海南罗非鱼致病性维氏气单胞菌分离鉴定及药敏特性研究

2014年3—5月海南省罗非鱼主养区多个养殖场发生爆发性疾病,从患病尼罗罗非鱼不同组织中分离获得12株优势菌。经人工回归感染试验,从肝脏和脑中分离获得的HN-G-03和HN-B-02菌株具较强的致病力,HN-G-03和HN-B-02菌株对罗非鱼的的半致死密度分别为7.12×105cfu/尾和1.32×105cfu/尾。经16S rRNA和gyr B基因序列分析,同时结合细菌的形态学特征、生理生化特征,菌株HN-G-03和HN-B-02分别被鉴定为维氏气单胞菌的维氏生物型和温和生物型。体外药物药敏试验结果显示,两株菌均对左氧氟沙星、强力霉素、氟苯尼考、恩诺沙星、庆大霉素等5种药物高度敏感,对呋喃妥因等3种药物中度敏感,对青霉素等12种药物较强耐药。

布氏石斑鱼的染色体核型、银染和C-带

为了补充布氏石斑鱼细胞遗传学数据,并为石斑鱼染色体进化研究以及石斑鱼遗传育种等工作奠定基础,实验利用Giemsa染色、C-带和Ag-NORs方法对布氏石斑鱼的染色体核型以及异染色质和具有转录活性的核仁组织区在染色体上的分布位置和数量进行了研究。结果表明,布氏石斑鱼二倍体染色体数目为48,其染色体组由48条端部着丝粒染色体组成,绝大多数染色体的着丝粒位置呈异染色质带,仅在第24对染色体靠近着丝粒的位置检测到银染带,以上结果均表明,布氏石斑鱼属于较为原始的类群。

棕点石斑鱼中草药免疫增强剂的快速筛选

采用离体外周血白细胞与中草药水提液共同孵育法,快速筛选棕点石斑鱼中草药免疫增强剂。39种生药量浓度为100 mg/ml的中草药水提液及添加5.0 mg/ml酵母聚糖的中草药水提液分别与棕点石斑鱼外周血白细胞孵育后,采用氮蓝四唑(NBT)还原法检测各种中草药水提液对棕点石斑鱼外周血白细胞氧呼吸爆发活性的影响,再以吞噬乳胶微球法检测具有显著增强白细胞氧呼吸爆发活性效果的中草药对棕点石斑鱼白细胞吞噬活性的影响,筛选中草药免疫增强剂,并将其拌料饲喂棕点石斑鱼,考察其对棕点石斑鱼外周血和头肾白细胞氧呼吸爆发活性的影响。结果显示,39种中草药中有10种对棕点石斑鱼离体白细胞氧呼吸爆发活性显著提高15%以上,3种酵母聚糖添加组对白细胞氧呼吸爆发活性提高70%以上;筛选出可同时提高棕点石斑鱼离体白细胞的氧呼吸爆发活性和吞噬活性的3种中草药,它们分别为鸡血藤、黄柏和墨旱莲。拌料饲喂实验结果显示,饲喂1%的鸡血藤、黄柏和墨旱莲可显著提高棕点石斑鱼体内外周血和头肾白细胞氧呼吸爆发活性。

响应面法优化丹参中抗无乳链球菌活性成分的提取工艺

在单因素提取工艺优化的基础上,选取液料比、浸润时间、提取时间和提取温度进行四因素三水平的Box-behnken实验设计,并结合响应面分析法进一步优化丹参中抗无乳链球菌(Streptococcus agalactiae,SA)活性成分提取工艺。优化所得最佳提取工艺为液料比37.8:1.0(ml:g)、浸润时间104 min、提取温度86.7℃、提取时间182 min。响应面模型预测在该提取工艺下抗SA活性成分提取得率极值为25.95%,经4次平行验证实验的实际提取得率为(25.87±0.03)%,为优化前的2.59倍,表明优化方法高效可靠。

基于gyrB基因的地衣芽孢杆菌PCR快速检测方法的建立

根据6株地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)的gyrB基因序列设计了1对特异性引物F1和R1,扩增产物大小为303 bp,以此引物对为基础,成功建立了灵敏度为1×10-3mg·L-1(约为200个细菌/反应)的地衣芽孢杆菌PCR快速检测方法 .该方法具有快速、灵敏度高、特异性强等优点,它为今后从微生物群落结构复杂的环境中分离地衣芽孢杆菌奠定了良好的基础.

中药和泰药提取物对褐点石斑鱼的免疫效果

采用酒精萃取法,从8种中药和2种泰药中提取了有效成分,并通过氮蓝四唑(NBT)还原法检测了褐点石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus)白细胞产生氧负离子能力的强弱和吞噬活性,开展了以上药物对褐点石斑鱼的免疫效果研究.白细胞氧负离子检测的结果表明:当药物萃取物质量浓度为10 g.L-1时,香菇组(C4)的免疫效果最好;当药物萃取物质量浓度为5 g.L-1时,所有实验组的免疫效果均不明显;当药物萃取物质量浓度为2.5 g.L-1和1.25 g.L-1时,黄芪组(C3)、香菇组(C4)、红参组(C5)和复方1组(C7)的免疫效果最为突出;而当药物萃取物质量浓度为0.625 g.L-1时,黄芪组(C3)、杜仲组(C2)和姜黄组(T1)的免疫效果最为突出.白细胞吞噬活性的检测结果表明:红参组(C5)、香菇组(C4)、黄芪组(C3)及复方1组(C7)这4个试验组的白细胞吞噬活性极显著高于对照组(P<0.01).因此认为:红参、香菇、黄芪及生脉玉屏风散这4种药物的萃取物能明显提高褐点石斑鱼的非特异性免疫力,这为今后开展褐点石斑鱼的新型安全的免疫增加剂的研究奠定了良好基础.

响应面法优化一种抗无乳链球菌中药复方的浸提工艺研究

为了确定一种中药复方中抗无乳链球菌活性成分(ACAS)的最佳浸提工艺,以ACAS浸提得率为指标,采用单因素和Box-Behnken Design试验设计(BBD)结合响应面分析法(RSM)序贯优化中药复方ACAS浸提工艺。结果显示,ACAS最佳浸提工艺为:以80%乙醇水溶液为溶剂,按液料比16.48∶1(m L/g),39℃浸提2 h、浸提2次,在此最优条件下进行平行4次验证试验,ACAS浸提得率可达4.02%±0.15%,与预测值4.06%的相对误差为0.99%,是优化前40.2倍。为中药复方ACAS纯化鉴定、药理毒理分析等后续研究奠定了良好基础。

一株高效水质改良菌的筛选鉴定及其作用效果研究

自海南水产养殖水体中分离筛选获得1株具有高效改良水质功能的益生菌株Bt-01,经菌落形态和生理生化分析及16SrDNA鉴定,该菌株为苏云金芽孢杆菌。采用腹腔注射法检测其安全性,测定该菌株对静养水体化学需氧量、亚硝酸盐和氨氮的相对移除效率。试验结果表明,腹腔注射4.1×108cfu/mL的Bt-01菌悬液200μL,养殖的尼罗罗非鱼30d成活率为100%;Bt-01在12h内对亚硝酸盐相对移除率最高可达98.03%,31h内对氨氮的相对移除率为59.10%,23.5h内对化学需氧量的相对移除率最高可达51.06%。该菌株具有显著改良水产养殖水质作用和良好应用前景。

华南地区常见药用子囊菌

华南地区药用真菌种类资源丰富,作者搜集了的药用子囊菌标本和素材以后,予以研究鉴定、整理出华南地区常见药用子囊菌30种,并对其地理分布和药用状况进行了简述。

罗非鱼无乳链球菌拮抗菌的分离、鉴定及多样性分析

采用径向扩散法筛选对罗非鱼致病性无乳链球菌具有拮抗作用的益生菌,利用16S r DNA对拮抗菌进行鉴定,构建系统发育树对拮抗菌的多样性进行分析,并通过腹腔注射法测定其对罗非鱼的安全性。结果表明,从8个采样点共分离细菌1 759株,其中59株对无乳链球菌具有较强的拮抗作用,抑菌圈直径为10.6mm^30.8 mm,平均21.9 mm;16S r DNA分子鉴定及系统进化树分析显示,59株拮抗菌分为5属8个种,其中芽孢杆菌属(Bacillus)45株、假单胞菌属(Pseudomonas)5株、肠球菌属(Enterococcus)2株、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)2株和葡萄球菌属(Staphylococcus)5株。鱼体安全性试验显示,有22株拮抗菌对罗非鱼不具有致病性,可作为防治罗非鱼无乳链球菌病的备选菌株。

鲈鱼核型、Ag-NORs和C-带分析

采用常规核型分析、Ag-NORs及C-带技术对鲈鱼的核型特征进行了研究。研究结果如下:(1)鲈鱼二倍体染色体数目为48(2n=48),全部为端着丝粒染色体(t型),染色体臂数FN=48,没有异形性染色体;(2)在所观察的中期分裂相中,第12对同源染色体次缢痕处显示为稳定的Ag-NORs,此处为C-带阴性;(3)鲈鱼染色体着丝粒处具有微弱C-带,第1对染色体靠近着丝粒位置为C-带强阳性;(4)在某些中期分类相中具有多银染位点。

漳州水仙的组织培养技术

以漳州水仙为材料,研究了漳州水仙的组织培养技术,优选出不定芽再生与生根的最佳培养基,结果表明:鳞茎盘与愈伤组织分化不定芽的最优培养基都为MS+6-BA 10 mg·L-1+NAA 1.0 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+植物凝胶3 g·L-1;生根的最佳培养基为1/2 MS+NAA 0.1 mg·L-1+IBA 0.1mg·L-1+蔗糖15 g·L-1的液体培养基。

海南野生豹纹鳃棘鲈染色体核型及银染研究

以野生豹纹鳃棘鲈Plectropomus leopardus为材料,采用抽血、植物血球凝集素(PHA)和秋水仙素体腹腔注射法,取头肾细胞制备染色体标本,对其染色体核型和Ag-NORs进行了分析。结果表明:豹纹鳃棘鲈二倍体染色体数目为48,其核型公式为2n=2st(t)+46t,NF=48;仅有1对NORs位于第1对染色体长臂靠近着丝粒的位置。

海南养殖方斑东风螺暴发性疾病病原分离鉴定及药敏分析

2011年4月,从海南工厂化养殖的患病方斑东风螺体内分离得到3株优势菌,经感染实验确定菌株DFL11-01为该暴发性疾病的致病菌,其对方斑东风螺注射感染的LD50为2.6×106CFU/g。采用常规形态和生理生化特征,对菌株DFL11-01进行鉴定,并以16SrRNA基因序列同源性分析法对所有3株分离菌进行同源性分析,结果表明,3株细菌均为哈氏弧菌Vibrio harveyi。药敏试验结果表明,菌株DFL11-01对阿洛西林、利福平等15种药物耐药;对头孢他啶、四环素等3种药物中介敏感;对氨苄西林、恩诺沙星、头孢三嗪、哌拉西林、左旋氧氟沙星等5种药物敏感。