表皮生长因子受体2靶向小分子干扰RNA对卵巢癌细胞化疗敏感性的影响

目的探讨表皮生长因子受体2（HER-2）靶向小分子干扰RNA（siRNA）对卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响。方法采用蛋白质印迹法筛选出特异性的HER-2siRNA，将其转染人卵巢上皮性癌细胞株SKOV3细胞。将实验分为对照组（不转染HER-2siRNA），非特异性siRNA组（转染非特异性siRNA），HER-2siRNA组（转染特异性siRNA），3组分别加入0、0．05、0．2、0．4、0．8、1．0、2．0、10、20μg／ml不同浓度的顺铂，采用噻唑蓝法检测3组SKOV3细胞增殖情况；在给予1μg／ml顺铂后，采用膜联蛋白V法检测顺铂组、HER-2siRNA组与HER-2siRNA联合顺铂组在不同时间（2～4d）凋亡率变化的情况；应用蛋白印迹法检测顺铂组及HER-2siRNA＋顺铂组抗凋亡蛋白Bcl-2、存活素、X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）和促凋亡蛋白第二线粒体衍生蛋白酶活化子（Smac）的表达。结果暴露于顺铂24h后，3组细胞增殖率均随顺铂浓度的增加而降低，但降低的幅度不同，其中，转染HER-2siRNA组细胞降低最为显著；在给予1μg／ml顺铂后，转染HER-2siRNA组细胞增殖率[（58．1±4．7）％]与转染非特异性siRNA组[（65．3±2．7）％]、空白对照组[（68．5±2．8）％]相比，差异均有统计学意义（P〈0．01），而非特异性组与空白对照组之间差异无统计学意义（P〉0．05）；HER-2siRNA联合顺铂组细胞凋亡率明显增加，与单独使用顺铂及单独使用HER-2siRNA组相比，差异有统计学意义（P〈0．01）。HER-2siRNA联合顺铂组抗凋亡蛋白Bcl-2、存活素、XIAP明显低于顺铂组；促凋亡蛋白Smac明显高于顺铂组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论HER-2siRNA能增加卵巢癌SKOV-3细胞对顺铂的敏感性，显著诱导凋亡。HER-2siRNA联合顺铂对卵巢癌治疗具有协同作用。HER-2siRNA和顺铂协同诱导细胞凋亡的机制可能与Bcl-2、存活素、XIAP蛋白质的下调、Smac蛋白质的上调有关。

siRNA特异性抑制卵巢癌细胞生长因子受体-2基因表达及其意义的研究

目的探讨RNA干扰(RNAi)抑制卵巢癌细胞表皮生长因子受体-2(HER-2)基因的表达及其细胞效应。方法实验分为以下3组空白对照组(未经转染的人卵巢癌SKOV-3细胞)、转染非特异性的siRNA组及转染特异性的siRNA组。干涉后5d加顺铂。采用半定量PCR技术(RT-PCR)和Western印迹法检测HER-2mRNA和蛋白的表达,用流式细胞仪检测细胞凋亡,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞对顺铂的化学敏感性的变化,分析观察细胞生物学特性的改变。结果HER-2siRNA对HER-2mRNA表达明显抑制,作用能持续10d左右;干涉第7天后开始出现蛋白质表达的明显减弱,转染特异性siRNA组的蛋白质阳性表达率为(25·5±0·8)%,非特异性siRNA组为(95·7±0·8)%,空白对照组为(96·6±1·2)%,前组与后两组比较差异有统计学意义(均P<0·001)。干涉后随着HER-2mRNA表达下降,细胞凋亡增加,第6天凋亡率最高,达(53·2±1·0)%,转染非特异性siRNA组为(4·1±0·3)%,空白对照组为(4·1±0·3)%,差异有统计学意义(P<0·001);干涉后,转染特异性siRNA组的细胞存活率为(58·4±0·8)%,转染非特异性siRNA组为(68·0±0·6)%,空白对照组为(67·0±0·3)%,前组与后两组比较差异有统计学意义(均P<0·001)。结论体外合成的siRNA能有效抑制SKOV-3细胞中HER-2表达,促进细胞的凋亡,提高细胞对顺铂的敏感性,RNAi为卵巢癌的基因治疗提供了一种新策略。