亚硒酸钠对肺癌干细胞侵袭和迁移的影响

目的:研究亚硒酸钠对肺癌干细胞侵袭和迁移的影响。方法:利用免疫磁珠细胞分选技术分选出肺癌干细胞,CCK-8实验检测不同浓度亚硒酸钠对肺癌干细胞活力的影响,Transwell小室法检测亚硒酸钠对肺癌干细胞侵袭能力的影响,细胞划痕法检测亚硒酸钠对肺癌干细胞迁移能力的影响,Western blot检测不同浓度亚硒酸钠对肺癌干细胞中SBP1及Ki67蛋白表达的影响。结果:成功分选出了纯度为82%的CD133+肺癌干细胞。CCK-8实验结果显示亚硒酸钠能够剂量依赖性地抑制肺癌干细胞的活力。Transwell小室法检测结果显示亚硒酸钠能够抑制肺癌干细胞的侵袭能力。细胞划痕实验结果显示亚硒酸钠能抑制肺癌干细胞的迁移能力。Western blot检测结果显示亚硒酸钠能够剂量依赖性地促进肺癌干细胞中SBP1的表达,抑制Ki67蛋白的表达。A549小鼠肺癌移植瘤结果显示,与控制组(注射生理盐水组)相比,瘤内注射亚硒酸钠能够显著抑制肿瘤的生长。结论:亚硒酸钠能够抑制肺癌干细胞的生长、侵袭和迁移,可能是治疗肺癌的潜在药物。

MGMT的表达在预测乳腺癌化疗效果中的应用

目的探讨O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌化疗预后的关系。方法选取行手术治疗,术后接受常规化疗的乳腺癌患者81例为研究对象,采用免疫组化法检测患者病理组织MGMT水平,分析其与患者临床指标及预后的关系。结果 81例患者病理组织中,MGMT阳性表达58例,占71.6%;阳性表达患者雌激素受体阳性率低于阴性表达患者,差异有统计学意义(P﹤0.05);MGMT阳性患者化疗总有效率低于阴性患者,差异有统计学意义(P﹤0.05);MGMT阳性患者与阴性患者总生存期对比,差异无统计学意义(P﹥0.05)。结论 MGMT对预测乳腺癌化疗患者近期疗效有一定价值,但对患者总生存期缺乏预测价值。

白细胞介素-6/信号转导和转录激活因子-3信号通路关键分子与乳腺癌易感性关系

目的探讨白细胞介素-6/信号转导和转录激活因子-3(interleukin-6/signal transducer and activator of transcription 3,IL-6/STAT3)信号通路关键分子与乳腺癌易感性关系。方法采用病例对照研究设计,选取2021年3月至2023年3月烟台市烟台山医院乳腺外科收治的136例乳腺癌患者作为观察组,按照1:1比例匹配同年龄的136例健康体检者作为对照组。比较2组临床资料、IL-6/STAT3信号通路关键分子,采用条件Logistic回归及相加作用分析评估乳腺癌易感的风险因素,绘制受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)及曲线下面积(area under curve,AUC)分析诊断效能。结果观察组与对照组体质指数(body mass index,BMI)(22.21±0.68 vs.21.30±0.70)、月经初潮年龄(13.50±1.24 vs.14.83±1.42)、IL-6(3.50±1.05 vs.2.41±0.74)、蛋白酪氨酸激酶1(janus protein kinase 1,JAK1)mRNA(1.23±0.36 vs.0.88±0.26)、STAT3 mRNA(1.68±0.50 vs.1.17±0.35)、绝经(30.15%vs.55.88%)、母乳喂养(82.35%vs.92.65%)及体育锻炼(44.12%vs.58.09%)等比较,差异均有统计学意义(t=10.87、8.23、9.89、9.19、9.75,χ^(2)=18.37、6.59、5.31,P<0.05)。母乳喂养[比值比(odd ratio,OR):0.550]、IL-6(OR:4.409)、JAK1(OR:5.370)及STAT3(OR:4.386)是乳腺癌易感风险因素(P<0.05)。ROC曲线显示,IL-6、JAK1、STAT3 mRNA联合诊断乳腺癌效能明显优于单一诊断效能;IL-6、母乳喂养同时暴露者乳腺癌发病率是非暴露者的3.508倍;JAK1、母乳喂养同时暴露者乳腺癌发病率是非暴露者的4.136倍;STAT3、母乳喂养同时暴露者乳腺癌发病率是非暴露者的3.537倍。结论IL-6/STAT3信号通路关键分子、母乳喂养均是乳腺癌发病易感因素,两者存在相加交互作用,从而增加乳腺癌易感性,对该病鉴别诊治有显著意义。

肺腺癌EGFR基因突变与多重耐药相关蛋白表达的临床意义

目的探讨肺腺癌EGFR基因突变、多重耐药相关蛋白(MDR1、TopoⅡ、MVP、GST pi)表达与临床病理特征的关系。方法回顾性筛选烟台市烟台山医院2017年5月至2021年12月外科手术切除或穿刺活检之肺原发性浸润性腺癌标本,采用等位基因特异扩增荧光聚合酶链反应和免疫组织化学法检测肺腺癌EGFR基因突变和多重耐药相关蛋白表达。分析临床病理特征与EGFR基因突变状态、多重耐药相关蛋白表达的关系。结果共筛选出EGFR基因突变标本273例。肺腺癌患者性别、吸烟史、肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移、TNM分期与EGFR基因突变状态密切相关(均P<0.05)。肺腺癌患者年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期与MDR1蛋白表达程度密切相关(均P<0.05);吸烟、肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移、TNM分期与TopoⅡ蛋白表达程度密切相关(均P<0.05)。MDR1和GST pi蛋白在EGFR不同突变类型肺腺癌中的表达程度不同(均P<0.05),且肺腺癌间质中MDR1蛋白表达程度与EGFR基因突变类型密切相关(P<0.05)。结论肺腺癌组织存在一定的内源性多重耐药,肿瘤间质微环境可能在肺腺癌的多重耐药中起作用。

预后营养指数结合NLR、CYFRA21-1对替雷利珠单抗治疗晚期非小细胞肺癌预后的评估价值

探讨预后营养指数(PNI)结合中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)、细胞角蛋白19片段抗原(CYFRA21-1)对替雷利珠单抗治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)预后的评估价值。研究发现PNI水平降低,NLR、CYFRA21-1水平升高与患者预后不良有关,三者联合检测对替雷利珠单抗治疗晚期NSCLC患者具有良好的预后评估价值。

下调Yes相关蛋白1表达对食管癌细胞增殖与侵袭的影响

目的探讨下调Yes相关蛋白1(YAP1)表达对食管癌细胞增殖与侵袭的影响。方法实时荧光定量-聚合酶链反应(Real-time PCR)及蛋白质印迹法(Western blot)检测小干扰RNA(siRNA)YAP1-1、2、3的转染效果,将细胞分为control组和siRNA组。噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,细胞克隆形成实验检测细胞克隆能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Tanswell实验检测细胞侵袭能力,Western blot检测B淋巴细胞瘤-2基因(bcl-2)、bcl-2相关蛋白X(bax)、p53、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、c-Fos、c-Jun及p-c-Jun氨基末端激酶(JNK)表达。组间比较采用t检验。结果siRNA-YAP1-1、2、3组中YAP1 mRNA表达量低于control组(0.75±0.04、0.45±0.01、0.31±0.01比1.00±0.08,t=5.621、6.324、6.897,P<0.05)。siRNA-YAP1-1、2、3组中YAP1蛋白表达量低于control组(0.62±0.03、0.34±0.01、0.20±0.01比0.94±0.07,t=5.904、6.561、6.438,P<0.05)。选择siRNA-YAP1-3作为后续实验研究对象。siRNA组细胞活力(0.35±0.01比0.58±0.04,t=5.761,P<0.05)、细胞克隆数目[(35.67±3.54)个比(189.65±12.64)个,t=6.549,P<0.05]、细胞侵袭数目[(34.76±2.45)个比(164.38±10.41)个,t=6.341,P<0.05]、bcl-2(0.89±0.07比0.32±0.02,t=5.967,P<0.05)、MMP-2(0.92±0.07比0.37±0.02,t=6.214,P<0.05)及MMP-9(1.09±0.08比0.38±0.02,t=6.287,P<0.05)蛋白表达量低于control组。siRNA组细胞早期凋亡率[(21.57±1.68)%比(2.47±0.02)%,t=5.689,P<0.05]、晚期凋亡率[(17.42±1.36)%比(3.26±0.02)%,t=6.236,P<0.05)、bax(0.25±0.01比0.94±0.06,t=6.325,P<0.05)、p53(0.33±0.02比0.87±0.07,t=6.761,P<0.05)、c-Jun(0.36±0.02比1.05±0.08,t=6.698,P<0.05)、c-Fos(0.35±0.02比0.62±0.04,t=5.749,P<0.05)及p-JNK(0.26±0.02比1.02±0.08,t=6.325,P<0.05]蛋白表达量高于control组。结论下调YAP1表达可能通过激活JNK信号通路抑制EC109食管癌细胞的增殖与侵袭。

非小细胞肺癌患者血清人类表皮生长因子受体-2和环氧化酶-2水平及临床意义

目的探讨非小细胞肺癌患者血清人类表皮生长因子受体2（humanepidermalgrowthfactorreceptor2，HER2）和环氧化酶2（cycl00xygenase-2，COX2）水平相关性及与预后的关系。方法非小细胞肺癌患者221例（观察组）与肺部良性疾病患者41例（对照组），2组采用双抗体夹心ELISA法检测血清HER2和COX2水平，分析二者相关性及与生存时间的关系。结果观察组HER-2和COX-2水平明显高于对照组（P〈0．05）；观察组HER2阳性表达者中位生存时间（48．7周）较HER-2阴性表达者（62．3周）短；COX2阳性表达者中位生存时间（67．0周）较COX-2阴性表达者（83．1周）短（P〈0．05）；观察组HER2与CoX2水平呈正相关（r=0．717，P=0．007）；观察组HER-2和COX-2水平不是影响预后的独立危险因素，但二者联合检测可预测患者预后（OR=1．5，95％CI：1．08～2．09）。结论非小细胞肺癌与HER-2和COX2阳性表达明显相关，二者联合检测有助于非小细胞肺癌的预后评估。

CT引导下组织间125I粒子植入治疗老年人非小细胞肺癌临床观察

目的观察cT引导下经皮穿刺瘤体内植入125I粒子治疗老年人非小细胞肺癌的临床疗效。方法18例老年非小细胞肺癌患者，在cT定位下，通过穿刺将125I粒子植入到肺癌病灶内，经影像学检查评价疗效，并观察其并发症。结果术后1个月临床疗效：Ⅰ级0例、Ⅱ级7例、Ⅲ级14例、Ⅳ级0例、有效率33．3％，术后2个月临床疗效分别为3例、8例、10例、0例、52．4％，术后6个月临床疗效分别为6例、14例、1例、0冽、96．2％。并发症：气胸3冽，少量咯血17例，未见胸膜腔内明显出血，粒子脱入胸膜腔1冽。结论经皮穿刺瘤体内植入125I粒子治疗老年人非小细胞肺癌有效率高，不良反应少。

SFRP1基因启动子甲基化在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的检测甲状腺乳头状癌(papillary thyroid cancer,PTC)组织中SFRP1基因启动子DNA甲基化状态,分析其与临床特征和生化指标的相关性及对mRNA表达的影响,探究其在临床应用中的价值。方法选择2017年10月至2019年10月在烟台市烟台山医院行手术治疗的97例初发PTC患者作为研究对象,取患者的PTC组织(观察组)和癌旁组织(对照组),采用甲基化特异性PCR(methylation special PCR,MSR)检测组织中SFRP1基因启动子区甲基化状态,采用荧光定量PCR法检测SFRP1基因mRNA表达量,使用甲基转移酶抑制剂5-Azacytidine处理PTC细胞株,且进行生化指标的检测和临床特征的收集。结果PTC组织的SFRP1基因启动子区甲基化阳性率(70.1%)显著高于癌旁组织的甲基化阳性率(33.0%)(χ2=26.747,P<0.001);PTC组织的SFRP1基因mRNA表达量显著低于癌旁组织的mRNA表达量(t=2.886,P=0.007),甲基化阳性PTC组织的mRNA表达量也显著低于甲基化阴性PTC组织mRNA的表达量(t=2.065,P=0.038)。随着5-Azacytidine浓度的增加,CGTHW-3细胞SFRP1基因mRNA表达量也逐渐上升。此外,PTC组织中甲基化阳性率与TNM分期(χ2=5.487,P=0.019)和是否有淋巴结转移(χ2=4.659,P=0.031)有关,且甲基化组的血清TSH和TGAb水平均高于非甲基化组(TSH:t=2.234,P=0.023;TGAb:t=2.312,P=0.021)。结论SFRP1基因启动子区高DNA甲基化可通过下调该基因mRNA表达,参与到PTC的发生、发展中。

METTL14调控CCNL2对乳腺癌细胞活性与侵袭的影响

目的探讨甲基转移酶样蛋白14(methyltransferase like 14,METTL14)通过m6A修饰的方式调控细胞周期蛋白L2(cyclin L2,CCNL2)对乳腺癌(breast cancer,BC)细胞增殖与侵袭的影响。方法收集2018年8月至2020年2月烟台山医院乳腺癌患者的癌组织和癌旁组织,高效液相色谱/质谱(HPLC/MS)定量与qRT-PCR检测组织中m6A、METTL14、CCNL2的表达水平。双荧光素酶报告实验、qRT-PCR、Western blot验证METTL14与CCNL2的调控关系。RIP实验验证YTH家族蛋白2(YTH domain-containing family protein,YTHDF2)与CCNL2的调控关系。MTT法检测细胞活性,Transwell检测细胞侵袭能力。结果与正常细胞(0.24±0.02)及组织(0.18±0.02)相比,乳腺癌细胞MCF-7(0.47±0.03,t=11.05,P<0.001)和HS-578T细胞(0.41±0.03,t=8.17,P=0.001)及乳腺癌组织(0.39±0.02,t=12.86,P<0.001)中m6A水平升高。与正常组织(1.00±0.26)、(0.84±0.07)相比,乳腺癌组织中METTL14mRNA(1.57±0.28,t=13.50,P<0.001)与蛋白水平(1.66±0.11,t=10.89,P<0.001)显著升高。与对照组(100.00±10.11)、(1.00±0.12)相比,sh-METTL14组中乳腺癌细胞侵袭能力(54.15±6.21,t=6.69,P=0.003)与活性(0.64±0.06,t=4.65,P=0.010)均减弱。与对照组(100.00±11.05)、(1.00±0.13)相比,过表达METTL14组中乳腺癌细胞侵袭能力(175.31±13.45,t=7.49,P=0.002)与活性(2.16±0.16,t=9.75,P=0.001)均增强;m6A抑制剂处理后,METTL14对细胞侵袭(137.41±12.64,t=3.56,P=0.024)和活性(1.64±0.15,t=5.59,P=0.005)的作用均被部分反转。与正常组织相比,CCNL2在乳腺癌组织中表达下调,CCNL2与METTL14的相互作用关系被证实,与对照组(1.00±0.10)(0.64±0.05)相比,敲减METTL14可使CCNL2 mRNA(1.67±0.13,t=7.08,P=0.002)与蛋白(1.09±0.09,t=7.57,P=0.002)表达上调。METTL14敲除通过YTHDF2依赖的途径增强CCNL2 mRNA的稳定性,较sh-METTL14组(50.47±5.16)、(0.52±0.05)相比,sh-METTL14+sh-CCNL2组乳腺癌细胞侵袭能力(71.69±6.41,t=4.47,P=0.011)与活性(0.64±0.05,t=2.94,P=0.042)均有所提高。结论METTL14通过m6A修饰的方式抑制CCNL2的表达进而提高乳腺癌细胞侵袭与活性。

YY1转录因子诱导低氧乳腺癌外泌体中的circ_000543促进乳腺癌细胞增殖、侵袭

目的探讨低氧外泌体circ_000543对乳腺癌(breast cancer,BC)细胞增殖与侵袭的作用。方法借助生物信息学网站预测circ_000543在BC组织中的异常表达及可能对其进行调控的转录因子。使用双荧光素酶报告实验与ChIP实验验证YY1转录因子与circ_000543的调控关系。对BC细胞进行缺氧诱导,分离常氧BC细胞及缺氧BC细胞的外泌体,qRT-PCR检测circ_000543在外泌体中的表达。干预外泌体中circ_000543与YY1的表达,并与常氧条件下的BC细胞进行共培养。CCK8与Transwell分别检测细胞的增殖与侵袭能力。结果qRT-PCR实验发现,与MCF-10A细胞(1±0.11)和常氧细胞分离的外泌体(1±0.10)比较,circ_000543在BC细胞(1.59±0.13)及低氧细胞分泌的外泌体(1.63±0.12)中均表达上调(t=6.001,P=0.004;t=6.986,P=0.002)。缺氧细胞外泌体能促进常氧BC细胞的增殖与侵袭,敲减circ_000543后部分抵消外泌体的作用。YY1能作为转录因子促进circ_000543在BC细胞中的表达。敲减YY1后circ_000543的表达被抑制,同时也能抑制外泌体对BC细胞增殖与侵袭的作用。结论转录因子YY1诱导低氧细胞外泌体中的circ_000543进而促进BC细胞的增殖与侵袭。

过表达miR-153非小细胞肺癌细胞稳转株的构建及鉴定

目的:构建过表达miR-153的非小细胞肺癌的稳转细胞株,为进一步探讨miR-153在肺癌发生发展中的作用奠定基础。方法:构建具有嘌呤霉素抗性的miR-153慢病毒载体;体外培养非小细胞肺癌细胞系SPC-A-1和A549,加入浓度梯度的嘌呤霉素溶液,筛选出最佳浓度;使用慢病毒转染细胞株,并在转染72 h后用荧光显微镜检测绿色荧光蛋白(EGFP)的表达,评价转染效率;体外实验使用PCR检测miR-153在稳转株的表达;稳转株移植裸鼠体内成瘤,取出瘤体后检测瘤体内EGFP和miR-153的表达。结果:完成过表达miR-153慢病毒载体及阴性对照载体的构建;确定嘌呤霉素最佳筛选浓度:在SPC-A-1细胞中的浓度为2.0 g/mL,A549细胞中的浓度为3.0 g/mL;目的基因miR-153被慢病毒成功导入SPC-A-1细胞和A549细胞中,荧光显微镜下能直接观察到EGFP。转染miR-153组和阴性对照组的PCR实验结果显示:在SPC-A-1细胞中,miR-153的表达量为92.9±20.6,明显高于阴性对照组(P=0.016);在A549细胞中,miR-153的表达量为2624.6±153.4,显著高于阴性对照组(P<0.001)。稳转株能在裸鼠体内形成移植瘤,瘤体内明显有EGFP的表达;与阴性对照组的瘤体相比,移植瘤组miR-153的表达量为显著上调(P=0.048)。结论:成功构建过表达miR-153的非小细胞肺癌的稳转细胞株。

单硝酸异山梨酯联合长春瑞滨和顺铂治疗晚期非小细胞肺癌的临床观察

目的观察单硝酸异山梨酯对长春瑞滨和顺铂治疗ⅢB～Ⅳ期初治非小细胞肺癌（NSCLC）的化疗增敏作用。方法110例ⅢB～Ⅳ期初治的NSCLC患者采用随机数字表方法随机分为试验组（A组，57例，长春瑞滨＋顺铂＋单硝酸异山梨酯缓释片）和对照组（B组，53例，长春瑞滨＋顺铂），2周期化疗后，按实体瘤疗效评价标准（RECIST）1．1评价近期疗效，按美国国立癌症研究所抗癌药物不良反应评定标准（NCI-CTC）3．0评价不良反应，并随访至疾病进展。结果A、B两组有效率分别为58．2％（32／55）和30．8％（16／52），两组间比较，差异有统计学意义（X2=8．120，P=0．004）；中位疾病进展时间分别为8．2个月和5．8个月（X2=10．684，P=0．001）；中位生存期分别为11．6个月和9．0个月（X2=11．231，P=0．001）；鳞状细胞癌的化疗效果更好（RR=2．438，95％CI为1．136—5．231，P=0．022）。A组头痛发生率显著高于B组（P〈0．001），血液学毒性及胃肠道反应两组差异无统计学意义。结论单硝酸异山梨酯可以增加长春瑞滨联合顺铂方案治疗IIIB-Ⅳ期NSCLC患者化疗的敏感性。