非洲猪瘟病毒p22蛋白表达、多克隆抗体制备及间接ELISA方法的建立

【目的】试验旨在表达与纯化非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的结构蛋白p22,将其作为包被抗原建立ASFV抗体的间接ELISA检测方法,用于诊断非洲猪瘟。【方法】将ASFV p22编码基因KP177R的截短体(24―145位氨基酸)克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,将重组质粒pET-32a-p22转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经0.1 mmol/L IPTG诱导表达5 h,利用镍柱亲和纯化p22蛋白,并进行Western blotting鉴定。利用p22蛋白免疫BALB/c小鼠制备抗血清,并以含p22全长基因的真核表达质粒pCAGGS-EGFP-fp22转染HEK293T细胞为抗原基质,利用间接免疫荧光(IFA)鉴定抗血清的反应性。以重组p22蛋白为包被抗原,优化最佳抗原包被浓度、待检血清稀释度、封闭条件、抗原抗体反应时间、酶标二抗工作浓度等参数,建立ASFV抗体间接ELISA检测方法,并对临床猪血清样品进行检测。【结果】ASFV p22截短蛋白在大肠杆菌中高水平表达,蛋白产量为0.85 mg/100 g菌体;p22蛋白具有良好的免疫原性,小鼠血清抗体效价为1∶12800。本研究建立的ELISA方法(p22-ELISA)的最佳抗原包被浓度为0.125μg/孔,最佳待检血清稀释度为1∶800,最佳酶标二抗稀释度为1∶10000;阴阳性临界值为0.384;与CSFV、PRRSV、PCV2、PRV等抗体阳性猪血清无交叉反应,说明特异性好;批内与批间变异系数均低于10%,表明重复性好。利用p22-ELISA方法检测了263份临床猪血清样品,与商品化ASFV抗体ELISA检测试剂盒的符合率为97.7%。【结论】本研究基于原核表达的p22截短体蛋白建立了用于检测ASFV抗体的间接ELISA方法,该方法特异性强、灵敏度高、重复性好,为ASFV感染诊断和流行病学调查提供了技术支撑。

日粮添加槲皮黄酮对蛋鸡生产性能、蛋品质及蛋黄抗氧化性能的影响

本文旨在研究日粮添加不同水平槲皮黄酮对蛋鸡生产性能、蛋品质及蛋黄抗氧化性能的影响。试验选取健康、产蛋率相近的70周龄罗曼褐壳蛋鸡720只,随机分成4组,每组6个重复,每个重复30只。基础日粮为玉米-豆粕型饲粮,试验日粮分别在基础日粮中添加0.1、0.2和0.4 g/kg槲皮黄酮,预饲期1周,试验期为4周。结果发现:日粮添加0.2 g/kg槲皮黄酮较0.1和0.4 g/kg槲皮黄酮组显著提高了蛋鸡平均日采食量(P<0.05),且日粮槲皮黄酮水平对蛋鸡平均日采食量的影响呈现显著的二次曲线效应(P<0.05)。随着日粮槲皮黄酮添加水平的增加,蛋黄重量表现为线性增加(P<0.05);其中0.2 g/kg槲皮黄酮组较0.1和0.4 g/kg槲皮黄酮组显著提高了蛋壳重量(P<0.05);随着日粮槲皮黄酮水平的增加,蛋黄重量显著线性增加(P<0.05)。蛋黄中胆固醇的含量随着日粮槲皮黄酮添加水平的增加线性增加(P<0.05),其中0.2和0.4 g/kg槲皮黄酮组蛋黄胆固醇含量显著高于对照组和0.1 g/kg槲皮黄酮组(P<0.05),同时0.2和0.4 g/kg槲皮黄酮组鸡蛋总胆固醇含量显著高于对照组和0.1 g/kg槲皮黄酮组(P<0.05)。随着日粮槲皮黄酮添加水平的增加,蛋黄中丙二醛的含量显著线性降低(P<0.05)。与对照组相比,0.1、0.2和0.4 g/kg槲皮黄酮组显著降低了第7、14和28天蛋黄丙二醛的含量(P<0.05)。鸡蛋贮存28 d和80 d后,日粮添加0.1、0.2和0.4 g/kg槲皮黄酮较对照组显著降低了蛋黄胆固醇的含量(P<0.05),蛋黄胆固醇含量与日粮槲皮黄酮水平呈现显著的线性和二次曲线关系(P<0.05)。0.4%g/kg槲皮黄酮组较其他各组蛋黄丙二醛含量显著降低(P<0.05)。日粮槲皮黄酮水平与贮存时间对蛋黄丙二醛含量的影响具有显著的交互作用(P<0.05)。结果提示:在本试验条件下,蛋鸡采食含槲皮黄酮日粮可以提高鸡蛋新鲜度,延长保质期。综合蛋鸡生产性能和蛋黄氧化稳定性,日粮中槲皮黄酮适宜添加水平为0.2 g/kg。

我国畜禽肉食品安全问题分析及对策

随着生活水平的提高,畜禽肉食品安全问题受到越来越多人的关注。我国畜禽肉的食品安全问题比较多,比如兽药残留、重金属污染,以及加工过程中的"掺假"、微生物污染等。这些问题都直接或间接通过食物链对人体健康造成危害。分析我国畜禽肉食品存在的各种食品安全现状、问题来源,并针对存在的问题提出解决途径。

一例疑似鸡传染性支气管炎诊断

潍坊市某养禽场送检了一批临床疑似传染性支气管炎的病鸡样品,临床表现为拉稀、消瘦、采食量下降,剖检发现肾脏肿大,花斑肾等症状。采集气管、肺脏进行实验室检测,通过荧光PCR方法对其进行检测,确诊为鸡传染性支气管炎。

微生态制剂(昌健素)对肉鸡生产性能的影响

本文旨在研究微生态制剂(昌健素)对肉鸡生产性能的影响。选取1日龄健康AA肉鸡50000只,随机分为5个处理,每个处理4个重复,每个重复2500只。抗生素组:阿莫西林;抗生素(阿莫西林)+昌健素组;昌健素组;肽菌素组;对照组。微生态制剂(昌健素、肽菌素)均按照用5d停4d的程序添加,直至出栏。试验分1~10d、11~28d和29~40d三个阶段进行。记录并计算各阶段各处理肉鸡的平均日增重、平均日采食量、成活率等,并于试验第6、28 d测定肉鸡的新城疫抗体效价。试验结果表明,与抗生素组和对照组相比,昌健素显著提高肉鸡的成活率、降低肉鸡的料重比(P<0.05);与对照组相比,昌健素能显著提高1~10d、11~28d肉仔鸡的体增重(P<0.05),且作用效果与抗生素合用无显著关系(P>0.05);同时,昌健素还能显著提高6d、28d肉鸡的新城疫抗体效价(P<0.05)。总之,昌健素能提高肉鸡的生产性能和免疫力。

微生态制剂对肉鸡肌肉品质影响的研究

目的研究微生态制剂(昌健素)对肉鸡肌肉化学成分的影响。方法选取1日龄健康AA肉鸡180只,随机分为3个处理,每个处理3个重复,每个重复20只。处理1为空白对照,自由饮用清水;处理2在饮水中按0.1%添加10%氟苯尼考,处理3在饮水中按0.1%添加昌健素。结果昌健素可增加肉鸡肌肉的滴水损失和熟肉率(P<0.05);增加肌肉中粗蛋白和粗脂肪的含量、降低水分的含量(P<0.05);提高41日龄肉鸡肌肉中铁和锌的含量,降低钙和锰的含量(P<0.05);降低肉鸡胸肌中饱和脂肪酸的含量(P<0.05);提高肌肉中总氨基酸、必需氨基酸和鲜味氨基酸的含量(P<0.05);增加肉鸡肌肉中丙二醛(MDA)的含量(P<0.05)。结论微生态制剂昌健素的添加能改善肉鸡的肌肉品质。

浅析信息化在财务会计工作中的应用

企业财务会计工作对于企业的发展和各项经济活动的进行都有着重要的影响作用,在企业各项活动的开展中都有着一定的影响。随着全球信息化的发展,信息技术在企业当中的应用成为了当今经济发展的趋势。利用信息技术进行财务会计工作,是经济进步发展的重要措施,对于企业发现也有着重要的推动作用。能够有效的提升会计工作的安全性和效率,保证财务会计工作的质量,有效的推动了企业的发展。