极耐热双功能酶的表达纯化及性质研究

将含海栖热袍菌（Thermoga maritima）β-木糖苷酶（Xyl）基因的重组质粒p ET-28a-xyl导入大肠杆菌BL21-Codon Plus（DE3）-RIL中,经诱导实现高效表达,经热处理和Ni2＋亲和层析纯化达到电泳均一,并对纯化的重组酶Xyl的酶学性质进行研究。结果表明,重组Xyl同时具有木糖苷酶和阿拉伯糖酶活性,即为双功能酶。以对硝基苯酚-ɑ-阿拉伯呋喃糖苷（p NPAF）作为底物,重组酶Xyl的最适作用温度和最适p H分别为80～90℃和5.8,90℃的半衰期为1.0 h,在pH 7.0～7.8区间重组酶保持较高的稳定性。金属离子Mn2＋对重组Xyl的双活性有促进作用,而Cu2＋和SDS对酶的抑制作用最明显。重组Xyl能将低聚木糖中的木二糖和木三糖彻底分解为木糖。