实时直接分析-高分辨质谱法快速筛查乳粉中抗生素残留

建立了实时直接分析-高分辨质谱(DART-Q-Orbitrap HRMS)法快速检测乳粉中抗生素残留。通过优化DART载气类型、离子化温度、进样速度等条件,采用QuickStrip(QS)样品卡模块,以氦气作为载气,离子化温度400℃,进样速度1 mm/s,使用四极杆-离子回旋轨道阱高分辨质谱仪(Q-Orbitrap)在正离子模式下直接进样分析。结果表明,该方法能够完成16种常见磺胺类、喹诺酮类和大环内酯类抗生素的筛查检测,筛查限浓度水平为100μg/kg,回收率在72.5%~106.7%之间,假阴性率≤5%,且通过实际样品检测验证了此筛查方法的可行性。该方法前处理简单、分析速度快、结果可靠,能够满足乳粉中抗生素残留快速筛查分析的要求。

以色列急性麻痹病毒Taq Man荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用

为建立以色列急性麻痹病毒(IAPV)荧光定量RT-PCR检测方法,本研究根据GenBank中IAPV RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)基因保守区域序列设计了一对特异性引物和一条特异性探针,以体外转录制备的重组质粒标准品为模板,经过反应条件优化,建立了IAPV荧光定量RT-PCR检测方法,并对其进行了特异性、敏感性、重复性试验;利用所建立的方法对70份福建地区临床疑似IAPV感染的蜜蜂样品进行检测,并对阳性样品进行测序验证。结果显示,荧光定量RT-PCR方法的最佳引物和探针浓度分别为0.25μmol/L和0.20μmol/L,最佳退火温度为61℃。该方法仅对IAPV出现阳性扩增信号,对蜜蜂克什米尔病毒、蜜蜂慢性麻痹病毒、蜜蜂残翅病毒、蜜蜂急性麻痹病毒、蜜蜂黑蜂王台病毒、蜜蜂囊状幼虫病毒等6种病毒均未出现扩增,特异性较强;该方法对重组质粒标准品的最低检测限为9.7拷贝/μL,比普通RT-PCR敏感性高约100倍;该方法批内及批间变异系数均小于1.5%,重复性好。利用该方法和普通RT-PCR方法分别对70份临床样品进行检测,结果显示,两种方法的阳性检出率分别为31.4%(22/70)和27.1(19/70),二者的符合率为95.9%。本研究首次建立的IAPV Taq Man荧光定量RTPCR检测方法快速、敏感,检测结果准确可靠,为IAPV的流行病学调查及其分子生物学的快速检测奠定了基础。

检测蜜蜂急性麻痹病毒TaqMan实时荧光RT-PCR方法的建立和初步应用

【背景】蜜蜂急性麻痹病毒(Acute Bee Paralysis Virus,ABPV)是一种高毒力的蜜蜂病毒,可以引起蜜蜂的大批死亡和蜂群衰竭。【目的】建立一种快速、灵敏的ABPV实时荧光RT-PCR检测方法。【方法】根据ABPV衣壳蛋白基因保守序列设计引物和探针,通过对引物、探针浓度和退火温度等反应条件进行优化,建立基于TaqMan探针检测ABPV的实时荧光RT-PCR方法,并对方法的灵敏性、特异性和稳定性进行验证。【结果】ABPV实时荧光RT-PCR检测方法在9.8×101-9.8×108 copies/μL之间呈现良好的线性关系,线性相关系数R2为0.998,扩增效率为103.8%。该方法的检测灵敏度为9.8copies/μL;对其他蜜蜂病毒不发生交叉反应,具有良好的特异性;重复性试验结果显示组内和组间的变异系数分别为0.19%-0.80%和0.57%-1.07%,重复性良好。对2018年-2019年在福建地区采集的70份蜜蜂样品进行ABPV检测,阳性率为2.86%。【结论】建立的ABPV实时荧光RT-PCR检测方法能用于该病的实验室检测、流行病学调查和疫情监测。