环磷酰胺诱导小鼠免疫功能低下模型建立与评价

目的建立环磷酰胺致免疫低下模型,评价不同剂量环磷酰胺对正常小鼠免疫抑制的作用效果,探究环磷酰胺免疫抑制小鼠的适宜剂量。方法采取不同时间给予正常小鼠腹腔注射不同剂量(40,80,100mg·kg^(-1)·d^(-1))的环磷酰胺,分别建立免疫低下模型,通过免疫脏器指数、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞、CCK-8法检测淋巴细胞增殖、ELISA法检测血清中IgM的表达水平探讨环磷酰胺对小鼠免疫功能的影响。结果腹腔注射环磷酰胺3个剂量组(40,80,100mg·kg^(-1)·d^(-1))的正常小鼠均能不同程度表现免疫脏器指数下降、单核巨噬细胞吞噬能力降低、淋巴细胞增殖能力及小鼠血清溶血素表达水平低下现象。结论正常小鼠腹腔注射不同浓度的环磷酰胺(40,80,100mg·kg^(-1)·d^(-1)),可建立免疫抑制模型,并且连续3d腹腔注射剂量为80mg·kg^(-1)·d^(-1)的环磷酰胺可以显著降低小鼠免疫功能,其效果最明显,适用于建立免疫低下模型。

RNAi双沉默Survivin和hTERT基因抑制人结肠癌SW480细胞增殖促进凋亡

目的探讨双向沉默Survivin和h TERT基因对结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响,为结肠癌的基因治疗提供实验依据。方法设计并构建能够稳定转录shRNA并可分别及联合干扰Survivin和h TERT分子表达的质粒,将其转染结肠癌SW480细胞后,分阴性对照组、空白质粒对照组、Survivin RNAi组、h TERT RNAi组和Survivinh TERT RNAi组。转染48h后TRAP-PCR-ELISA法检测端粒酶活性,RT-PCR法检测Survivin和h TERT mRNA的表达,Western blot检测Survivin和h TERT蛋白的表达,流式细胞仪及cck-8法分别检测细胞凋亡和细胞增殖的变化。结果 Survivin-h TERT RNAi组SW480细胞端粒酶活性明显下降(P<0.01),Survivin-h TERT RNAi组Survivin及h TERT的mRNA水平较正常对照组分别减低82.8%和73.6%(P<0.01),蛋白表达抑制率分别为79.2%和66.7%(P<0.01)。实验各组中Survivin-h TERT RNAi组细胞增殖抑制率和凋亡率最高,分别为43.6%±0.1%和39.2%±2.3%(P<0.01)。结论 Survivin和h TERT双干扰质粒可明显下调Survivin和h TERT蛋白的表达,抑制结肠癌SW480细胞的增殖,促进其凋亡。