潜伏结核感染者CD4＋T细胞miR-29家族、靶基因IFN-γ的表达及生物信息学分析

目的探讨潜伏结核感染和活动性缔结核感染对患者外周血CD4^＋T细胞内miR-29家族及其靶基因IFN-γ表达的影响。方法于2012年3-12月，在山东省潍坊市某两家医院选取调查对象并分为3组：活动性肺结核组（30例）、潜伏结核感染（LTBI）组（25例）和健康对照组（30名）。分离纯化3组受试者外周血中的CD4^＋T细胞；州核酸杂交与荧光定量PCR检测CD4^＋T细胞内miR-29a、miR-29b和miR-29c的表达；用定量PCR检测miR-29靶基因IFN-γ的表达；用TargetScan与PicTar联合预测miR-29家族的靶基因；用David数据库和Cytoscape软件对miR-29家族的预测靶基因进行皋因本体论（GO）和京都基因和基因组百科仝书（KEGG）生物通路富集分析。结果miR-29a、miR-29b和miR-29c在活动性肺结核组、LTBI组和健康对照组CD4^＋T细胞中的表达水平均不同（P〈0．05）：miR-29b和miR-29c在活动性肺结核组的表达（561．63±65．36，281．85±42．78）高于健康对照组（260．74±38．69，128．21±19．98），低于LTBI组（2030．29±321．68，620．93±79．14）；miR-29a在对照组的表达水平（913．95±104．73）高于活动性结核组（323．37±54．38），低于LTBI组（4782．13±567．81）。靶基凶IFN-γ在3组之间的表达水平亦不同（P〈0．05）：LTBI组（0．45±0．09）低于健康埘照组（1．00），而高于活动性结核组（0．11±0．03）。miRNA-29家族的预测靶基冈的GO功能富集于细胞外基质结构成分、转录调节活性等分子功能方面；在KEGG的通路数据库中，miR-29家族预测靶基因集合屁著富集于局部黏附信号通路、调节细胞骨架与mTOR信号通路等方面。结论LTBI和活动性结核感染明显增加了患者外周血CD4^＋T细胞内miR-29家族的表达，降低了其靶基因IFN-γ的表达，从而影响了信号通路等生物学过程。

人颗粒溶素对肝癌细胞SMMC-7721凋亡、线粒体跨膜电位及细胞色素C释放的影响

目的构建携带人颗粒溶素（GLS）的真核表达质粒pBudCE4．1／GLS并研究其表达后对肝癌细胞SMMC-7721凋亡，线粒体跨膜电位与细胞色素C转位的影响。方法将RT—PCR扩增出的人GLS编码基因克隆入pBudCE4．1载体中构建真核表达质粒pBudCE4．1／GLS并将其转染肝癌细胞株SMMC一7721，用RTPCR、免疫细胞化学检测GLS的表达；用Hoechst法及电镜检测细胞的凋亡状况；用荧光染料Mitocapture^TM检测线粒体跨膜电位、用Western blot法检测细胞色素C从线粒体的释放。结果成功构建了携带GLS的真核表达质粒pBudCE4．1／GLS；在转染的肝癌细胞株SMMC-7721中，从转录和翻译水平都检测到了目标基因GLS的表达产物；重组质粒转染SMMC-7721细胞后，细胞核染色质固缩，呈致密浓染的凋亡状态，线粒体膜跨电位下降并伴随有细胞色素C从线粒体至细胞质的释放。结论携带人GLS的真核表达质粒在肝癌细胞SMMC-7721中表达后有致细胞凋亡作用，引起线粒体跨膜电位下降与细胞色素C的释放可能是其诱导肿瘤细胞凋亡的途径之一。