本科生病理学创新实验的探索

基于PBL(以问题为中心)教学模式,首先提出问题,指导本科生设计解决问题的方案,提高其分析问题和解决问题的能力,促进学生掌握基本的科研思路和科研方法,增强学习基础理论知识的兴趣,锻炼动手操作的能力,最终达到提高实验教学质量、增强教学效果和培养高素质医学人才的目的。

病理学实验课中融入“互动式教学”的实践

为提高病理学实验课的教学质量，培养适应医学发展的高素质型医学人才的需要，在2006级临床本科的病理学实验课中采用“互动式教学”的方法，结果实验组学生综合素质和实验成绩普遍提高。因此，互动式教学法有助于同步发展学生的知识和能力，提高教学效果。

病例讨论课在医学微生物学实验教学中的应用

实验教学是医学微生物学理论知识与临床实践相结合的桥梁,病例讨论课是医学微生物学实验教学的重要组成部分。通过病例讨论课的具体实施,不仅使学生更好地掌握了课程的相关知识点,把理论知识和临床实践结合起来,还有助于培养学生分析问题、解决问题的能力和教学质量的提高。

结肠癌组织中MMP-10、VEGF表达和MVD的相关性

目的 探讨结肠癌组织MMP -10、VEGF的表达和MVD值在血管生成、侵袭和转移中的作用及其相关性。方法 采用免疫组化S P法,检测44例结肠癌和5例正常结肠组织的MMP 10、VEGF、FⅧRAg、Ⅳ型胶原的表达情况。结果 44例结肠癌中MMP- 10和VEGF的表达阳性率分别为77 .2%和81. 8%,MMP 10表达阳性的结肠癌组织MVD值明显高于表达阴性者(P<0 .01); MMP- 10、VEGF的表达和MVD值与肿瘤分化、淋巴结转移、Dukes分期有明显相关(P<0 .01或<0 .05);MMP- 10与VEGF在结肠癌组织中表达呈正相关。结论 MMP -10和VEGF的表达以及MVD值与结肠癌侵袭转移密切相关,可能成为结肠癌治疗的标靶和预后指标。

甘薯的抗家兔主动脉粥样硬化形成作用

为观察甘薯糖蛋白对家兔实验性动脉粥样硬化形成的影响并探讨其可能的发病机制。将 4 0只新西兰白兔随机分为正常组 (饲以普通饲料 )、高脂组 (饲以胆固醇饲料 )、低剂量甘薯糖蛋白 (简称低剂量 )组 [饲以胆固醇饲料 +糖蛋白 0 .0 6g/ (kg·d) ]和高剂量甘薯糖蛋白 (简称高剂量 )组 [饲以胆固醇饲料 +糖蛋白 0 .1g/ (kg·d) ]。在实验开始时和 12周时分别检测血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、超氧化物歧化酶和丙二醛含量。第 12周末处死动物 ,行主动脉病理形态学观察。结果发现 ,实验前各组血清检测指标无明显差异。实验 12周 ,高脂组、低剂量组和高剂量组血清总胆固醇、甘油三酯、低密度和高密度脂蛋白胆固醇以及丙二醛含量均高于或明显高于正常组 (正常组、高脂组、低剂量组和高剂量组的总胆固醇分别为 1.2 7± 0 .73、2 0 .2 6± 0 .13、15 .2 7± 0 .83和 11.2 8± 1.6 2mmol/L ;甘油三酯分别为 0 .85± 0 .18、1.85± 0 .35、1.71± 0 .2 8和 1.5 1± 0 .11mmol/L ;低密度脂蛋白胆固醇分别为 0 .5 0± 0 .0 7、18.99± 2 .6 5、14 .2 7± 3.0 4和 12 .13± 3.5 6mmol/L ;高密度脂蛋白胆固醇分别为 0 .5 4± 0 .11、0 .75± 0 .10、0 .81± 0 .0 6和 0 .94± 0 .

黄精对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠葡萄糖转运蛋白-4基因表达的影响

目的观察黄精水提液对2型糖尿病(T2DM)胰岛素抵抗大鼠肌肉组织葡萄糖转运蛋白-4(GLUT-4)基因表达的影响。方法采用小剂量链脲佐菌素加高脂高热量饲料喂养方法建立2型糖尿病胰岛素抵抗模型,将造模大鼠随机分为模型对照组和黄精高、中、低剂量治疗组(分别灌胃10.0、5.0、2.5 g·kg-1·d-1),另选10只为正常对照组。灌胃8周后,空腹取材,反转录-聚合酶链反应法检测肌肉组织GLUT-4基因mRNA水平。结果与正常对照组相比,模型对照组及黄精高、中、低剂量治疗组大鼠GLUT-4基因mRNA表达减少,空腹血糖(FPG)显著升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。与模型对照组比较,黄精高、中、低剂量治疗组FPG均降低,其中以中、高剂量治疗组降低显著,差异有统计学意义(P<0.01);黄精高、中、低剂量治疗组GLUT-4基因mRNA表达均增高,其中以中、高剂量治疗组增高显著,差异有统计学意义(P<0.01)。结论黄精水提液具有增强T2DM胰岛素抵抗大鼠GLUT-4基因表达,从而降低血糖的作用。

黑木耳多糖对动脉粥样硬化形成中平滑肌细胞增殖的影响

目的 通过平滑肌细胞的致动脉粥样硬化形成作用,探讨黑木耳多糖对平滑肌细胞增殖的影响,以减少动脉粥样硬化的形成.方法 将30只新西兰白兔随机分为正常对照组、模型组和实验组3组,分别给予普通饲料（正常组）、高胆固醇饲料（模型组）以及高胆固醇加黑木耳多糖饲料（实验组）喂养.实验前及第12周时检测空腹12～14 h后血脂及血清中超氧化物歧化酶和丙二醛含量.喂养至第12周末处死动物,取主动脉行组织形态学观察及用免疫组织化学方法分析α平滑肌肌动蛋白的表达,HPIAS-1000高清晰度彩色医学图文分析系统进行图像分析.结果 与模型组比,实验组动物血脂水平显著降低（模型组和实验组总胆固醇分别为18.76±2.32和11.68±1.63;甘油三酯分别为1.52±0.15和1.19±0.12;低密度脂蛋白胆固醇分别为17.62±2.27和9.64±1.56;高密度脂蛋白胆固醇分别为0.65±0.09和0.73±0.76;P＜0.01）,血清中超氧化物歧化酶活力增高（模型组和实验组分别为182.3±10.9和216.0±7.4,P＜0.05）而丙二醛含量显著降低（模型组和实验组分别为4.53±0.21和4.14±0.14,P＜0.05）;实验组主动脉斑块面积明显小于模型组（模型组和实验组分别为0.44±0.10和0.30±0.83,P＜0.01）,斑块内平滑肌细胞也少（模型组和实验组分别为14%±1%和12%±1%,P＜0.05）.结论 黑木耳多糖可减少平滑细胞的增殖,从而减轻动脉粥样硬化形成.

间充质干细胞条件培养液对正常成纤维细胞及瘢痕成纤维细胞转化生长因子β产生和信号通路的影响

背景:已有文献报道,间充质干细胞可通过分泌大量生物活性因子有效减轻损伤的心脏、肺脏、肾脏等器官纤维化的发生。目的:观察骨髓间充质干细胞条件培养液对正常成纤维细胞和瘢痕成纤维细胞的影响及作用机制。方法:制备骨髓间充质干细胞条件培养液,将其作用于正常成纤维细胞和增生性瘢痕成纤维细胞,采用ELISA检测转化生长因子β的分泌水平,RT-PCR检测TGF-β/Smad信号通路相关基因Smad7的表达,比色法检测各组细胞上清液中羟脯氨酸的含量。结果与结论:(1)骨髓间充质干细胞条件培养液对增生性瘢痕成纤维细胞转化生长因子β的分泌、胶原的合成有显著抑制作用(P<0.01),并且明显增强Smad7基因的表达(P<0.01);(2)骨髓间充质干细胞条件培养液对正常成纤维细胞的影响较小;(3)结果表明,骨髓间充质干细胞条件培养液对增生性瘢痕成纤维细胞具有显著抑制作用,为干细胞防治皮肤瘢痕提供基础理论支持。

肝X受体激动剂GW3965对高糖所致心肌细胞凋亡的影响及作用机制

目的:观察GW3965对高糖诱导的心肌细胞凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法:取对数期H9c2心肌细胞,随机分为对照组(Control组)、高糖诱导组(高糖组)和高糖诱导+激动剂处理组(GW3965组)。GW3965组细胞加入10μmol/L GW3965预处理24h,之后高糖组和GW3965组细胞加入33mmol/L葡萄糖继续诱导培养24h。采用MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,JC-1荧光染料法检测线粒体膜电位,Western blot检测LXRα、ERK和p38 MAPK信号通路相关蛋白的变化。结果:GW3965可以提高H9c2抑制细胞凋亡,提高细胞存活率,改善细胞线粒体膜电位变化,并抑制ERK和p38 MAPK通路活性。结论:GW3965通过介导LXRα和MAPK通路减轻高糖诱导的细胞凋亡和线粒体损伤,对心肌细胞具有保护作用。

雌激素阻抑OA诱导的SH-SY5Y细胞tau蛋白磷酸化

目的研究雌激素对冈田酸(OA)诱导的人神经母细胞瘤系(SH-SY5Y)细胞tau蛋白磷酸化的影响。方法 MTT观察OA对SH-SY5Y细胞活力的影响,制备AD时tau蛋白过度磷酸化的细胞模型;Western blot检测OA及雌激素对Thr231位点tau蛋白磷酸化的影响。结果 MTT结果表明:当OA浓度大于40nmol/L时,细胞活力受到明显抑制,低于此浓度的OA对细胞活力的影响不明显;Western blot结果表明,SH-SY5Y细胞经OA(40nmol/L 12h)处理后,tau蛋白磷酸化水平明显增加,这种作用可被雌激素所抑制。结论雌激素抑制了OA诱导的SH-SY5Y细胞的tau蛋白过度磷酸化。

黄芪对大鼠脑缺血再灌注损伤c-fos和Bcl-2表达及细胞凋亡的影响

目的探讨黄芪对脑缺血再灌注损伤大鼠神经细胞凋亡和凋亡基因c-fos、Bcl-2表达的影响。方法 40只Wistar大鼠,体质量180～220 g,随机分为黄芪组、缺血4 h再灌注1 h组(Ⅰ组)、缺血4 h再灌注12 h组(Ⅱ组)、缺血4 h再灌注24 h组(Ⅲ组)和对照组。线栓法建立脑缺血再灌注损伤大鼠模型。切片分别行HE染色,应用免疫组织化学染色检测神经细胞凋亡基因c-fos、Bcl-2蛋白表达。结果对照组、Ⅰ组脑细胞未见明显变化,Ⅱ组轻度脑细胞水肿,Ⅲ组脑细胞明显水肿,黄芪组损伤区范围变小,肿胀减轻。与对照组比较,其余各组脑细胞c-fos和Bcl-2阳性表达率增高(P<0.01);黄芪组c-fos和Bcl-2阳性表达率较Ⅱ、Ⅲ组降低(P<0.01)。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组和黄芪组细胞凋亡指数较对照组明显增加(P<0.01);黄芪组较Ⅱ、Ⅲ组明显降低(P<0.01)。结论黄芪在脑缺血再灌注损伤后可抑制c-fos表达、增加Bcl-2表达,减轻脑细胞凋亡。

卵巢浆液性和黏液性肿瘤MUC1、MUC2的表达及其意义

目的探讨卵巢浆液性和黏液性肿瘤中黏蛋白MUC1、MUC2的表达与临床病理特征的相关性。方法免疫组化SP法检测90例卵巢浆液性和黏液性肿瘤的黏蛋白MUC1、MUC2的表达,并对其中50例恶性病例作生存分析。结果(1)交界性与恶性卵巢肿瘤中黏蛋白MUC1的表达阳性率明显高于良性肿瘤,差异有显著性(P<0.001);黏蛋白MUC1与WHO病理分级、FIGO临床分期、大网膜转移显著相关(P<0.05)。(2)黏蛋白MUC2与组织学类型、WHO病理分级相关(P<0.05)。(3)黏蛋白MUC1与MUC2呈负相关(P<0.05)。(4)对50例恶性浆液性和黏液性肿瘤进行的生存分析中,单因素分析显示:WHO病理分级、FIGO临床分期、大网膜转移、MUC1表达程度与预后相关(P<0.05),而多因素分析中只有FIGO临床分期、MUC1表达程度具有独立的预后意义(P<0.05),KaplanMeier生存曲线分析显示,Ⅲ、Ⅳ期较Ⅰ、Ⅱ期生存率差异有显著(P<0.01),MUC1阳性组和阴性组生存率差异有显著性(P<0.01)。结论黏蛋白MUC1、MUC2与恶性卵巢浆液性和黏液性肿瘤的浸润、转移相关,Ⅲ、Ⅳ期肿瘤、MUC1强表达可作为恶性卵巢浆液性和黏液性肿瘤预后不良的可行性指标。

骨髓间充质干细胞抑制皮肤瘢痕形成的机制研究

目的探讨骨髓间充质干细胞（BM—MSCs）抑制皮肤瘢痕形成的机制研究，为增生性瘢痕的防治提供实验基础。方法C57BL／6小鼠随机分为空白对照组、移植对照组、模型组以及MSCs移植组（n=6）。对照组和移植对照组小鼠每日于背部经皮下注射1mlPBS，3h后移植对照组经皮下注射1×10^6个MSCs，对照组给予相同剂量的PBS，模型组和MSCs移植组小鼠每日于背部经皮下注射1ml（1mg／m1）博来霉素，3h后MSCs移植组经皮下注射1×10^6个MSCs，模型组给予相同剂量的PBS，共计3周。RT—PCR检测与瘢痕形成相关的基因表达，免疫组织化学法检测皮肤纤维化程度指标α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）的表达。结果BM—MSCs下调了TGF—β1、Ⅰ型胶原及HSP47的表达，并且促进了MMP-2、MMP-9及MMP-β的表达，也使得α—SMA的表达下调。结论MSCs可以重塑细胞外基质以及抑制肌成纤维细胞生成，从而抑制皮肤瘢痕形成，为MSCs在皮肤创伤修复领域中的应用提供了新的实验基础。

木耳多糖对实验性动脉粥样硬化斑块消退作用的影响

目的:观察木耳多糖对动脉粥样硬化(AS)的预防和消退作用。方法:30只新西兰白兔随机分为3组:正常组、模型组、消退组。每组10只,实验期为16周。正常组始终喂饲普通饲料;模型组前8周喂饲普通饲料+高胆固醇,后8周喂饲普通饲料;消退组前8周喂饲普通饲料+高胆固醇,后8周喂饲普通饲料+多糖。实验期间测定血清总胆固醇(TC),甘油三脂(TG),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-TC),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-TC)含量以及脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量和清除脂质过氧化产物的酶超氧化物岐化酶(SOD)的含量。结果:木耳多糖具有明显降低血中TC、TG、LDL,升高HDL以及减少脂质过氧化产物丙二醛含量,提高超氧化物岐化酶(SOD)的活力,缩小已形成的动脉粥样硬化斑块的作用。结论:木耳多糖除具有降血脂,抗脂质过氧化,预防动脉粥样硬化形成作用外,还对已形成的动脉粥样硬化斑块有消退作用。

粘蛋白MUC5AC在原发性和转移性卵巢肿瘤中的表达及意义

目的探讨原发性和转移性卵巢肿瘤中粘蛋白MUC5AC的表达及临床病理意义。方法应用免疫组织化学SP法检测90例原发性卵巢肿瘤和30例转移性卵巢肿瘤组织中粘蛋白MUC5AC的表达。结果①原发性良性、交界性、恶性卵巢肿瘤MUC5AC的阳性表达依次为55%(11/20)、50%(10/20)、22%(11/50),P=0.0044;②粘蛋白MUC5AC的表达与组织学类型、病理分级相关(P<0.05),与年龄、肿物大小、FIGO临床分期无关(P>0.05);③粘蛋白MUC5AC在来源于胃、结肠的转移性卵巢肿瘤的阳性表达依次为60%(9/15)和13.33%(2/15),P=0.008;④原发性肿瘤与来源于胃的转移性肿瘤(P=0.010),来源于胃的转移性肿瘤与原发性肿瘤和来源于结肠的转移性肿瘤(P=0.004)有显著差异,原发性肿瘤与转移性肿瘤、原发性肿瘤与来源于结肠的转移性肿瘤无显著差异(P>0.05)。结论粘蛋白MUC5AC在原发性肿瘤中呈下调表达,MUC5AC对来源于胃的转移性卵巢肿瘤有鉴别意义。

牛肾小血管匀浆粗提物致家兔血管损伤的实验研究——Ⅱ、血管壁、内皮细胞与平滑肌细胞的组织学与超微结构改变

用牛肾小血管匀浆粗提物免疫家兔致Ⅱ型变态反应引起血管损伤,小血管壁水肿、腔小近闭塞,有少量白细胞浸润,早期内皮细胞与平滑肌细胞变性直至坏死。中期内皮细胞与平滑肌细胞开始再生,再生的细胞又发生变性、坏死。分析血管壁的抗原性弱,至抗体价高亦不引起急剧的渗出性炎、与Ⅲ型变态反应不同,是抗体于原位结合抗原引起损伤。

普罗布考对糖基化终末产物引发心脏微血管内皮功能紊乱的作用

目的:观察普罗布考(probucol)对糖基化终末产物(AGEs)作用后的心脏微血管内皮细胞iNOS表达的影响。方法:原代培养心脏微血管内皮细胞,AGEs(100 mg/L)体外模拟高糖环境,在probucol(5μmol/L,10μmol/L,20μmol/L)作用后,检测ROS、NO和iNOS变化情况。结果:与AGEs组比较,probucol组中ROS蛋白表达降低,NO生成增加,而iNOS蛋白表达降低,且显示有浓度依赖性。结论:probucol可能通过对抗氧化应激的途径,缓解AGEs引发的心脏微血管内皮功能障碍。

甘薯糖蛋白对动脉粥样硬化家兔血脂和一氧化氮影响的实验研究

目的观察甘薯糖蛋白对实验性动脉粥样硬化家兔血脂和一氧化氮的影响并探讨其可能的发病机制。方法将40只新西兰雄兔随机分为正常对照组(饲以普通饲料)、高脂组(饲以普通饲料+胆固醇)、低剂量甘薯糖蛋白组(饲以普通饲料+胆固醇+糖蛋白0.06g/kg.d)和高剂量甘薯糖蛋白组(饲以普通饲料+胆固醇+糖蛋白0.1g/kg.d)。在实验开始时和12周时分别检测血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇以及血清中一氧化氮含量。第12周末处死动物,行主动脉粥样硬化病理形态学观察。结果实验前各组血清检测指标无明显差异。实验12周,高脂组、低剂量甘薯糖蛋白组和高剂量甘薯糖蛋白组血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇以及一氧化氮含量均明显高于正常对照组(p<0.05或p<0.01),但低剂量甘薯糖蛋白组和高剂量甘薯糖蛋白组的上述指标除高密度脂蛋白胆固醇升高外,其它的都明显低于高脂组(p<0.01);同时低剂量甘薯糖蛋白组和高剂量甘薯糖蛋白组动物主动脉斑块面积明显小于高脂组(p<0.05或p<0.01)。结论甘薯糖蛋白对动脉粥样硬化有明显的预防和治疗作用,可能与其降血脂及减少一氧化氮生成有关,并且这种作用具有一定的量效关系。

黑木耳对实验性动脉粥样硬化形成后期的影响

目的：观察黑木耳对动脉粥样硬化(AS)的预防和治疗作用。方法：30只新西兰白兔随机分为三组：正常组、模型组、黑木耳组。每组10只，实验期为18w。正常组始终喂饲普通饲料；模型组前8w喂饲普通饲料+高胆固醇，后8w喂饲普通饲料；黑木耳组前8w喂饲普通饲料+高胆固醇，后8w喂饲普通饲料+黑木耳。实验期间测定血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL—TC)、高密度脂蛋白胆固醇(LDL—TC)含量以及脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量和清除脂质过氧化产物的酶超氧化物歧化酶(SOD)的含量。结果：黑木耳具有明显降低血中TC、TG、LDL，升高HDL以及减少脂质过氧化产物丙二醛含量，提高超氧化物歧化酶(SOD)的活力，缩小已形成的动脉粥样硬化斑块的作用。结论：黑木耳除具有降血脂，抗脂质过氧化，预防动脉粥样。硬化形成作用外，还对已形成的动脉粥样硬化斑块有治疗作用。

EB病毒感染套细胞淋巴瘤细胞株的表型研究

目的:建立EBV潜伏感染的体外理想模型。方法:我们利用新霉素耐性的重组遗传基因EBV(NeoR EBV)对套细胞的细胞株SP53进行感染,用G418筛选,选出100%EBV阳性的MCL细胞株SP53/EBV。结果:此细胞株表达EBER1、EB-NAs、LMP1,表现出LCL型的EBV潜伏感染的免疫表型.结论:这次我们建立的SP53/EBV细胞株,具有低增殖功能,没有诱导出活性指标等特点,可考虑为机体内EBV休眠期B细胞具有的特征,期待此细胞株可成为研究体内EBV潜伏感染的良好模型。