钙黏蛋白11和核心结合因子α1双基因修饰人骨髓间充质干细胞

背景:钙黏蛋白11对骨髓间充质干细胞进行基因修饰,可促进细胞的黏附性能。利用核心结合因子α1对骨髓间充质干细胞进行基因修饰,有望实现多能干细胞的成骨定向分化,并在诱导成骨分化的级联效应中发挥重要的信号作用。目的:拟采用腺病毒为载体,介导钙黏蛋白11、核心结合因子α1基因修饰骨髓间充质干细胞,观察两基因的表达情况。设计、时间及地点:细胞-基因学实验,于2008-08在珠江医院中心实验室完成。材料:人骨髓间充质干细胞来源于1例胸椎骨折男性患者,由珠江医院提供,患者对实验知情同意。钙黏蛋白11全长cDNA质粒由日本神户理研Riken分子生物中心Takeichi教授惠赠,全长核心结合因子α1基因质粒由美国Baylor医学院Ducy博士提供,pAdeasy腺病毒系统由美国约翰霍普金斯遗传所Bert博士馈赠。方法:Percoll密度梯度离心+贴壁法分离培养人骨髓间充质干细胞。利用PCR技术获得钙黏蛋白11和核心结合因子α1基因,分别构建到腺病毒穿梭载体上,然后分别通过同源重组获得重组腺病毒质粒,再将两病毒质粒包装获得重组病毒液,最后通过病毒将两基因导入骨髓间充质干细胞。主要观察指标:Westernblot法检测钙黏蛋白11、核心结合因子α1基因在人骨髓间充质干细胞中的表达。结果:获得携带钙黏蛋白11和核心结合因子α1基因的病毒液,将其感染人骨髓间充质干细胞后,以Westernblot检测两种基因同时获得高表达。结论:实验成功构建钙黏蛋白11和核心结合因子α1基因腺病毒载体,通过病毒转染人骨髓间充质干细胞,二者获得高效表达。

真核表达载体pIRES2EGFP-Cadherin-11的构建及其在BMSCs内的表达

目的构建pIRES2EGFP-Cadherin-11真核表达载体,并检测其在BMSCs中的表达情况。方法应用聚合酶链反应技术从人Cadherin-11 cDNA中扩增出Cadherin-11基因后,以内切酶Xho I和EcoR I进行双酶切,将其插入用相同酶处理的载体pIRES2EGFP;将重组质粒转染BMSCs,应用Western blot方法检测其在细胞中的表达情况。结果酶切和测序结果表明,扩增的Cadherin-11基因序列正确,大小为2390bp;Western blot表明,Cadherin-11蛋白在BMSCs中正确表达,大小约88kD。结论Cadherin-11蛋白能在BMSCs中高度表达,可望用于提高BMSCs与支架材料的粘附性。

小儿深Ⅱ度烫伤创面早期采用磨痂术1例

1临床资料 病例:患儿,男性,5岁,因不慎被开水(水温约80℃)烫伤臀部,会阴部,双大腿1h急诊入院.查:神志清,精神不振;体温36℃,心率118次/min,呼吸24次/min,血压11/6kPa,烫伤部位表皮松解起水泡,部分水泡破溃,表皮脱落,基底呈红白相间,渗液少,疼痛不敏感,入院诊断:臀部、会阴部、双大腿烫伤20%深Ⅱ度.

平阳霉素局部注射治疗血管瘤引起严重过敏反应二例

平阳霉素局部注射治疗血管瘤已有多年历史。近几年来，因其疗效显著、不良反应少而屡见报道。我们自2005年以来已治疗130例，发生严重过敏反应者2例，报告如下。