左心疾病相关肺动脉高压的临床诊治进展

左心疾病（ LHD）不仅是导致心力衰竭的临床常见疾病,也是临床常见的导致肺动脉高压（PH）的病因之一.临床流行病学研究提示,LHD相关PH是PH最常见疾病类型之一,PH是LHD患者预后重要的预测因素之一,合并PH的LHD患者预后不良.超声心动图检查是目前临床常用的筛查LHD相关PH的无创性检查方法,同时对于LHD相关PH患者的基础疾病的诊断与病情评估也具有重要作用.LHD相关PH患者典型的血流动力学改变特点为毛细血管后PH.对于疑似LHD相关PH患者进行包括肺毛细血管楔压（PCWP）、肺动脉压力（PAP）、肺血管阻力（PVR）以及跨肺压梯度（ mPAP - mPCWP）等血流动力学参数的血流动力学评估,具有重要的临床诊断、鉴别诊断、疾病评估和治疗决策作用.LHD相关PH的治疗首先应进行LHD基础疾病的优化治疗.虽然缺乏大型临床试验和循证医学的证据支持,治疗动脉型肺动脉高压有效的PH靶向治疗药物也被初步应用于部分LHD相关PH患者的治疗.LHD相关PH研究领域可能是目前及今后PH研究领域的热点和难点之一,也可能是目前及今后心力衰竭研究领域的热点之一.

表观遗传学与环境相关疾病研究进展

表观遗传学研究没有DNA序列变化的可遗传的基因表达。很多人类疾病都伴有表观遗传机制的改变。本文综述了表观遗传学机制和研究进展及环境相关疾病的表观遗传机制改变。

中国人MTHFRC677T基因多态性与静脉血栓症相关性研究

目的评价中国人亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）677TT纯合子基因型与静脉血栓症（VTE）发生的相关性。方法联机检索Pubmed英文数据库、重庆维普全文数据库、中文科技期刊全文数据库、CNKI中国学术期刊网全文数据库等，同时应用Google学术搜索引擎协助搜索获得相关文献，通过meta分析系统地评价相关文献。结果本研究共纳入分析的研究12项，共包括病例943人，对照2506人。由于各研究者资料间无异质性（X2=11．12，P=0．40），故采用固定效应模型合并各研究数据。在病例组与对照组中，TT基因型与CT／CC基因型相比，合并的OR为1．75（95％的可信区间为1．41～2．17）。结论MTHFRTT基因型可以增加中国人群静脉血栓症的发病风险。

大骨节病患者外周血真菌毒素环境反应基因表达谱的研究

目的比较分析真菌毒素环境反应基因在大骨节病(KBD)患者和正常对照者外周血中的表达谱差异,探讨其与KBD患病风险的相关性。方法收集25例KBD成年患者和17例正常对照个体外周血样品,提取总RNA。采用Agilent全基因组表达芯片、单基因表达分析和基因集富集表达分析技术(GSEA),比较真菌毒素环境反应基因在KBD患者和正常对照个体外周血中的基因表达谱差异。基因表达芯片数据采用RT-PCR进行验证。结果①T-2毒素、雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、脱氧镰刀菌烯醇、黄曲霉毒素B1、赫曲霉毒素A和胶霉毒素相关的11个环境反应基因在KBD患者和正常对照个体外周血中的表达水平存在显著差异(表达率>2.0或<0.5),功能主要涉及细胞凋亡、免疫炎症和蛋白合成与修饰等。②真菌毒素相关的11个环境反应基因在KBD患者外周血中显著上调(P<0.05),功能涉及细胞凋亡、外环境刺激反应、生长发育和氧化还原反应等。结论多种真菌毒素环境反应基因在KBD患者外周血中表达异常。真菌毒素可能通过影响相关环境反应基因的表达,诱发软骨细胞功能障碍,导致关节软骨损伤。

T-2毒素中毒对低硒大鼠关节软骨细胞凋亡相关基因mRNA表达的影响

目的探讨T-2毒素对低硒喂养大鼠关节软骨细胞凋亡相关基因mRNA表达的影响,以了解大骨节病病因及软骨细胞凋亡的发生机制。方法新生的雄性大鼠随机分为4组,正常饲料组、低硒饲料组、正常饲料+T-2毒素组、低硒饲料+T-2毒素组。正常饲料和正常饲料+T-2毒素组、低硒饲料组和低硒饲料+T-2毒素组大鼠分别给予人工合成正常饮食和低硒饮食30 d。之后,正常饲料+T-2毒素组和低硒饲料+T-2毒素组给予T-2毒素(每天每克体重200 ng)灌胃30 d。提取大鼠关节软骨RNA,采用Real-Ti me PCR法检测凋亡相关基因P53、caspase-3、Bcl-2和Bax的mRNA表达。结果与正常饮食大鼠血硒(73.92±30.01)ng/mL相比,低硒饮食30 d的大鼠血硒为(4.16±3.56)ng/mL,二者之间有统计学差异(P<0.05)。与正常饲料组比较,低硒饲料组、正常饲料+T-2毒素组、低硒饲料+T-2毒素组中的P53、caspase-3、Bax的mRNA表达上调,Bcl-2的mRNA表达下调,差异有统计学意义(P<0.05);与低硒饲料组相比,低硒饲料+T-2毒素组中的P53、caspase-3、Bax的mRNA表达上调,Bcl-2的mRNA表达下调,差异有统计学意义(P<0.05);P53、caspase-3、Bax的mRNA在低硒饲料+T-2毒素组表达高于正常饲料+T-2毒素组;Bcl-2的mRNA在低硒饲料+T-2毒素组表达低于正常饲料+T-2毒素组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论每天每克体重200 ng T-2毒素作用30 d,可以引起低硒饲料喂养大鼠软骨细胞凋亡因子mRNA的表达改变。

p42^MAPK siRNA诱导HeLa细胞凋亡的相关基因表达研究

目的应用小干扰RNA(siRNA)沉默HeLa细胞MAPK p42,研究其诱导细胞凋亡的分子机制。方法将筛选的MAPK p42靶向小干扰RNA(p42MAPKsiRNA)用脂质体转染至HeLa细胞。激光共聚焦显微镜观察小干扰RNA处理的细胞内钙变化,免疫组织化学法检测细胞Bcl-2和Bax的表达,流式细胞仪检测细胞内Caspase-3的活性。结果小干扰RNA-1和小干扰RNA-2均可诱导HeLa细胞内钙升高,导致Bcl-2表达下调和Bax表达上调,但是Caspase-3未参与细胞凋亡过程。结论MAPK p42小干扰RNA介导的HeLa细胞凋亡与Bcl-2/Bax通路有关。

钠通道重叠综合征相关基因SCN5A在H9C2细胞中的表达

目的构建表型重叠家系相关基因SCN5A del QKP1507-1509突变型真核表达载体,研究其在H9C2细胞中的表达。方法一步法定点诱变技术构建SCN5A基因del QKP1507-1509突变型真核表达载体,电穿孔方法将野生型和突变型质粒转染至H9C2细胞,应用实时荧光定量聚合酶链反应(RFQ-PCR)及Western blot技术检测其mRNA及蛋白表达情况。结果琼脂糖凝胶电泳法及DNA直接测序法均表明定点突变成功,RFQ-PCR及Western blot结果显示,野生组、突变组和混合组SCN5A基因mRNA相对表达量分别为1.089±0.459、1.011±0.840和1.069±0.492,3组SCN5A基因mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。野生组、突变组和混合组SCN5A蛋白在H9C2细胞的相对表达量分别为3.781±0.221、3.466±0.176和3.714±0.198,3组SCN5A蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功构建钠通道基因del QKP1507-1509突变型真核表达载体并转染至H9C2细胞,该突变未引起钠通道在细胞膜的异常表达,为进一步功能研究提供了研究基础及方向。

青壮年猝死综合征与SCN5A基因突变的相关性

近几年来,国内外青壮年不明原因猝死的报道逐年增多,对其死因的界定是法医工作者深感棘手的问题。随着病因学向分子水平的深入,心脏病研究已用分子遗传学技术证实了一类“原发性心电紊乱”导致的心律失常与SCN5A突变引发的钠通道疾病有关,本文回顾了法医学中青壮年猝死综合征(SMDS)的特征及临床医学中几种疾病的基因型和表型,分析其相关性,期望为进一步研究获得一些启示。

硒蛋白S基因变异与疾病的研究进展

硒蛋白S是新近发现的一种与应激反应、炎症和细胞凋亡相关的硒蛋白。近年来有关硒蛋S的研究逐渐增多,尤其是硒蛋白S基因变异与疾病的关系日益受到重视。本文对硒蛋白S的生物学特性、功能以及基因变异与疾病的关系进行综述,以期为相关疾病的病因、发病机制以及防治提供新的思路。

促凋亡基因Nix的特性及对心肌疾病的作用

细胞凋亡是机体维持自身稳定的一种基本生理机制,是有许多基因产物及细胞因子参与的一种有序的细胞自我消亡形式。心肌细胞凋亡发生的主要机制是Bcl-2家族参与了细胞凋亡的"线粒体途径"。Bcl-2家族在线粒体凋亡通路中发挥了重要的作用,Nix蛋白是Bcl-2家族中BH3-only亚家族的一个促凋亡蛋白,其参与线粒体自噬、在低氧条件下能诱导细胞凋亡;Nix基因也可能是一个肿瘤抑制基因。近年研究发现其在诱导心肌细胞凋亡、坏死过程中发挥重要的作用。通过简述Nix特性、诱导细胞凋亡机制及通过对Nix在心肌疾病中的研究,来了解Nix在心肌疾病中的作用。

扩张性心肌病相关基因的研究进展

扩张性心肌病是一种主要累及心肌的原因不明的疾病,其发病机制可能与病毒感染、免疫调节异常、遗传因素等病因有关,近年来国内外发病率均有逐年升高的趋势,预后极差。已有研究表明,可以通过基因筛查选择易感基因进行干预来治疗此病,本文对近些年已研究过的与扩张性心肌病发病机制相关的基因进行综述,为从基因水平寻找其病因及发病机制提供依据。

T-2毒素对大鼠切牙成釉细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的影响

目的:研究不同剂量T-2毒素对大鼠切牙成釉细胞Bcl-2和Bax表达的影响。方法:选择30只SD大鼠,随机分为3组:对照组,实验组1和实验组2,T-2毒素灌胃剂量分别为每天每公斤体质量0、100、200 ng,每周灌胃6 d,连续灌胃4周后处死,取含牙的下颌骨,沿切牙长轴做5μm连续切片,SABC免疫组化检测成釉细胞Bcl-2和Bax蛋白表达,计算机图像采集积分光密度半定量分析Bcl-2和Bax蛋白表达量,蛋白表达量和积分光密度值成反比。结果:两实验组较对照组分泌期成釉细胞Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达上升,Bax/Bcl-2表达的比值上升,各组间均有显著性差异(P<0.05)。结论:T-2毒素可使大鼠切牙分泌期成釉细胞Bcl-2蛋白表达下降,同时上调Bax蛋白表达。高剂量T-2毒素影响更明显。

大骨节病关节软骨细胞凋亡及其相关调控因子的表达

目的探讨大骨节病患者关节软骨细胞凋亡及相关调控因子Bcl-2、Bax、Fas及iNos表达分布的特点.方法收集15例大骨节病儿童和15例正常对照儿童关节软骨.采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的脱氧核糖核酸缺口标记(TUNEL)技术和Bcl-2、Bax、Fas及iNos蛋白免疫组化抗生物素蛋白-生物素-碱性磷酸酶(B-SA)法染色,观察大骨节病儿童和正常对照儿童关节软骨的凋亡细胞和Bcl-2、Bax、Fas及iNos蛋白阳性表达细胞的密度与分布.结果 (1)大骨节病儿童关节软骨中层凋亡阳性细胞数[(33.60±2.71)%]较正常关节软骨[(1.33±0.41)%]显著增多(t=11.59,P＜0.01);(2)大骨节病儿童关节软骨表层和中层Bcl-2、Bax、Fas及iNos的表达显著高于正常关节软骨中的表达(t=11.75～18.65,P＜0.01);大骨节病儿童关节软骨各层Bcl-2、Bax、Fas及iNos表达阳性率有显著性差异(F=73.49～114.42,P＜0.01),以表层最多[分别为(41.93±12.26)%、(45.60±15.78)%、(53.60±16.49)%和(45.47±14.02)%],其次为中层[分别为(14.93±3.50)%、(13.87±4.32)%、(23.27±4.83)%、(21.67±6.82)%].结论大骨节病患者关节软骨细胞凋亡及相关调控因子Bcl-2、Bax、Fas、iNos表达较正常人显著增多.

西藏珞巴族HLA-DRB1基因多态性

目的:检测西藏珞巴族HLA DRB1等位基因及基因型频率,并将其与18个人群的HLA DRB1频率进行比较,绘制系统发生树。方法:应用聚合酶链反应序列特异性寡核苷酸探针(PCR SSO)技术,对我国西藏南部林芝地区3代内无血缘关系的92个珞巴族健康个体进行了HLA DRB1位点的基因分型。采用不加权配对组算术方法(UPGMA)绘制系统发生树。结果:在92例珞巴族个体的184个等位基因中共检出11种HLA DRB1等位基因,其中HLA DRB1*04(27. 20% ),DRB*12(25. 50% )在珞巴族中最常见,共占珞巴族可检出等位基因的52. 70%;其他频率大于5%的等位基因还有DRB1*14(15. 20% ),DRB1*15(9. 80% )和DRB1*08(8. 20% )。结论:西藏珞巴族HLA DRB1等位基因分布与其他华人群体均存在很大的差异,显示其HLA等位基因频率分布的民族独特性;在遗传距离上珞巴族和藏族最近,这与民族学、历史学和社会学研究结果相一致。

苦参碱抑制人肾癌细胞系GRC-1细胞株增殖和促凋亡的实验研究

目的观察苦参碱对体外人肾癌细胞系GRC-1细胞株增殖及细胞凋亡的影响,探讨苦参碱诱导GRC-1细胞株凋亡的作用机制。方法应用不同浓度的苦参碱分别作用于人肾癌细胞系GRC-1细胞株24、48、72、96h。采用MTT法观察苦参碱对GRC-1细胞株的细胞毒作用;透射电镜和流式细胞术观察、检测苦参碱诱导的细胞凋亡;免疫细胞化学技术检测苦参碱对GRC-1细胞株Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。结果不同浓度的苦参碱对GRC-1细胞株均有一定的增殖抑制作用,且呈量效和时效关系。苦参碱能明显诱导GRC-1细胞株凋亡。经苦参碱作用后,GRC-1细胞株Bcl-2蛋白表达明显减弱而Bax蛋白表达明显增强。结论苦参碱对体外人肾癌细胞系GRC-1细胞株有一定的增殖抑制作用,其机制可能与调节Bcl-2/Bax蛋白表达比值以诱导细胞凋亡相关。

抗心衰复方对豚鼠慢性心力衰竭的实验研究

目的探讨抗心衰复方片(CTMC)对豚鼠慢性心力衰竭(CHF)心脏功能的影响。方法采用皮下反复注射异丙肾上腺素6周,制作豚鼠心肌缺血型CHF模型。观察CTMC对CHF豚鼠血流动力学、脏器/体质量比、病理改变和血清心肌肌钙蛋白-I(cTn-I)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)含量的影响。结果CHF动物模型制作成功;CTMC可明显降低左室舒张压和左室舒张末压,中、大剂量组尤为显著;可显著提高左室收缩和舒张最大速率的绝对值,大剂量组更显著;明显减轻心肌细胞损伤和坏死;并可降低血清cTn-I、CK-MB含量,差异有统计学意义(P<0.01)。结论抗心衰复方片可改善CHF心脏的舒张功能和心肌细胞损伤,并呈现药物剂量依赖性。

有机镓治疗维甲酸诱导骨质疏松模型大鼠的实验研究

目的对比研究有机镓和无机镓对维甲酸致大鼠骨质疏松模型骨代谢的影响及治疗作用。方法用维甲酸按85mg/(kg·d)灌胃15d,建立大鼠骨质疏松模型,经有机镓、氯化镓灌胃给药治疗4周后,应用生化、病理等方法研究其对骨代谢相关指标的影响,并比较其治疗效果。结果维甲酸可引起大鼠骨结构、骨钙及其它元素含量的改变,血清抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、碱性磷酸酶(AKP)明显上升等改变。应用有机镓、氯化镓治疗后,可改善骨密度及骨形态计量学参数,增加股骨和牙齿中的镓、钙、磷含量,降低TRAP和AKP活性,其中以有机镓效果最明显,且用量最少。结论在动物实验中,镓盐能通过降低骨转换率而改善骨质疏松,且有机镓较无机镓更安全、有效。

大骨节病、骨关节炎软骨细胞分泌IL-1β、TNF-α及透明质酸对其影响实验研究

目的:探讨在不同剂量透明质酸作用下,人大骨节病(KBD)软骨细胞和骨关节炎(OA)软骨细胞对IL-1β、TNF-α合成分泌的影响,为临床上透明质酸钠治疗OA及KBD提供实验依据。方法:将符合临床诊断标准的KBD及OA患者与从遭遇意外事故的病人作为正常对照,分离、体外培养三组患者关节软骨细胞,分别给予100μg/ml(H100组)、500μg/ml(H500组)不同剂量的透明质酸钠(HA)干预及阴性对照(0.00μg/ml,H0组),通过放免测定细胞培养上清液中IL-1β、TNF-α的含量变化。结果:与正常组比较,KBD和OA组软骨细胞IL-1β、TNF-α明显增高;HA干预随其剂量增高抑制IL-1β、TNF-α合成增强,对TNF-α的抑制有统计学意义。结论:骨关节炎和大骨节病患者软骨细胞合成分泌IL-1β、TNF-α明显增加;应用透明质酸后,可降低两种炎性因子的分泌。

大骨节病差异表达基因PAPSS2对成骨细胞矿化及碱性磷酸酶活性的影响

目的探讨大骨节病差异表达基因PAPSS2在MC3T3-E1细胞成骨样分化过程中的表达及其对碱性磷酸酶(ALP)活性和细胞矿化的影响。方法培养MC3T3-E1细胞并诱导成骨分化,观察PAPSS2在成骨细胞分化过程中的基因及蛋白表达情况;用慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)技术或逆转录病毒转染高表达载体,分别构建PAPSS2低表达慢病毒及逆转录病毒高表达载体包装,滴度测定,验证细胞转染效率;分别转染MC3T3-E1细胞并设空白对照组,观察PAPSS2沉默或高表达后ALP活性的变化及细胞成骨矿化的影响。结果 PAPSS2在成骨细胞分化过程中mRNA及蛋白均随着矿化过程表达增加。用慢病毒介导的RNAi技术,成功降低了MC3T3-E1成骨细胞中PAPSS2的表达,使用逆转录病毒转染高表达载体显著增加PAPSS2基因的表达。PAPSS2沉默表达时,ALP活性和细胞矿化作用显著降低,高表达后其作用相反。结论 PAPSS2可调节成骨细胞ALP活性和细胞矿化作用,其异常表达可能与大骨节病骨骼病变相关。

镓盐对维甲酸致大鼠骨质疏松模型影响的动态实验研究

目的研究镓盐对维甲酸致骨质疏松大鼠骨代谢的影响。方法通过维甲酸灌胃给药建立大鼠骨质疏松模型,观察血、尿及骨的代谢变化;建立骨质疏松模型后,实验分为四组:正常对照组、骨质疏松组、雌激素治疗组和氯化镓治疗组,治疗两个月,观察治疗前后模型动物骨代谢及血清和尿中相关指标的影响。同时,动态比较治疗30天和治疗60天的治疗效果。结果维甲酸导致大鼠骨结构改变,密度降低,骨有机基质含量下降,血清抗酒石酸酸性磷酸酶上升。应用氯化镓后,可减轻因维甲酸激活破骨细胞使骨吸收增强造成的上述损伤,大鼠平均骨小梁宽度、平均骨皮质厚度、骨小梁百分比增加;TRAP和AKP活性降低,接近正常组水平。结论镓盐是一种有效的降低骨转化率的药物。