丁苯酞对帕金森细胞模型保护作用的实验研究

目的通过丁苯酞(dl-3-n-butylphthalide,NBP)处理帕金森细胞模型,探究NBP保护作用的分子机制。方法用N-甲基-4-苯基吡啶鎓碘化物(MPP+)处理大鼠嗜铬细胞瘤细胞PC12构建帕金森细胞模型。实验分组为Control组、MPP+组、MPP++ML385组、NBP组、NBP+MPP+组与MPP++NBP+ML385组。Control组:无血清培养基培养24 h;MPP+组:含1 mM MPP+无血清培养基培养24 h;MPP++ML385组:含5μM ML385的1 mM MPP+无血清培养基培养24 h;NBP组:含20μM NBP无血清培养基培养24 h;NBP+MPP+组:含1 mM MPP+无血清培养基培养24 h后,再用20μM NBP培养4 h;MPP++NBP+ML385组:含1 mM MPP+无血清培养基培养24 h后,再用含ML385的20μM NBP培养4 h。镜下观察各组细胞形态变化,CCK-8检测各组细胞存活率,采用Western blot检测各组核因子E2相关因子2(NF-E2-related factor 2,Nrf2)、酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)及α-突触核蛋白(α-syn)的表达。结果与Control组相比,MPP+组体积变小,部分皱缩变圆,细胞数量减少,细胞存活率下降,α-syn表达增加(P<0.0001),Nrf2(P<0.05)及TH的表达减少;与MPP+组相比,NBP+MPP+组细胞数量增多且细胞形态有所恢复,细胞存活率升高,逆转了Nrf2、α-syn和TH的表达,且均具有统计学意义(P<0.001);与NBP+MPP+组相比,MPP++NBP+ML385组体积变小、胞体皱缩成球形,细胞数量和突触明显减少,细胞存活率下降,Nrf2及TH(P<0.01)表达减少,α-syn的表达增多(P<0.01)。结论NBP可能通过上调Nrf2对MPP+诱导的PC12细胞发挥神经保护作用。

PHF19对宫颈癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的探讨PHF19基因对宫颈癌细胞株Hela和HCC94的增殖、侵袭和迁移的影响。方法培养人宫颈癌Hela细胞和HCC94细胞,用siRNA敲低PHF19基因的表达。RT-qPCR检测不同组细胞中PHF19基因mRNA水平的表达情况。采用CCK-8检测细胞的增殖情况。采用细胞划痕、Transwell实验观察PHF19对宫颈癌细胞迁移、侵袭能力的影响。结果RT-qPCR结果显示,与对照组Hela细胞和HCC94细胞相比,siRNA-2-50组中PHF19的mRNA表达水平减少(P<0.05);CCK-8结果表明,与对照组Hela细胞和HCC94细胞相比,siRNA-2-50组细胞增殖活性降低(P<0.05);划痕和Transwell实验证实了,与对照组相比,siRNA-2-50组细胞侵袭和迁移能力降低(P<0.05)。结论PHF19基因可能促进宫颈癌Hela细胞和HCC94细胞的增殖和侵袭迁移能力。

Sprouty2蛋白在糖尿病性心肌病中表达的研究

目的:探究Sprouty2蛋白对糖尿病心肌病纤维化程度的影响。方法:选取24只雄性SD大鼠随机分为正常组、DCM组、DCM + Sprouty2慢病毒干扰组,每组8只。DCM组、DCM + Sprouty2慢病毒干扰组高糖高脂饮食喂养4周后,腹腔注射链脲佐菌素30 mg/kg,而正常组普通饲料喂养,腹腔注射柠檬酸钠缓冲液,12周时进行慢病毒转染,16周进行超声心动图检测后处死并取材。分别进行Masson染色、天狼猩红染色、免疫组织化学和TUNEL染色。结果:与正常组相比,DCM组、DCM + Sprouty2慢病毒干扰组血糖值升高,而DCM + Sprouty2慢病毒干扰组与DCM组比较,血糖进一步升高。通过超声心动图检测发现,抑制Sprouty2蛋白表达会进一步加重心功能障碍。与正常组比较,DCM组、DCM + Sprouty2慢病毒干扰组凋亡细胞数有所增加,而DCM + Sprouty2慢病毒干扰组的凋亡细胞量明显上升。通过病理学染色观察到,敲低Sprouty2蛋白导致大量心肌纤维断裂,大量炎性细胞产生,胶原纤维表达明显升高。在免疫组化和蛋白表达上,DCM组、DCM + Sprouty2慢病毒干扰组心肌组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达量升高,而DCM + Sprouty2慢病毒干扰组表达更加明显。结论:抑制Sprouty2蛋白可以促进DCM的纤维化程度,同时促进心肌细胞凋亡。因此,激活Sprouty2蛋白的表达可以逆转DCM。

miRNA-21对2型糖尿病心肌病大鼠心肌纤维化的影响

目的探究miRNA-21对2型糖尿病心肌病大鼠心肌纤维化的影响。方法将32只雄性SD大鼠随机分为四组:对照组、DCM组、DCM+干扰miRNA-21组、DCM+干扰对照组,每组8只。给予DCM组、DCM+干扰miRNA-21组、DCM+干扰对照组大鼠高糖高脂饮食4周后,腹腔注射25 mg/kg链脲佐菌素(STZ),每2周对各组大鼠进行体重、空腹血糖测量,第8周时经尾静脉对DCM+干扰miRNA-21组、DCM+干扰对照组进行慢病毒转染,第12周时所有试验动物处死,进行指标检测;qRT-PCR检测大鼠心肌组织中miRNA-21的表达;HE检测心肌细胞病理学改变;Masson检测心肌组织中胶原纤维的表达;免疫组织化学染色法观察α-SMA的表达。结果与对照组相比,DCM组大鼠出现体重先增长后下降的趋势,其空腹血糖≥11.1 mmol/L,差异有统计学意义(P<0.05);在转染慢病毒后(注射STZ第8周),与DCM+干扰对照组相比,DCM+干扰miRNA-21组大鼠体重有所增加,空腹血糖水平下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,DCM组、DCM+干扰miRNA-21组、DCM+干扰对照组大鼠心肌组织中miRNA-21表达量增加;与DCM+干扰对照组比较,DCM+干扰miRNA-21组心肌中miRNA-21表达量下降,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,DCM组、DCM+干扰miRNA-21组、DCM+干扰对照组大鼠出现心肌纤维断裂,周围有炎细胞浸润,且心肌中胶原纤维表达量增加;与DCM+干扰对照组比较,DCM+干扰miRNA-21组改善了心肌纤维的损伤,并降低了胶原纤维表达量,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,DCM组、DCM+干扰miRNA-21组、DCM+干扰对照组大鼠心肌组织中α-SMA表达量升高;与DCM+干扰对照组比较,DCM+干扰miRNA-21组的心肌组织中α-SMA表达量下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论miRNA-21参与了DCM的发展过程,抑制miRNA-21的表达可以改善DCM心肌纤维化。

丁苯酞对帕金森细胞模型的保护作用

目的通过丁苯酞进行预处理再制备帕金森细胞模型,探究丁苯酞的抗氧化保护作用。方法用1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridine,MPP+)处理人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞构建帕金森细胞模型。实验分组如下:Control组、MPP+组与丁苯酞组。Control组:含10%血清培养基培养;MPP+组:加入1 mmol/L MPP+培养24 h;丁苯酞组:先加入10μmol/L丁苯酞培养3 h后再加入1 mmol/L MPP+继续培养至24 h。镜下观察各组细胞形态变化,NO试剂盒检测各组细胞生成NO含量,利用Western blot检测各组α-突触核蛋白的表达情况。结果与Control组相比,MPP+组细胞总体数量减少,细胞突起明显减少、缩短,折光性改变,贴壁能力降低,细胞出现漂浮死亡,细胞内NO浓度明显增加(P<0.001),α-突触核蛋白的表达水平升高(P<0.001);与MPP+组相比,丁苯酞组细胞损伤程度有所减轻,存活细胞数量增加,贴壁能力增强,漂浮死亡细胞减少,细胞内生成的NO浓度降低(P<0.001),α-突触核蛋白表达水平降低(P<0.001)。结论丁苯酞可以改善细胞内的氧化应激水平,对神经元细胞产生一定的保护作用。