siRNA干扰XIAP基因对卵巢癌SKOV-3细胞生物学功能影响的研究

目的:采用小分子干扰RNA(siR-NA)技术沉默卵巢癌SKOV-3细胞X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)基因的表达,观察其对卵巢癌细胞增殖能力和凋亡的影响。方法:将XIAP siRNA转染SKOV-3细胞,MTT检测细胞增殖抑制情况,Annexin-V检测细胞凋亡率的变化,FCM法检测细胞周期变化。结果:XIAP siRNA转染后能明显抑制XIAP蛋白的表达,与其他组相比差异有统计学意义,F=63.782,P<0.05;特异性干涉组细胞的增殖能力明显低于空白对照组及非特异性干涉组,F=53.412,P<0.05;XIAP-siRNA转染组的细胞凋亡率为〔(31.54±0.62)%〕,与非特异性干涉组〔(5.34±0.38)%〕和空白对照组〔(6.73±0.46)%〕相比,差异有统计学意义,F=102.32,P<0.01。SKOV-3细胞明显阻滞在G0/G1期,与其他组相比,差异有统计学意义,P<0.01。结论:干扰XIAP基因可抑制卵巢癌SKOV-3细胞的增殖,诱导其凋亡。

KCC1调控ERK通路对子宫内膜癌细胞侵袭能力影响的观察

目的:探讨K-CL共转运体(KCC)1基因在调节子宫内膜癌侵袭能力的过程中与细胞外信号调节激酶(ERK)转导途径相互作用机制。方法:将pcDNA-KCC1表达载体转染子宫内膜癌HEC-1B细胞,蛋白质印迹法检测KCC1、p-ERK1/2表达的变化;Transwell侵袭小室检测细胞侵袭能力的变化;ERK抑制剂U0126处理转染后的细胞,再通过上述方法检测p-ERK1/2表达及细胞侵袭能力的变化。结果:转染pcDNA-KCC1表达载体后,转染组细胞KCC1、p-ERK1/2蛋白表达明显上调(P<0.05),侵袭至滤膜下的细胞数由26.7±2.3增加到50.3±3.1,P<0.05;应用ERK抑制剂U0126处理实验组后,p-ERK1/2蛋白表达明显下调,侵袭至滤膜下的细胞数由50.3±3.1降低到30.8±5.9,P<0.05。结论:KCC1通过参与ERK信号转导途径调节子宫内膜癌细胞的侵袭能力。

沉默survivin基因表达对人宫颈癌hela细胞恶性行为的影响

目的研究小干扰RNA(small interferingRNA,siRNA)抑制survivin基因的表达对人宫颈癌Hela细胞凋亡的影响。方法根据survivin基因设计序列特异性的siRNA(survivin-siRNA),在脂质体介导下转染Hela细胞,Westernblot方法检测survivin蛋白表达情况,利用TUNEL实验、Annexin-V实验和流式细胞仪方法检测细胞转染前后凋亡的形态学的变化、凋亡率及凋亡周期的变化,Western blot检测caspase-3、caspase-7在转染前后细胞中表达的变化。结果转染survivin-siRNA后,Hela细胞survivin蛋白表达明显下降,与空白对照组及阴性对照组相比,能明显诱导细胞凋亡,细胞被阻滞在G/M期(p<0.05)。转染后Hela细胞中caspase-3、caspase-7蛋2白表达比空白对照组及阴性对照组明显增强(p<0.05)。结论 Survivin-siRNA转染人宫颈癌Hela细胞可上调细胞中survivin蛋白的表达水平,诱导细胞凋亡,与caspase-3、caspase-7的上调有关。

子宫内膜癌组织中K-Cl共转运体1的表达及siRNA干扰其表达对子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖的影响

目的:探讨K-Cl共转运体1(K-Cl cotransporter 1,KCC 1)mRNA在子宫内膜癌组织中的表达及小干扰RNA(smallinterfering RNA,siRNA)干扰其表达对子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖能力和细胞周期的影响。方法:应用荧光定量PCR的方法检测正常子宫内膜和子宫内膜癌组织中KCC 1 mRNA的表达。设计并合成KCC 1特异性的siRNA,转染子宫内膜癌HEC-1B细胞后,应用RT-PCR、Western印迹法、MTT法和FCM法分别检测HEC-1B细胞中KCC 1 mRNA和蛋白的表达、细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的变化。结果:子宫内膜癌组织中KCC 1 mRNA的表达较正常子宫内膜组织明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。KCC1特异性siRNA能明显抑制HEC-1B细胞中KCC1 mRNA和蛋白的表达(P<0.05),且HEC-1B细胞的增殖能力明显下降(P<0.05);细胞周期分析显示细胞明显阻滞于G0/G1期,与对照组比较,细胞凋亡增加(P<0.05)。结论:KCC1基因与子宫内膜癌有关,参与细胞周期的调节,具有促进细胞增殖的能力。