动脉粥样硬化心底组织的冰冻切片与石蜡切片染色对比

目的探讨最适宜动脉粥样硬化心底组织的切片和染色方法。方法取载脂蛋白E基因敲除(Apolipoprotein E kNockout,ApoE-/-)小鼠心底组织,分为两组,分别进行冰冻切片与石蜡切片,对两种切片做油红O染色和苏木素-伊红(Hematoxylin-Eosin staining,H&E)染色。结果新鲜制备的冰冻切片结构完整,油红O染色效果比石蜡切片更清晰鲜明;当冰冻切片在-20 ℃冰箱存放1个月后,切片出现脂质易脱落、着色差的问题,保存3个月后效果更差。石蜡切片较冰冻切片更适用于H&E染色,切片形态结构清晰,室温存放3个月后形态结构依旧完整,易着色。石蜡切片的油红O染色着色效果差。结论对动脉粥样硬化心底组织进行冰冻切片后,应立即做油红O染色更适合观测其脂质堆积情况;随着存放时间的延长,易出现组织碎裂、脂质脱落、着色差的问题。石蜡切片适宜进行H&E染色,样品保存3个月,对切片组织结构未见可辨识的影响。

依折麦布长期干预对LDLR^(+/-)仓鼠高脂血症的影响及其对肝脏脂代谢基因的调控

目的探讨依折麦布长期干预调控脂代谢的效果和对肝脏脂代谢基因的调控。方法雄性低密度脂蛋白受体杂合子(LDLR^(+/-))仓鼠随机分为两组:空白对照组和依折麦布组[25 mg/(kg·d)]。动物高脂饮食同时给药20周后,收集血浆、肝脏等组织样本。分析血浆中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、总胆汁酸(TBA)、非酯化脂肪酸(NEFA)和谷草转氨酶(AST)水平;检测肝脏中TC和TG水平;借助KTA快速蛋白液相色谱系统分离脂蛋白组分并检测各组分的TC和TG水平;采用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测脂代谢相关基因和蛋白的表达。结果依折麦布长期干预显著下调LDLR^(+/-)仓鼠血浆中的TC、TG、TBA、NEFA和AST水平以及载脂蛋白B(ApoB)蛋白表达水平,但对脂蛋白脂肪酶(LPL)的蛋白表达和活性以及前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)的蛋白水平无影响;在肝脏中,依折麦布显著降低了TC水平,但对TG无显著影响;在基因水平上,依折麦布显著上调肝脏中甾醇调节元件结合蛋白2(SREBP-2)和PCSK9的表达,同时下调了胆固醇7α羟化酶A1(CYP7A1)、三磷酸腺苷结合盒转运体G5(ABCG5)、ABCG8和肝X受体α(LXRα)的表达。结论在LDLR^(+/-)仓鼠中,依折麦布长期干预可显著降低高脂血症,并展现出对多种肝脏脂代谢相关基因表达调控的复杂性。

一种生物膜表面唾液酸的染色和定量方法

目的:建立一种细胞、组织和器官生物膜表面唾液酸的染色及定量方法。方法:设计平行实验,确定最佳染色条件。将接种在盖玻片上的细胞用PBS洗涤后,加高碘酸钠(NaIO4,1 mmol/L)于4℃轻度选择性氧化生物膜表面的唾液酸在C-7位成醛;随后,加入甘油工作液终止氧化,再用冷的PBS清洗;再加入荧光素-5-氨基硫脲(FTSC,100μmol/L)荧光染料与生成的醛基避光反应,并采用PBS洗涤;最后,采用DAPI染核并采用PBS-T清洗,甘油封片、拍照,采用图像处理软件量化分析。组织切片经多聚甲醛固定后,按照上述优化后的步骤染色。结果:平行实验结果显示,FTSC染色40 min细胞表面唾液酸的成像效果最佳;3种不同的细胞经唾液酸染色后均呈现强的绿色荧光,经100μmol/L H_(2)O_(2)处理24 h后,荧光强度显著降低(P<0.01);该方法可原位检测小鼠组织切片和动脉内壁的唾液酸水平。假阳性结果可通过纳入仅采用FTSC处理组排除或扣除背景。结论:该方法可对不同细胞、组织和器官表面的唾液酸进行原位染色及定量分析。

靶向PCSK9的降脂策略

前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proproteinconvertasesubtilisin/kexintype 9,PCSK9)是一种主要在肝脏表达的分泌型丝氨酸蛋白酶,其在胆固醇稳态调节方面扮演着重要的角色。分子机制研究表明,PCSK9可与低密度脂蛋白(LDL)受体(LDLR)结合,并诱导其在细胞内降解,从而降低肝脏LDLR介导的LDL摄取并诱发高脂血症。PCSK9抑制剂则可有效抑制PCSK9介导的LDLR降解,从而下调高脂血症和心血管疾病风险。虽然PCSK9单克隆抗体已成功应用于临床降脂治疗,但花费—受益的不匹配导致其不适用于初级预防。近年来,靶向PCSK9的降脂策略取得了显著进展。这些策略包括PCSK9干扰RNA、基因编辑、人工合成的小分子和天然来源的化合物。本文主要对PCSK9的调控机制和基于PCSK9设计的降脂新策略进行综述,期待为PCSK9抑制剂的研发和临床转化提供借鉴。