鸭γ-干扰素活性体外检测方法的建立

目的：建立鸭γ－干扰素体外活性检测方法。方法：体外刺激巨噬细胞产生一氧化氮（ＮＯ）是γ－干扰素的生物学效应之一。为检测鸭 γ－干扰素活性，采用 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００诱导产生的腹腔巨噬细胞作为实验体系，观察一氧化氮浓度在ＬＰＳ，ＰＨＡ，Ｌ－精氨酸刺激的上述细胞中的变化情况。结果：结果表明上述方法制备的腹腔巨噬细胞经ＰＨＡ或ＬＰＳ活化后，细胞密度较高组一氧化氮产量明显升高，细胞密度较低组则没有显著差异。结论：高浓度的腹腔巨噬细胞对ＬＰＳ等刺激物敏感，可作为检测鸭γ－干扰素活性的重要手段。

顺式串联双拷贝DuIFN—γ基因的真核表达

目的：以鸭γ－干扰素（DuIFN-γ)基因为目的基因，研究同一启动子调控下，不同拷贝数的目的基因的表达状况。方法：采用基因重组技术构建含DuIFN-γcDNA单拷贝和双拷贝重组质粒并转入真核细胞COS－7中进行表达。DuIFN-γ活性采用Griess试剂检测。结果：双拷贝重组质粒和单拷贝重组质粒50％最大活性稀释度分别为1：320和1：160。双拷贝重组质粒转染上清稀释10240倍后，仍保留DuIFN-γ活性，而单拷贝重组质粒转染上清经1280倍稀释后，即丧失活性。结论：在同一启动子作用下，顺式插入双拷贝目的基因可明显增强目的基因在真核细胞中的表达量。