生物技术专业免疫学实验课教学改革的初步实践

实验课是医学免疫学的重要部分,为了提高生物技术专业实验课的教学质量,适应社会需求,我们结合近几年来的实践教学经验,对免疫学实验课程体系进行了尝试性的改革,取得了较好的教学效果。

生物技术专业免疫学实验教学改革的效果分析

目的:探讨生物技术专业本科生免疫学实验课教学改革的效果。方法:采用问卷调查的方法,以潍坊医学院2006级生物技术专业本科学生作为实验对象进行调查。结果:95%的同学认为开设实验课非常必要,大多数同学评价实验课各环节是重要的,对实验内容的安排满意,认为目前的安排符合专业特点。结论:通过改革实验内容及教学模式,免疫学实验教学取得了较好的效果。

调免3号对封闭抗体缺乏型反复自然流产免疫调节作用

目的探讨中药调免3号对母血封闭抗体缺乏型反复自然流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)免疫调节作用。方法将封闭抗体缺乏型RSA患者61例,采用抽签法随机分成2组,试验组31例服用中药调免3号治疗;对照组30例采用配偶淋巴细胞主动免疫治疗。治疗时间均为3个月,另选10名健康同龄女性为健康对照组。治疗前后检测封闭抗体效率(blocking antibodies,Ab1)、抗独特型抗体(anti-idiotypicantibodies,Ab2)、T细胞亚群(T-lymphocyte cell subsets,CD4,CD8)、IL-10、巨噬细胞集落刺激因子(macrophagecolony-stimulating factor,M-CSF)的水平。结果 (1)试验组治疗后Ab1和(或)Ab2阳转率达87.1%(27/31),对照组为86.7%(26/30),两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。(2)两组治疗后皆CD4下降,CD8提高,CD4/CD8比值处于人体正常值水平,与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.05)。(3)两组治疗后IL-10、M-CSF升高,与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.05)。(4)试验组1年受孕率58.1%(18/31),高于对照组的46.7%(14/30,P<0.05)。结论中药调免3号可促进母体封闭抗体阳转率,促进IL-10、M-CSF细胞因子的产生,从而加强了母体对胎儿的保护作用和对妊娠的正常维持,1年成功妊娠率明显升高。

抗ssDNA单抗免疫组化法用于检测肿瘤细胞株对化疗药物敏感性的研究

目的 :应用本室制备的抗单链DNA (ssDNA)单克隆抗体(mAb) ,检测多种化疗药物对不同肿瘤细胞株凋亡的诱导作用 ,并根据凋亡率判断肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。方法 :用血浆峰值浓度 (PPC)的 9种化疗药物 ,分别诱导肿瘤细胞株K5 6 2和Hep 2的凋亡。用抗ssDNAmAb免疫组化染色法 ,检测肿瘤细胞株的凋亡并计算调亡率。结果 :以抗ssDNAmAb建立的检测细胞凋亡的免疫组化法 ,能够区分凋亡细胞和非凋亡细胞。该法检测证明 ,化疗药物可诱导敏感肿瘤细胞株凋亡 ,但不同化疗药物诱导同一肿瘤细胞株或不同肿瘤细胞株凋亡的程度不同。结论 :抗ssDNAmAb免疫组化法 ,可用于检测肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。

小肠黏膜下层作为组织工程支架材料的免疫原性研究

目的检测小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)的免疫原性,探讨其作为组织工程支架材料的可行性。方法取SIS材料制备成体积为10mm×4mm×3mm的组织块,埋植于新西兰大白兔背部一侧骶脊肌内,以术前情况作自身对照,以新鲜SIS组作为阳性对照。分别于SIS材料植入前及植入后1、4、8周从兔耳缘静脉取血,用流式细胞仪检测家兔外周血中CD4+T和CD8+T细胞亚群的动态变化。结果流式细胞仪检测结果显示,脱抗原处理后的SIS植入兔体内后,其外周血CD4+T和CD8+T细胞较术前均有不同程度升高,术后一周达最高峰,与术前相比差异有统计学意义(P<0.05)。术后逐渐回落,至第4周时基本恢复正常。而植入新鲜SIS组的兔外周血CD4+T和CD8+T细胞较术前升高明显,与术前及实验组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论SIS植入后T细胞亚群反应初始结果显示SIS有较低的免疫原性,提示其具有作为组织工程支架材料的可行性和可能性。

^(131)I治疗Graves病免疫状态变化的规律及临床价值

目的动态检测131I治疗Graves病(GD)后的免疫学相关指标,探讨其变化规律与疗效的关系。方法随机选取149例GD患者分为A组(92例),131I治疗加用免疫调节剂,B组(57例)单用131I治疗。患者治疗前及治疗后1,3,6,9,12个月检查TRAb,TMA,TGA,IL-2,IL-6,CD4+,CD8+免疫指标,并注意观察疗效。随机抽取正常健康人20例作对照组。结果①GD患者TRAb,TMA,TGA,IL-2,IL-6治疗前明显高于正常人(P<0.05)。治疗后两组患者的检测指标的消长规律随时间延长呈下行曲线递减,B组下降速度较A组缓慢;②GD患者在治疗前CD4+高于正常,CD8+低于正常人(P<0.05),CD4+/CD8+比值明显增高。治疗后6个月与治疗前相比差异有显著性(P<0.05);③131I治疗后,25例1年内恢复正常。早发甲低患者中24例治疗前TRAb,TGA,TMA均为阳性,单纯TRAb阳性6例。结论①除TRAb外,TMA,TGA,IL-2,IL-6免疫分子也参与了GD的发生、发展过程,该类分子的含量变化与GD病情归转相关;②CD4+,CD8+T细胞亚群失衡,可能是GD的始动因子之一;③下调TRAb,TMA,TGA,IL-2,IL-6水平和纠正CD4+,CD8+T细胞亚群失衡的药物,可用于GD内照射治疗的同时,降低早发甲低的发生率,提高治愈率。

自身免疫病免疫调节的研究概况

本文简述了近年来利用自身免疫病动物模型进行人工特异免疫调节方法的研究概况，包括ＣＤ４￣＋Ｔ细胞亚群的偏离与纠正、辅助刺激分子的阻断、ＴＣＲ拮抗剂、口服自身抗原诱导自身免疫耐受和ＴＣＲ多肽疫苗等方法，阐述了这些调节方法的机理及特点等。了解这些特异的免疫调节方法对于探索特异治疗人类自身免疫病的途径将有所帮助。

乙型肝炎病毒感染者T细胞介导免疫应答研究进展

对于乙型肝炎病毒感染者来说,机体针对HBV编码抗原的体液及细胞免疫应答,虽有利于病毒的清除,同时也导致对感染肝细胞的损伤。在此过程中,T细胞介导免疫应答起关键作用。本文就近年来这方面的研究进展作一综述。

GM-CSF网络在炎症反应与自身免疫疾病中的作用

粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)一般被认为是在粒细胞系与巨噬细胞系的发育与成熟的各阶段起到调控作用。近来 ,不断的实验证据证实了GM CSF在炎症反应与自身免疫疾病中有重要的作用。通过GM CSF- - 小鼠及抗GM CSF抗体阻断型小鼠模型的研究 ,逐步揭示了GM CSF与IL 1、TNF α等细胞因子间相互作用及其在炎症反应与自身免疫疾病中的作用 ,并提出了GM CSF网络的假说雏形和GM CSF作为信号通路信使的初步研究成果。

血管活性肠肽的免疫调节作用

血管活性肠肽是一种神经肽 ,又是一种小分子免疫活性肽。随着与相应血管活性肠肽受体的cDNAs被克隆和表达 ,对血管活性肠肽的免疫学作用也有了更深入的认识。血管活性肠肽通过影响细胞因子的产生、调节炎症反应、影响胸腺细胞的分化、调节Th细胞应答来参与免疫自稳的调节 ,并可抑制T淋巴细胞的凋亡。

免疫调节的一些新机制

在免疫应答过程中，受抗原刺激而活化的T，B细胞不仅增殖分化，发挥效应功能，同时表达的膜蛋白质CD95L，CTLA-4等或分泌的细胞因子TNF，LT，TGF-β等反而诱导活化的T，B细胞“凋亡”或功能的神创，进而对免疫应各进行负调节，以此维持机体的生理平衡和内环境的稳定。在这方面的研究丰富了人们对免疫调节机制的认识。

胃癌及其癌前病变相关新基因GP1的生物信息学分析

目的利用生物信息学方法对新克隆的GP1基因和蛋白序列进行分析,推测其在胃癌发生、发展过程中的作用。方法以人类基因组数据库为基础,利用Megablast工具和SAGE数据库对GP1进行染色体定位和组织表达分布分析;应用BLAST进行GP1的基因结构分析和相似序列搜索;应用ORF finder对GP1编码的蛋白进行序列预测;应用ProParam、TMPRED等软件分析GP1编码蛋白质的理化性质、亚细胞定位及结构域等信息。结果 GP1基因全长1 362 bp,其最长开放读码框为801 bp,编码267个氨基酸,相似性搜索发现GP1基因片段与人AF083246基因片段具有很高的相似性(100%)。在GP1蛋白上有一个与真核起始因子5C(eIF5C)具有低度同源性的结构域。SAGE结果显示GP1在多种组织中都有表达。RT-PCR验证了基因的组织表达谱。结论生物信息学的分析表明GP1是一个胃癌相关基因,可能在胃癌的发生发展过程中起一定的作用。

CpG-ODN调节小鼠免疫细胞对HBsAg体液免疫应答性的初步研究

目的 初步探寻能够刺激小鼠免疫系统产生针对HBsAg的体液免疫应答的最佳CpG ODN序列。方法 应用正交设计法设计含有不同序列的 10种CpG ODN免疫小鼠 ,以研究影响CpG ODN免疫活性的 6个因素 :免疫时间、CpG基序侧翼核苷酸、5’ poly(A)、硫代修饰、回文结构和CpG 基序数量 ,筛选出最优组合的CpG ODN。结果 10种CpG ODN与HBsAg一起免疫小鼠均可不同程度地诱导小鼠抗HBsAg抗体水平的变化 ,显示出CpG ODN较强的佐剂效应。结论 CpG ODN与HBsAg一起免疫小鼠可诱导小鼠产生强烈的抗体应答 ,以六个因素均存在时CpG ODN的免疫刺激活性较强 ,即 10号序列 5’ AAAAAACGTTAACGTT 3’为本实验中刺激小鼠免疫系统产生针对HBsAg的体液免疫应答的最佳序列。

卵白蛋白诱导的急性过敏性腹泻小鼠结肠组织的病理学特征

目的 建立急性过敏性腹泻模型,观察结肠组织的病理学特征.方法 5～6周龄雌性BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组;用卵白蛋白（OVA）和完全弗氏佐剂对实验组小鼠隔1周2次腋窝皮下预致敏,第2次致敏1周后2组小鼠均每隔1d给予等量溶解在灭菌PBS的OVA灌胃;于第10次灌胃后处死小鼠,取血分离血清测OVA-IgE,取结肠近端组织行HE染色观察肠组织病理改变并在油镜下计数嗜酸性粒细胞.结果 与对照组相比,实验组小鼠结肠黏膜充血水肿,上皮排列不规则,腺区有大量炎细胞浸润,固有层可见大量嗜酸性粒细胞,血清OVA-IgE水平显著升高.结论 OVA 可诱导过敏性腹泻炎症,结肠黏膜组织以充血水肿和大量嗜酸性粒细胞浸润为特征.

乙肝病毒前C基因突变株感染者细胞免疫功能的观察

检测乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）前Ｃ基因突变株感染者的细胞免疫水平，探讨细胞免疫与前Ｃ基因突变的关系。方法用多聚酶链反应（ＰＣＲ）结合地高辛标记的寡核苷酸探针杂交技术从６０名慢性乙肝患者中筛选出ＨＢＶ前Ｃ基因突变株感染者、ＨＢＶ野毒株感染者及ＨＢＶ已清除者各５人，用血源性ＨＢｓＡｇ和ＣＤ４＋Ｔ辅助细胞识别的抗原表位ＨＢｃＡｇ５０－６９合成多肽进行特异性淋巴细胞转化实验。结果ＨＢＶ前Ｃ基因突变株感染者对ＨＢｓＡｇ的应答与其余各组间差异不显著（Ｐ＞０．０５）；对ＨＢｃＡｇ５０－６９合成多肽的应答，与其余各组间差异有高度显著性（Ｐ＜０．０１）。结论ＨＢＶ前Ｃ基因突变株感染者对合成多肽的应答较野毒株感染者及ＨＢＶ已清除者低。

以hsa-miR-491-3p为靶标的反义寡核苷酸对NCI-H446细胞生物学特性的影响

背景与目的:miRNAs是一类小分子RNA,参与转录后调控。前期研究结果显示,hsa-miR-491-3p在肺癌和肾癌组织中高表达,目前鲜见其功能研究的报道。本研究旨在探讨以hsa-miR-491-3p为靶标的反义寡核苷酸对人小细胞肺癌NCI-H446细胞生物学特性的影响。方法:合成以hsa-miR-491-3p为靶标的反义寡核苷酸和随机对照序列,转染NCI-H446细胞。实验分4组:空白对照组(组1)、空白转染组(组2)、随机对照组(组3)和反义寡核苷酸组(组4)。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法筛选最佳作用浓度,Hoechst33258染色检测细胞核的形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡和周期变化,划痕实验检测细胞的迁移能力。结果:转染反义寡核苷酸后细胞生长受到抑制,最佳作用浓度为0.5μmol/L。Hoechst33258染色各组的凋亡率分别为(6.67±0.58)%、(7.00±1.00)%、(6.67±1.53)%和(26.33±1.53)%,组4的凋亡率明显高于前3组,差异有统计学意义(P<0.001)。流式细胞仪检测各组的凋亡率分别为(2.44±0.60)%、(2.59±0.85)%、(2.62±1.11)%和(5.22±0.40)%,组4的凋亡率明显高于前3组,差异有统计学意义(P<0.01),且G1期细胞增多,S期细胞减少。划痕实验显示各组细胞24 h的迁移距离分别为(196.88±39.13)、(163.06±21.28)、(225.49±23.42)和(77.41±6.07)μm,组4细胞的迁移距离小于前3组(P<0.05),迁移能力减弱。结论:以hsa-miR-491-3p为靶标的反义寡核苷酸能够抑制NCI-H446细胞增殖,诱导其凋亡,并降低其侵袭能力。

OX40信号在免疫应答中的作用

OX4 0是表达在活化T细胞上的一种糖蛋白 ,近年来发现OX4 0及其配体的作用可能与CD4 + T细胞的活化、T细胞与B细胞的相互作用以及Th1、Th2发育 ,还有某些疾病的发生、发展关系密切。