干扰TRIM59表达对慢性粒细胞白血病K562细胞柔红霉素化疗敏感性的影响及作用机制研究

目的:探讨干扰三元基序59(TRIM59)表达对慢性粒细胞白血病K562细胞柔红霉素(DNR)化疗敏感性的影响及相关分子机制。方法:采用RT-q PCR法检测慢性粒细胞白血病患者骨髓组织和K562细胞中TRIM59 m RNA表达水平。用脂质体转染法将TRIM59特异性小干扰RNA(si-TRIM59)转染至K562细胞,并用DNR处理细胞。CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测凋亡相关蛋白和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达。结果:与初治时骨髓组织相比,化疗耐药时患者骨髓组织中TRIM59 m RNA表达水平升高(P<0.05)。与对照组比较,si-TRIM59组和DNR组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率均显著升高(P<0.05);细胞中Bax、Caspase3、Cleaved-Caspase3蛋白表达量均显著升高,而Bcl-2、Wnt3α、GSK-3β蛋白表达量、p-β-catenin/β-catenin比值均显著降低(P<0.05)。与si-TRIM59组和DNR组比较,si-TRIM59+DNR组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率均显著升高(P<0.05);细胞中Bax、Caspase3、Cleaved-Caspase3蛋白表达量均显著升高,而Bcl-2、Wnt3α、GSK-3β蛋白表达量、p-β-catenin/β-catenin比值均显著降低(P<0.05)。结论:干扰TRIM59表达可增强K562细胞对DNR的化疗敏感性,其作用机制可能与调控Wnt/β-catenin信号通路相关。

si-CECR7联合紫杉醇对肝癌耐药细胞Huh-7/ADM恶性行为的影响和机制

目的探讨猫眼综合征临界区基因(CECR)7小干扰RNA(si-CECR7)联合紫杉醇对肝癌耐药细胞Huh-7/ADM恶性行为的影响及机制。方法将不同浓度(12.5、25.0、50.0、100.0μg/ml)紫杉醇作用于Huh-7和Huh-7/ADM细胞48 h,MTT检测细胞抑制率,比较紫杉醇对Huh-7、Huh-7/ADM细胞的半数抑制浓度(IC50)。qRT-PCR检测肝癌组织和Huh-7、Huh-7/ADM细胞中CECR7表达。转染si-CECR7或共转染si-CECR7和miR-197抑制剂(anti-miR-197)至Huh-7/ADM细胞,然后再用12.5μg/ml紫杉醇干预48 h,MTT检测细胞增殖,克隆形成实验检测细胞克隆形成,Transwell检测细胞迁移和侵袭,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western印迹检测CyclinD1、p21、Bcl-2、Bax、E-cadherin和MMP-2蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证CECR7与miR-197调控关系。结果Huh-7/ADM细胞对紫杉醇的IC50值为161.00μg/ml,约是Huh-7细胞(24.10μg/ml)的6.7倍。肝癌组织中CECR7表达显著高于癌旁组织(P<0.05)。Huh-7/ADM细胞中CECR7表达显著高于Huh-7细胞(P<0.05)。si-CECR7联合紫杉醇显著降低了Huh-7/ADM细胞存活率、克隆数、迁移数、侵袭数及CyclinD1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达(P<0.05),而显著提高细胞凋亡率、P21、E-cadherin和Bax蛋白表达(P<0.05)。CECR7靶向结合并负调控miR-197。anti-miR-197逆转si-CECR7联合紫杉醇对Huh-7/ADM细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。结论si-CECR7联合紫杉醇降低Huh-7/ADM细胞的恶性行为,这可能与敲减CECR7导致细胞中miR-197表达上调有关。