兔胰腺移植瘤纳米刀、冷冻、射频的对比研究

目的通过研究胰腺移植瘤不可逆电穿孔(irreversible electroporation,IRE,俗称"纳米刀")、冷冻、射频术后的肿瘤凋亡、机体免疫反应及血管生成因子情况,观察不同微创技术对胰腺移植瘤的抗肿瘤效果。方法兔胰腺移植瘤模型8只,并随机分为模型对照组、纳米刀治疗组、冷冻治疗组及射频治疗组,每组2只。动态观察治疗过程中新西兰大白兔的生命体征,于治疗后第1天全部处死,分离血浆及血清进行检测,H-E染色观察移植瘤组织形态学改变,免疫组织化学方法检测Bcl-2、HSP70和VEGF在胰腺癌移植瘤中的表达,Tunnel法检测细胞凋亡。结果各组实验兔术后均存活。肉眼观肿瘤边界清晰,触之质地较硬,各组治疗区域可见明显凝固性坏死改变。H-E染色显示治疗组坏死区域和正常区域边界清晰,以纳米刀组为著。各组坏死边缘区可见大量红细胞以及炎症细胞浸润,冷冻及射频术区仍可见部分存活细胞。Tunnel结果显示,射频治疗可以明显增加胰腺癌细胞凋亡。与模型对照组相比,各治疗组血浆的Caspase-3、TNF-α及VEGF水平升高;术区Bcl-2及VEGF因子表达降低,HSP70表达升高。术后血清学检测结果显示仅纳米刀治疗后新西兰大白兔的肌酸激酶水平升高,冷冻及射频组未见升高;肌钙蛋白、肝肾功能及血清淀粉酶未见异常。结论纳米刀、冷冻、射频治疗兔胰腺移植瘤时,均可能通过诱导细胞凋亡、产生特异的抗肿瘤免疫效应及抑制血管生成来抑制兔胰腺移植瘤的生长,且治疗方法安全、有效。纳米刀在激发机体肿瘤免疫和保护周围重要脏器上有一定的优势。

不可逆电穿孔消融技术治疗兔肌肉VX_2移植瘤的研究

目的:通过观察不可逆电穿孔(irreversible electroporation,IRE)消融技术应用于治疗兔肌肉VX_2移植瘤的疗效及安全性,以期为该技术应用于临床提供可靠的实验依据。方法:建立兔肌肉VX_2移植瘤模型(10只),随机分为IRE治疗组(8只)和对照组(2只,不予以IRE治疗)。分别于IRE治疗的当日处死对照组的兔子、治疗后第1、3、5和14天时分批处死IRE治疗组的兔子(每组2只),同时收集血浆和血清;肿瘤组织行HE染色,并采用免疫组织化学法检测Bcl-2、热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在肌肉VX_2移植瘤中的表达情况;应用TUNEL法检测移植瘤组织中细胞凋亡的情况;ELISA法检测血浆中caspase 3、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和VEGF的分泌情况,以及血清中实验兔肝肾功能指标、肌酸激酶-MB同功酶(creatine kinase-MB isoenzyme,CK-MB)及心肌肌钙蛋白Ⅰ(cardiac troponinⅠ,CTnⅠ)的表达水平。结果:HE染色结果显示,IRE治疗组中治疗区域和正常组织区域边界清晰,IRE治疗后第3天时,移植瘤组织的边缘区可见大量红细胞以及炎性细胞的浸润,第14天时术区肌肉组织出现纤维化。ELISA法检测结果显示,IRE能有效地增加兔子机体中caspase 3和TNF-α的分泌水平(P值均<0.01),而降低VEGF的分泌水平。同时IRE治疗后,能够降低术区肿瘤组织中Bcl-2和VEGF的阳性表达率(P值均<0.01),但HSP70的表达水平不一。TUNEL检测结果显示,IRE治疗组移植瘤组织中细胞的凋亡率明显增加。术后实验兔的肾功能未见明显异常,谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)以及CK-MB的表达水平有不同程度的升高,但CTnⅠ的水平未见升高。结论:IRE能够通过诱导细胞凋亡、产生特异的抗肿瘤免疫效应及抑制血管生成来抑制肌肉移植瘤的生长,是一种安全且有效的肌肉肿瘤局部治疗的微创手段。

不可逆电穿孔治疗胰腺癌的动物实验研究

目的观察胰腺癌移植瘤不可逆电穿孔（IRE）术后肿瘤细胞凋亡情况，探讨IRE技术对胰腺癌移植瘤的抗肿瘤效果及其安全性。方法12只荷载VX2胰腺癌移植瘤的新西兰大白兔随机分为IRE治疗组（10只）和对照组（2只）。治疗组胰腺移植瘤行IRE治疗，对照组不进行处理。治疗后第1、3、5、7、14d各处死2只，取血分离血浆或血清检测血肝肾功能及淀粉酶、肌酸激酶、caspose．3、TNF-α、VEGF、肌钙蛋白I水平。取移植瘤行常规病理学检查，采用TUNEL法检测细胞凋亡，免疫组化法检测瘤组织Bcl-2、HSP70、VEGF表达。结果对照组及IRE1、3、5、7、14d组移植瘤平均最大径分别为2．0、2．0、1．8、1．7、1．5、1．3cm。治疗组移植瘤的治疗坏死区域和正常区域边界清晰，坏死区边缘可见大量红细胞及炎症细胞，治疗后14d治疗区边缘出现肿瘤再生迹象。对照组瘤组织及IRE1、3、5、7、14d组移植瘤治疗区边缘组织TUNEL阳性细胞数分别为52、78、98、135、196、217个／每200倍视野，随时间延长而增加；Bcl-2阳性细胞百分数分别为39．3％、37．5％、51．9％、17．7％、31．O％、34．5％，总体呈下降趋势；HSP70阳性细胞百分数分别为12．6％、33．6％、27．4％、24．3％、31．4％、23．4％，术后均升高；VEGF阳性细胞百分数分别为28．3％、27．2％、12．3％、8．7％、32．2％、12．2％，术后有所下降；血caspase-3水平分别为0．185、0．345、0．312、0．210、0．558、0．173μg／L，术后不同程度升高，7d达峰值；血TNF-α水平分别为24．48、60．54、61．83、28．59、44．71、64．78ng／L，术后维持在较高水平，14d达峰值；血VEGF水平分别为75．18、123．76、178．66、58．2、68．68、64．09ng／L，术后3d达峰值，之后下降；血淀粉酶活性于术后1d升高，3dYF始下降，14d恢复正常；血肌酸激酶有不同程度升高；肝肾功能均未见明显异常；血浆肌钙蛋白I水平在正常范围内。结论IRE通过诱导细胞凋亡、产生特异抗肿瘤免疫效应及抑制血管生成来抑制胰腺移植瘤的生长，治疗方法安全、有效。

兔肌肉移植瘤纳米刀、冷冻、射频消融的对比实验研究

目的探讨肌肉移植瘤纳米刀(IRE)、冷冻、射频消融术后的肿瘤凋亡、机体免疫及血管生成因子情况,观察不同微创技术对肌肉移植瘤的抗肿瘤效果,为临床应用提供一定的实验依据。方法兔肌肉移植瘤模型8只,并随机分为正常对照组、纳米刀治疗组、冷冻治疗组及射频治疗组,每组2只。动态观察治疗过程中新西兰大白兔的生命体征以及治疗后并发症,术后24 h全部处死,分离血浆及血清检测,取瘤块包埋切片,HE染色,免疫组织化学方法检测Bcl-2、HSP70和VEGF在肌肉移植瘤中的表达,并运用Tunel法检测细胞凋亡。结果肉眼观肿瘤表面血管丰富,触之质地软;各组术后治疗区域可见明显凝固性坏死改变,冷冻及射频术后临近肌肉组织充血水肿明显。HE染色显示纳米刀组治疗区域边界清晰,冷冻及射频术区仍可见部分存活细胞。Tunel结果显示纳米刀治疗组可以明显增加肿瘤细胞凋亡,各治疗组均可通过升高血浆Caspase-3水平及降低术区Bcl-2表达促进肿瘤组织凋亡,升高血浆TNF-α水平激发机体抗肿瘤免疫,同时促使血浆VEGF因子分泌短期内升高;肿瘤组织术区边缘HSP70及VEGF因子表达水平各组不一。术后血清学检测结果显示各组治疗后新西兰大白兔的肌酸激酶水平升高,CTn I及肝肾功能未见异常。结论纳米刀、氩氦刀冷冻、射频均能够通过直接消融、诱导细胞凋亡、产生特异的抗肿瘤免疫效应来抑制兔肌肉移植瘤的生长,且治疗方法安全、有效。纳米刀在诱导细胞凋亡、周围重要脏器的保护及治疗时间短均有明显优势,为其进一步的临床应用提供了动物实验依据。