASP1的表达,采用RTFQ-PCR和Western blot检测转染后LASP1的表达,应用体外增殖、迁移和侵袭实验检测转染后细胞的增殖、迁移和侵袭能力,通过F-actin聚合实验检测细胞的F-actin的聚合能力,采用Western blot检测转染前后BGC823细胞中Akt的磷酸化情况。结果:LASP1在胃癌BGC823细胞中高表达。RNA干扰技术沉默LASP1基因后,干扰组与对照组相比,LASP1的m RNA和蛋白表达水平均明显下降。细胞增殖实验显示,干扰组细胞的增殖率低于对照组(P<0.05);Transwell迁移和侵袭实验发现,与对照组相比,干扰组细胞的迁移和侵袭能力均明显降低(P<0.05);在干扰组细胞内的F-actin聚合量比对照组减少(P<0.05);在干扰组细胞内Akt磷酸化受到抑制。结论:LASP1的表达降低可以抑制胃癌BGC823细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力,LASP1通过调节F-actin的聚合和Akt磷酸化从而影响胃癌细胞的侵袭、转移。

MDA-MB-231细胞在乏氧条件下通过外泌体传递miR-221、miR-222增强乳腺癌细胞侵袭和迁移能力

目的探讨乳腺癌细胞MDA-MB-231在乏氧条件下分泌的外泌体对肿瘤细胞侵袭和迁移的影响。方法利用差速离心法分离外泌体,并通过动态光散射和透射电镜对外泌体的粒径、形态进行表征。通过对外泌体进行PKH26染色,进而观察肿瘤细胞对外泌体的摄取情况。应用qRT-PCR法检测肿瘤细胞及外泌体中miR-221、miR-222的含量。Transwell侵袭实验和细胞划痕实验检测MDA-MB-231细胞的侵袭和迁移能力。Western blot法检测MDA-MB-231细胞中上皮细胞-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin和vimentin)的表达。结果MDA-MB-231细胞经乏氧处理后,其侵袭和迁移能力增强,并且N-cadherin和vimentin的表达上调;乏氧处理的肿瘤细胞分泌的外泌体通过传递miR-221、miR-222,促进MDA-MB-231细胞的EMT进展。结论MDA-MB-231细胞在乏氧条件下,可以通过外泌体传递miR-221、miR-222增加癌细胞侵袭和迁移能力。

ZFP36L1通过激活STAT3信号通路抑制上皮间质转化减弱人乳腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移

目的探讨锌指蛋白36样分子1(ZFP36L1)在乳腺癌发生发展中的作用和机制。方法免疫组织化学方法检测乳腺癌组织ZFP36L1的表达和定位,分析ZFP36L1的表达与乳腺癌临床病理参数及预后的关系;MCF-7人乳腺癌细胞转染ZFP36L1过表达和空白质粒,通过5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)和新型四唑氮盐(MTS)实验检测细胞增殖能力和细胞活性,Transwell^(TM)检测细胞的侵袭和迁移能力,Western blot法检测β联蛋白(β-catenin)、波形蛋白(vimentin)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、信号转导子与转录激活子3(STAT3)和磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白水平。结果与高表达ZFP36L1的乳腺癌患者相比,低表达ZFP36L1患者肿瘤体积大,TNM分期高,淋巴结及远处转移率高;过表达ZFP36L1的MCF-7乳腺癌细胞的活性减低,增殖、侵袭和迁移能力降低,E-cadherin表达升高,β-catenin、vimentin表达降低;STAT3及p-STAT3表达升高。结论ZFP36L1作为一种抑癌基因,通过上皮间质转化(EMT)和STAT3信号通路抑制了乳腺癌增殖、侵袭和迁移。

Nir1表达对胶质瘤细胞侵袭能力的影响

目的探讨Nir1在胶质瘤细胞中引起向细胞间叶性转变的分子机制。方法采用Western blot检测Nir1在不同胶质瘤细胞系中的表达;应用已构建的pc DNA3.1-Nir1质粒转染人胶质瘤H4细胞,采用Western blot法检测转染后H4细胞中Nir1、T-cadherin、间叶细胞标志物vimentin、N-cadherin及转录因子Snail、Slug、Twist1、Zeb1的表达;体外侵袭实验检测转染后细胞的侵袭能力。结果 Nir1在低侵袭力胶质瘤细胞H4中的表达低于高侵袭力胶质瘤细胞;细胞转染后,H4细胞中Nir1的蛋白表达明显增强,侵袭并穿透Matrigel胶的细胞数目明显比对照组多(P=0.00);与CCL18共同孵育72 h后细胞内vimentin、Ncadherin的表达明显增多,转录因子中只有Snail的表达明显增多而Slug、Twist1、Zeb1的表达差异无显著性。结论在胶质瘤细胞中存在并表达Nir1蛋白,Nir1可促进胶质瘤细胞间质转化(mesenchymal transition,MT),进而调控胶质瘤细胞的运动和侵袭能力。

外泌体miR-574-5P通过下调大肿瘤抑制基因2促进胶质瘤增殖、侵袭和迁移

外泌体可参与肿瘤细胞侵袭、迁移和血管生成等生物学过程,而侵袭是胶质瘤患者死亡的主要原因。研究表明,肿瘤细胞分泌的外泌体能够携带miRNA到受体细胞中,调控受体细胞增殖、迁移和侵袭等生物学功能。miR-574-5P在多种肿瘤发生发展中发挥关键作用,但胶质瘤细胞来源的外泌体是否表达miR-574-5P,以及其在胶质瘤细胞生长和侵袭迁移中的作用未见报道。本研究将探讨胶质瘤细胞来源的外泌体miR-574-5P在细胞增殖、迁移和侵袭过程中的作用机制。运用电镜、纳米粒径跟踪和Western印迹表征外泌体。结果显示,所提取的圆形颗粒是外泌体,直径为30~100 nm;经免疫荧光检测外泌体的内化,结果显示,外泌体内化到LN229细胞中;运用生物信息学和网上数据找出胶质瘤细胞来源的外泌体差异miRNA,结果显示,外泌体差异miRNA为miR-574-5P,并预测大肿瘤抑制基因2(LATS2)可能是miR-574-5P的靶基因;双荧光素酶报告基因结果证实,miR-574-5P与LATS2的3′UTR区互补结合;转染实验、qRT-PCR和Western印迹检测miR-574-5P与LATS2的关系,结果显示,过表达miR-574-5P后,LATS2 mRNA的含量与对照组无显著差异(P>0.05),表明miR-574-5P对LATS2的调控作用通过抑制其翻译实现(P<0.05)。转染实验、CCK-8法、Transwell迁移和侵袭实验,检测miR-574-5P对LN229细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果显示,过表达miR-574-5P可显著促进LN229细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。此外,Western印迹检测信号通路LATS2/YAP关键激酶蛋白质的表达情况,观察外泌体对此信号通路的影响。结果显示,外泌体下调LATS2表达,减少p-YAP磷酸化。综上所述,外泌体miR-574-5P通过靶向下调LATS2,激活LATS2/YAP信号通路,从而促进胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力,这可为胶质瘤的诊断和治疗提供一个科学可靠的靶点。

CCL18通过ANXA2促进肺腺癌的侵袭

背景与目的 ANXA2在癌症进展中起着非常重要的作用,趋化因子18(chemokine ligand 18, CCL18)与肺腺癌(lung adenocarcinoma, LUAD)的侵袭、迁移、转移及预后不良有关。本研究旨在探究CCL18是否通过ANXA2促进LUAD侵袭以及其在LUAD侵袭中的作用和分子机制。方法 Western blot检测LUAD组织与癌周正常组织中ANXA2表达量,并检测转染效率及ANXA2作为上游调节剂在AKT/cofilin信号通路中的作用。细胞趋化实验、Transwell侵袭实验等实验探讨ANXA2对LUAD的作用机理。F-actin聚合实验和Western blot检测转染Si RNA的A549细胞侵袭是否与F-actin相关。结果与相邻非肿瘤组织相比,癌组织中A NX A2的蛋白表达水平升高(P<0.05)。敲低A NX A2组的LUA D细胞中CCL18诱导的趋化运动能力和侵袭能力下降(P<0.05)。与对照组相比,敲低ANXA2的LUAD细胞的F-actin聚合明显降低,而敲低ANXA2的LUAD细胞中AKT在Ser473和Thr308位点的磷酸化和cofilin、LIMK的磷酸化水平均降低(P<0.05)。结论敲低ANXA2可以通过降低AKT及下游通路磷酸化,进而降低CCL18对LUAD细胞的侵袭性的影响。

BDNF在ALS转基因小鼠活化星形胶质细胞中表达升高

目的探索脑源性神经营养因子(BDNF)在肌萎缩侧索硬化症(ALS)转基因小鼠神经元及星形胶质细胞(AS)表达及定位,进一步明确ALS发病机制。方法以同窝野生型(WT)小鼠为对照;免疫荧光法检测BDNF在95、108和122 d ALS转基因小鼠脊髓组织神经元及星形胶质细胞中的表达;以神经元样杂交细胞系NSC34(具有运动神经元特征)细胞为模型,建立野生型及SOD1-G93A突变型NSC34细胞模型;取同窝新生转基因小鼠,进行原代星形胶质细胞培养,免疫印迹检测BDNF在NSC34模型细胞及原代星形胶质细胞中的表达水平。结果与WT小鼠相比,在95、108和122 d ALS转基因小鼠脊髓组织中,BDNF在神经元内表达降低(P<0.05),而BDNF/GFAP(神经胶质纤维酸性蛋白)双阳性细胞明显增多;BDNF在SOD1-G93A突变型NSC34模型细胞中表达下降(P<0.05),在活化星形胶质细胞中表达增加(P<0.05)。结论BDNF在ALS转基因小鼠神经元及活化星形胶质细胞的表达变化及定位,提示神经元自主机制与星形胶质细胞介导的非自主机制在ALS的发病中起到重要作用。

迁移侵袭抑制蛋白抑制胃癌细胞增殖迁移及侵袭

目的检测迁移侵袭抑制蛋白(migration and invasion inhibi tory protein,MIIP)基因在胃癌中的表达情况及其在胃癌发生发展过程中起到的作用,为探究胃癌发生的分子机制和靶向治疗提供实验依据。方法Western blot和免疫组织化学法检测MIIP在胃癌组织的表达。胃癌SGC7901细胞中转染MIIP过表达质粒及其空质粒,应用细胞功能学实验检测MIIP过表达对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果MIIP在胃癌组织标本中的表达低于癌旁正常胃粘膜;细胞功能实验结果显示,MIIP过表达可抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结论过表达MIIP可以抑制胃癌SGC7901细胞增殖、迁移和侵袭的能力。

miR-130a靶向G3BP2促进乳腺癌侵袭

目的探讨基因预测软件Targetscan预测到的微小RNA-130a如何调节GTP酶激活蛋白SH3功能区结合蛋白2(GTPase activating protein SH3 binding protein 2,G3BP2)的表达,进而影响乳腺癌细胞的侵袭。方法应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测正常乳腺上皮及乳腺癌细胞系中miR-130a的表达水平;蛋白质印迹法(Western blot)检测改变miR-130a表达水平对乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231中G3BP2及上皮间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白的影响;双荧光素酶报告基因实验检测miR-130a是否能与G3BP2靶向结合,以及Transwell侵袭实验检测miR-130a表达水平与MCF-7和MDA-MB-231细胞侵袭能力的关系。结果qRT-PCR显示miR-130a表达量在高侵袭乳腺癌细胞株明显高于低侵袭乳腺癌细胞株MCF-7及正常乳腺上皮细胞;Western blot检测显示,miR-130a负向调控G3BP2的表达并促进乳腺癌细胞发生EMT;qRT-PCR显示改变乳腺癌细胞内miR-130a表达后G3BP2 mRNA基本没有变化;双荧光素酶报告基因结果显示,miR-130a能与G3BP2 mRNA的3’UTR结合;Transwell侵袭实验显示,miR-130a促进乳腺癌细胞的体外侵袭。结论miR-130a通过靶向结合G3BP2 mRNA的3’UTR区,在翻译水平抑制G3BP2表达后促进乳腺癌细胞发生EMT,从而促进乳腺癌细胞的侵袭。

SCARA5在胃癌中的表达及意义

目的探讨SCARA5在胃癌中的表达及与临床病例特征和预后的关系。方法应用TGCA数据库和免疫组化法检测胃癌组织中SCARA5的表达情况,进一步分析SCARA5表达与胃癌临床病理特征及预后的关系。结果通过TCGA数据库分析发现SCARA5在胃癌中的表达低于癌旁正常胃黏膜组织(P<0.001)。免疫组化结果显示SCARA5蛋白在胃癌组织中的表达显著低于癌旁正常胃黏膜组织(P<0.05)。SCARA5蛋白在胃癌中的的表达与肿瘤大小(P=0.0226)、Lauren’s分型(P=0.0013)、TNM分期(P=0.0254)、淋巴结转移(P=0.0241)相关。而且SCARA5与PCNA在胃癌中的表达呈显著负相关。Kaplan-Meier生存分析显示,与SCARA5低表达组相比,SCARA5高表达组患者的总生存期更长(P<0.05)。结论 SCARA5在胃癌中的表达与肿瘤进展和患者不良预后密切相关。SCARA5有望成为胃癌诊断的分子标志物和治疗的有效靶标。