音速波状蛋白与成纤维细胞生长因子-8联合诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为多巴胺能神经元

目的探讨音速波状蛋白(SHH)与成纤维细胞生长因子-8(FGF-8)促进大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外定向分化为多巴胺(DA)能神经元的作用。方法体外分离、扩增和鉴定大鼠BMSCs。碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)预诱导24h后,SHH与FGF-8联合诱导大鼠BMSCs向DA能神经元分化12d,免疫细胞化学和免疫荧光法检测神经巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、酪氨酸羟化酶(TH)、囊泡单胺转运体(VMAT2)、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)2、细胞周期蛋白(Cyclin)B1的表达。结果诱导后大鼠BMSCs能分化为具有典型神经元形态的细胞,PCNA、CDK2、CyclinB1表达降低,高表达Nestin、NSE、TH和VMAT2,低表达GFAP。诱导后大鼠BMSCs与对照组BMSCs的TH阳性率分别为(46.7±3.3)%和(3.6±2.2)%(P<0.01)。结论 SHH与FGF-8可以在体外诱导大鼠BMSCs定向分化为DA能神经元样细胞。

Xc-系统介导硫化氢在骨髓间充质干细胞诱导分化的神经元对抗缺氧诱导凋亡损伤中的作用

目的:探讨NaHS预处理在骨髓间充质干细胞(BMSCs)诱导分化的神经元对抗缺氧诱导凋亡中的保护作用及机制。方法:体外分离培养、扩增大鼠BMSCs;诱导其分化为神经元,建立体外缺氧诱导细胞凋亡模型,给予或不给予细胞NaHS预处理;缺氧诱导后用MTT法检测细胞增殖,Hoechst33258染色检测细胞凋亡;检测细胞内GSH的含量;Western blot检测Xc-系统的表达变化。结果:NaHS预处理后细胞存活率明显提高、凋亡现象明显减少。细胞GSH的含量明显增加,xCT的表达也明显增加。结论:H_2S对BMSCs诱导分化的神经元对抗缺氧诱导凋亡损伤中有保护作用,其保护作用可能是通过Xc-系统实现的。

bFGF联合香丹注射液诱导间充质干细胞向神经元样细胞分化

目的研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)联合香丹注射液诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向神经元样细胞分化的可行性及分化后细胞功能的改变。方法体外分离、扩增和鉴定大鼠BMSCs;在使用Neurobasal medium培养的同时,采用bFGF预诱导2 d后,实施香丹注射液诱导3 d。免疫细胞化学方法鉴定诱导后细胞的性质,计数阳性细胞阳性率;荧光分析法测定诱导后细胞培养上清液中儿茶酚胺含量。结果经过诱导,大鼠BMSCs能够部分分化为神经元样细胞。诱导后免疫细胞化学染色呈神经巢蛋白(Nestin)、微管相关蛋白-Ⅱ(MAP-Ⅱ)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、酪氨酸羟化酶(TH)阳性,阳性表达率分别为(71.5±4.6)%,(43.05±9.6)%,(49.9±4.3)%和(30.4±5.3)%;SHH配体蛋白SMO在细胞中高表达,并且与对照组比较差异具有统计学意义。细胞上清液中儿茶酚胺类物质(CA)含量为(42.24±2.42)μg/L。结论 bFGF+香丹注射液组合能够诱导大鼠BMSCs分化为DA能神经元样细胞。