NS特异性siRNA真核表达载体的构建

目的 :构建nucleostemin(核干细胞因子 ,NS)特异性siRNA真核表达载体。方法 :以小鼠组织基因组DNA为模板 ,PCR方法克隆小鼠编码U6snRNA基因的启动子 ,将NS -siRNA表达序列、PolⅢ识别的终止信号与U6启动子连接起来 ,并将其插入 pcDNA4 /C载体中。 结果 :(1 )从小鼠基因组DNA中克隆到编码U6snRNA基因的启动子 ,(2 )构建了含有U6启动子、NS -siRNA表达序列和PolⅢ识别终止信号的NS -siRNA表达的片段 ,(3)将NS -siRNA表达片段插入了 pcDNA4 /C真核表达载体。 结论 :构建了针对NS特异性的siRNA真核表达载体 pcDNA4 /C -NS -Silencer。