口罩病毒提取法检测呼吸道病毒的可行性及精确性验证

目的 探讨一种通过提取口罩残留病毒来检测呼吸道病毒的新方法,并且验证其可靠性和灵敏度。方法将不同稀释浓度的新型冠状病毒类似物--鸡新城疫病毒La Sota株及传染性支气管炎病毒H120株的稀释液通过呼吸模拟器喷洒至医用外科口罩及N95口罩,在室温环境中分别静置2 h和12 h,利用普通PCR技术及实时荧光定量PCR技术检测鸡新城疫病毒N基因条带和传染性支气管炎病毒NP基因条带及其扩增循环数(CT);对比不同存留时间下口罩中最低可检测病毒浓度及病毒含量。结果 不同时间存留的口罩均可以检出新型冠状病毒类似物--鸡新城疫病毒La Sota株及传染性支气管炎病毒H120株的基因条带,且病毒总RNA在10 pg~10 ng的范围内均有较好的扩增曲线。2 h内提取的病毒残留物,普通医用外科口罩和N95口罩检测N基因、NP基因的CT均值分别为22.55±0.34、23.70±0.50和22.86±0.31、24.04±0.34;但12 h后只有部分可被检测到,且两种口罩在相同时间内CT值无统计学差异(P=0.452、P=0.355)。口罩中最低可检测病毒的稀释浓度为1∶800,可检测残存病毒数量约为6.75×10^(3)个。结论 通过检测2 h内口罩中残留病毒来筛查冠状病毒的方法是可行的,且适用于医用外科口罩及N95口罩,该方法可以用于呼吸道病毒的初步筛查。