白藜芦醇对CdCl_2暴露所致斑马鱼胚胎发育毒性干预作用及机制的初步研究

为考察天然抗氧化剂白藜芦醇（Res）对CdCl2暴露所致斑马鱼胚胎发育毒性的干预作用，并初步探讨其作用机制。采用单独应用Res联合CdCl：共同处理受精后2h（2hpf）的斑马鱼胚胎，观察至96hpf胚胎死亡率和孵化率；采用荧光探针DCFH—DA、MitoSOX、JC-1分别检测胚胎总体活性氧、线粒体源ROS水平和胚胎线粒体的膜电势；采用吖啶橙（AO）染色法检测细胞凋亡情况；采用Real-timePCR方法检测胚胎线粒体单链DNA结合蛋白（mtSSBP）、OPAl的表达水平。结果显示，100μmol／LRes持续暴露96h可明显增加斑马鱼胚胎死亡率（P〈0．05）。20-100μLmol／LRes与20mg／LCdCl：联合暴露较单独CdCl：暴露组相比，胚胎死亡率和未孵化率明显增加（P〈0．01）。100μm01／LRes与20mg／LCdCl2联合处理明显增加了胚胎总体ROS（P〈0．01）和线粒体内ROS（P〈0．01）的生成，降低了线粒体的膜电势（P〈0．05），胚胎细胞凋亡细胞数量明显增加。与CdCI：单独暴露组相比，Res联合处理明显下调了mtSSBP和OPAl的mRNA表达水平（P〈O．01）。由此可知，高浓度Res明显增强CdCl2所致的斑马鱼发育毒性，胚胎总体ROS和线粒体源ROS水平升高，线粒体膜电势下降，mtSSBP和OPAl表达下降，表明线粒体损害可能介导了Res对CdCl2育毒性的增敏作用。

藏茵陈环烯醚萜类化合物改善油酸诱导的肝细胞脂肪变性

通过油酸孵育HepG2人肝癌细胞建立肝细胞脂肪变性体外模型,考察龙胆苦苷(GPS),苦龙胆酯苷(AG)和獐牙菜苷(SW)对肝细胞脂肪变性的影响及机制。结果表明,GPS、AG、SW处理可显著降低细胞内甘油三酯水平。GPS和SW可激活腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK),上调脂质分解相关蛋白酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)和肉碱酰基转移酶1A(CPT1A)的表达,抑制脂质合成相关蛋白乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、甾醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)和脂肪酸合成酶(FAS)的表达。另外,GPS、AG、SW处理均明显降低线粒体活性氧生成,提高线粒体DNA拷贝数。研究结果表明,三种藏茵陈环烯醚萜类化合物可调节脂代谢,改善肝细胞脂质沉积。

黄腐酚逆转B16-F10黑色素瘤细胞恶性表型

本研究从体外增殖、细胞周期分布、克隆形成和迁移能力、黑色素合成以及糖酵解水平等考察了黄腐酚(XN)对B16-F10高转移潜能小鼠黑色素瘤细胞恶性表型的影响。结果表明,XN明显抑制B16-F10细胞增殖、克隆形成和体外迁移,阻滞细胞周期于G0/G1期,并上调细胞黑色素合成水平。同时发现XN下调B16-F10细胞的葡萄糖摄取,降低乳酸脱氢酶和己糖激酶活性及NAD^(+)/NADH比率,下调缺氧诱导因子1(HIF-1α)和沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)表达。另外,XN明显延长荷B16-F10黑色素瘤小鼠生存期。总之,本研究表明XN逆转B16-F10黑色素瘤恶性表型,并发挥抗肿瘤增殖和转移活性,或与其调控肿瘤糖代谢效应相关。

异甘草素减轻小鼠离体心脏缺血再灌注损伤

本文旨在探究异甘草素(Isoliquiritigenin,ISL)对小鼠离体心脏缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤的保护作用及其对心肌线粒体的影响,为其治疗心肌缺血再灌注损伤性疾病提供理论依据.实验采用改良的Langendorff离体心脏灌流装置,停灌30 min,复灌45 min,复制小鼠离体心脏I/R损伤模型.将实验小鼠随机分为3组:正常对照组,I/R组和ISL加药处理组,每组6只.利用多导生理记录仪连续监测左心室内压,实时记录心率(HR)、左室发展压(LVDP)、左室最大压力变化速率(±dp/dt)和左室舒张末压(LVEDP);分离心肌组织线粒体,JC-1荧光探针染色后用流式细胞仪检测线粒体膜电势;采用化学发光法测定心肌组织中ATP含量.结果表明,ISL处理组心脏的LVDP、+dp/dt明显高于I/R损伤对照组(P <0. 01),心肌线粒体膜电势以及心肌组织ATP含量也明显高于I/R损伤对照组.表明ISL可保护I/R致心脏线粒体功能损伤,改善心脏I/R损伤后功能恢复.

NADPH氧化酶活化介导七叶皂苷诱导人神经瘤母细胞凋亡

本研究旨在探究NADPH氧化酶活化所致氧化胁迫在七叶皂苷诱导SH-SY5Y神经母细胞瘤凋亡中的重要作用.以体外培养SH-SY5Y细胞作为研究对象,采用MTT法测定细胞增殖活力,流式细胞术测定细胞周期、细胞凋亡和活性氧指标,Western Blot测定凋亡蛋白Caspase 3变化.结果表明,七叶皂苷处理致显著细胞增殖抑制(P<0.05)、细胞内活性氧水平明显增加(P<0.05)、细胞周期阻滞于S期(P<0.05)、细胞凋亡数目增加、Caspase 3蛋白切割水平显著增加(P<0.05);NADPH氧化酶抑制剂DPI预处理明显逆转七叶皂苷所致的细胞增殖抑制、活性氧增加、周期阻滞和凋亡(P<0.05).提示NADPH氧化酶活化所致氧化胁迫参与七叶皂苷所引起SH-SY5Y细胞的凋亡.

NADPH氧化酶在油酸诱导的H9c2心肌细胞凋亡中的作用

本研究旨在探讨NADPH氧化酶活化在油酸诱导的H9c2心肌细胞损伤中的作用.以体外培养H9c2心肌细胞为研究对象,用不同浓度(200,400,800μmol/L)油酸刺激H9c2心肌细胞(24,48,72 h),采用MTT法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞内活性氧和凋亡指标;免疫印迹法检测细胞内Caspase 3,Bax,Bcl-2变化.结果表明,油酸刺激明显抑制细胞增殖、细胞内活性氧水平明显增加、Cleaved-caspase 3蛋白水平明显增加、Bcl-2/Bax蛋白水平明显降低;NADPH氧化酶抑制剂DPI预处理明显改善油酸所致H9c2心肌细胞增殖抑制、活性氧增加和凋亡.本研究结果提示NADPH氧化酶活化参与油酸所致H9c2心肌细胞凋亡.