再发性低血糖致幼鼠脑损伤的实验研究

目的探讨再发性低血糖幼鼠脑Caspase-3表达及神经元变性的动态变化。方法将48只15日龄C57BL/6野生型小鼠,分为正常对照组(n=8)及低血糖组(n=40),再分为低血糖后12h,24h,48h,72h组,每组10只)。低血糖组给予短效胰岛素腹腔注射3次,每次剂量为5U/kg。采用免疫组化方法观察小鼠脑内caspase-3表达的动态变化;FJB染色观察小鼠脑内神经元变性的时程及分布情况。结果再发性低血糖后12h幼鼠脑内caspase-3表达即增多,24h达高峰,至72h仍高于正常对照组;开始阳性染色主要位于细胞质,以后逐渐向细胞核转移,caspase-3表达最强的部位是海马齿状回,皮质次之,海马CA1区仅见少量caspase-3阳性细胞。再发性低血糖后12h,脑内即可见FJB阳性细胞,24h及48hFJB阳性细胞逐渐增多,至72h阳性细胞最多,染色最强;从分布上看,纹状体内FJB阳性细胞数最多(尤以枕部皮质与纹状体交界处为著),皮质次之,海马回仅见少量FJB阳性细胞。结论再发性低血糖可致幼鼠脑损伤,神经元凋亡与坏死并存,易损部位为海马齿状回、枕部皮质与纹状体交界处,以选择性神经元死亡为主。

新生大鼠缺氧缺血后不同脑区神经元变性的动态观察

目的:观察新生大鼠缺氧缺血(H I)后不同脑区神经元变性的动态变化,探讨其与星形胶质细胞反应的关系。方法:采用F luoro-Jade B(FJB)染色法及免疫组化法分别观察变性神经元荧光染色强度及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的动态变化。结果:正常新生大鼠各脑区内均未见FJB阳性细胞,GFAP呈弱表达。H I后1 d即可见FJB阳性细胞,3 d阳性细胞增多,5 d达高峰,以纹状体受累最重,皮质次之,海马各区易损顺序为CA1、CA4、CA2、CA3、齿状回。GFAP表达的强度与FJB阳性细胞数密切相关。结论:新生大鼠H I后脑易损部位为纹状体、皮质、海马,FJB染色是一种标记变性神经元的有效方法,反应性胶质细胞增生是应答神经元损伤的结果。

葡萄糖转运蛋白-1和-3在缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑内表达的变化及意义

目的探讨缺氧缺血性脑损伤(H IBD)后脑内负责葡萄糖转运的两个重要蛋白质葡萄糖转运蛋白-1(GLUT-1)与葡萄糖转运蛋白-3(GLUT-3)表达的变化,揭示H IBD后脑内能量衰竭的发病机制。方法将30只7日龄W istar大鼠随机分为正常对照组(n=5)、假手术对照组(n=5)和H IBD组(n=20)。H IBD组大鼠模型的制备参照R ice。方法结扎右侧颈总动脉后8%低氧暴露1 h。假手术对照组只分离右侧颈动脉,不予结扎和缺氧。缺氧缺血后1,3,5,10 d各处死5只H IBD大鼠,免疫组化方法检测大鼠脑内GLUT1及GLUT3表达,并与对照组和假手术组比较。结果正常新生大鼠脑内微血管即可见GLUT1表达。H IBD后1 d,缺血侧半球GLUT1表达略有增加,3 d达高峰,至5 d时仍高于正常,10 d基本恢复正常水平。H IBD后1 d,GLUT3表达无明显变化,3 d时GLUT3表达已明显减少,5 d时进一步减少,10 d时仍显著低于对照组。GLUT3表达减少最显著的部位为海马CA1区。结论H IBD后脑内GLUT1和GLUT3的表达异常可导致脑能量代谢途径改变,加重缺氧缺血后神经元的损伤及影响损伤神经元的修复。

IGF-1和FGF-2对神经母细胞瘤细胞分化及SOCS表达的影响

目的研究胰岛素样生长因子-(1IGF-1)与碱性成纤维细胞生长因子(FGF-2)对神经细胞增殖与分化的共同作用,并探讨SOCS基因表达与二者作用的关系。方法选用人类神经母细胞瘤SK-N-MC细胞系作为神经细胞的体外模型,分别用IGF-1,FGF-2及联合应用IGF-1和FGF-2处理细胞,于处理后24、48和72h分别观察细胞数量、形态学变化;收获培养48h的细胞,提取总RNA,用RT-PCR法检测SOCS1、2、3mRNA的表达。结果处理后24h各组细胞数量及形态无明显变化;处理后48、72hIGF-1组细胞数量较对照组增多,形态上无明显变化,SOCS2mRNA表达显著下调;FGF-2组细胞数量减少,形态呈明显分化,SOCS2mRNA表达高于对照组;而IGF-1和FGF-2联合组细胞数量、形态及SOCS2mRNA表达变化与FGF-2组相似,但程度上更加显著。结论FGF-2可以削减IGF-1所诱导的人类神经母细胞瘤细胞的增殖作用,而SOCS2mRNA表达上调可能为其作用机制之一。

再发性低血糖对幼鼠脑内GLUT1及GLUT3表达的影响

目的观察再发性低血糖后脑内葡萄糖转运蛋白1(glucose transporter 1,GLUT1)及葡萄糖转运蛋白3(GLUT3)表达的变化,从而探讨无症状低血糖的发生机制。方法将80只15日龄野生型小鼠随机分为正常对照组及低血糖组,每组40只。低血糖组给予正规胰岛素腹腔注射3次,每次剂量为5U/kg,对照组注射等体积生理盐水。两组分别在最后1次注射后12、24、48及72 h处死小鼠取脑组织(每组每时间点10只),应用免疫组化方法观察小鼠脑内GLUT1及GLUT3表达的变化。结果低血糖后脑内微血管上GLUT1表达有增加趋势,皮质增加高于海马,72 h皮质GLUT1表达显著高于对照组;低血糖后48、72 h皮质及海马GLUT3表达均显著高于相应对照组。结论再发性低血糖后脑内GLUT1及GLUT3适应性增高,这种适应既能节省神经元的能量代谢,但也能削减神经元对低血糖的反应。