抑制Akt信号通路对病理性瘢痕成纤维细胞生长、细胞周期及凋亡的影响

目的:研究抑制蛋白激酶B(Akt)信号通路对病理性瘢痕成纤维细胞生长、细胞周期及凋亡的影响。方法:体外分离培养人病理性瘢痕成纤维细胞,用不同浓度的Akt信号通路抑制剂LY294002处理后,采用MTT法检测细胞增殖情况,计算IC50。用IC50浓度的LY294002处理病理性瘢痕成纤维细胞后,流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况,Western blot检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Cleaved Caspase-9)、Akt、磷酸化的Akt(p-Akt)水平。结果:不同浓度的LY294002作用后细胞在570 nm处的吸光度值(A值)降低(P<0.001),IC50为30 mg/L。30 mg/L LY294002作用后细胞被阻滞在G0/G1期(P<0.001)。30 mg/L LY294002作用后细胞凋亡率高于0 mg/L作用组,细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9表达水平高于0 mg/L作用组,而p-Akt表达水平明显低于0 mg/L作用组(P<0.001)。结论:抑制Akt信号通路能够抑制病理性瘢痕成纤维细胞生长,阻滞细胞周期,促进细胞凋亡,促进细胞中Caspase-3、Caspase-9活化。

程序性细胞死亡因子4过表达对增生性瘢痕成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨程序性细胞死亡因子4(PDCD4)过表达对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及凋亡的影响。方法:分离培养增生性瘢痕成纤维细胞,分别转染pEGFP-PDCD4、pEGFP,以未转染细胞为空白对照,采用qRT-PCR和Western blot法检测细胞中PDCD4水平确定转染效果。MTT法检测3组细胞增殖活性,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot法检测PTEN、Bax、Bcl-2表达水平。结果:与空白对照组和pEGFP组相比,pEGFP-PDCD4组细胞中PDCD4表达水平升高;细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,同时细胞中PTEN、Bax表达水平升高,Bcl-2表达水平下降(P<0.05)。结论:过表达PDCD4可抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与上调细胞中PTEN、Bax的表达,下调Bcl-2的表达有关。

转染DNMT1 siRNA对瘢痕疙瘩成纤维细胞生长的影响

目的:探讨以siRNA干扰DNA甲基转移酶1(DNMT1)表达对瘢痕疙瘩成纤维细胞生长的影响及其机制。方法:采用qRT-PCR和Western blot检测体外培养的正常皮肤细胞和瘢痕疙瘩成纤维细胞中DNMT1 mRNA和蛋白的表达情况。培养瘢痕疙瘩成纤维细胞,分别转染阴性对照siRNA和DNMT1 siRNA,以不做任何处理的细胞为对照,MTT法检测各组细胞的增殖情况,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,Western blot检测细胞中DNMT1蛋白的表达,qRT-PCR检测细胞中DNMT1、PCNA、Bcl-2、Bax和TGF-β1 mRNA的表达情况。结果:DNMT1 mRNA和蛋白在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达水平较正常皮肤细胞升高(P <0. 05)。转染DNMT1 siRNA后细胞的增殖能力减弱,凋亡增强,且DNMT1蛋白和DNMT1、PCNA、Bcl-2和TGF-β1 mRNA表达水平均降低,而Bax mRNA表达水平升高(P <0. 05)。结论:DNMT1在瘢痕疙瘩成纤维细胞中高表达,干扰其表达能够明显抑制细胞的增殖,促进细胞凋亡,其作用机制可能与上调Bax和下调PCNA、Bcl-2、TGF-β1表达有关。

眼睑美容切口可以同时矫正眼睑及中面部松垂吗?

探讨眉下联合下睑缘切口矫正上睑区及中面部软组织松垂的临床应用效果。2016年12月至2017年12月潍坊市益都中心医院医学美容科收治眼睑及中面部软组织松垂患者76例。均采取眉下切口及下睑缘切口进行手术,评估手术效果和并发症情况,随访1年。总体满意率为96.05%(73/76)。提示眼睑美容切口具有创伤小、安全性高的优点,可以作为眼睑及面中部老化手术的切口选择之一。