LY294002对小鼠体内调节性T细胞的影响

背景:研究已证实,磷酸肌醇3激酶特异性阻滞剂LY294002在体外具有剂量依赖性抑制细胞活性的作用,可以用于诱导肿瘤细胞凋亡,但LY294002对正常免疫系统的影响尚不清楚。目的:观察抗肿瘤药物LY294002对C57BL/6小鼠体内调节性T细胞的影响。设计、时间及地点:以调节性T细胞比例为观察对象,分组对比实验,于2008-08/12在广州南方医科大学珠江医院移植免疫研究所完成。材料:14只8周龄SPF级C57BL/6小鼠随机分成实验组与对照组,每组7只。LY294002购自广州英韦创津公司。方法:实验组腹腔注射LY294002溶液200μL(0.1mg),对照组给予等体积PBS。10h后后眼眶静脉从采血,并分离脾脏、胸腺,制备单细胞悬液,流式细胞术检测小鼠外周血、脾细胞和胸腺细胞中的CD4+CD25highT细胞。主要观察指标:小鼠外周血、脾细胞和胸腺细胞中CD4+CD25highT细胞的比例。结果:实验组小鼠外周血、脾脏、胸腺中CD4+CD25highT细胞比例分别为(0.787±0.036)%,(0.921±0.063)%,(1.230±0.131)%,对照组小鼠外周血、脾脏、胸腺中CD4+CD25highT细胞比例分别为(0.640±0.030)%,(0.639±0.046)%,(0.857±0.077)%,实验组和对照组比较差异有显著性意义(P<0.01,P<0.05)。结论:腹腔注射LY294002可提升小鼠体内调节性T细胞的比例,提示其有可能会抑制机体免疫反应,从而不利于治疗。

坏死细胞诱导并促进炎症反应

目的研究坏死细胞对炎症的诱导以及促进作用。方法以加热法诱导小鼠胸腺细胞坏死。在体外培养的小鼠巨噬细胞株RAW264.7中加入坏死细胞(巨噬细胞:坏死细胞=1:5),或者同时加入坏死细胞与内毒素脂多糖(LPS,100ng/ml),18h后收集上清。以Bio-Plex悬浮蛋白芯片系统检测上清中细胞因子分泌和表达变化情况。结果和单纯培养的巨噬细胞相比,培养体系中加入坏死细胞后,炎症性细胞因子TNF-α和IL-6分泌表达明显增加。若同时加入坏死细胞和LPS,则两者发生协同作用,更加显著地促进上述因子的分泌。结论坏死细胞不仅本身能诱导炎症性细胞因子TNF-α和IL-6表达,还能与LPS发生协同作用,进一步促进上述细胞因子的分泌,表明在炎症反应的发生和加重过程中,坏死细胞起着重要的作用。

自体凋亡细胞静脉回输联合雷帕霉素对恒河猴体内调节性T细胞的影响

目的观察凋亡细胞联合雷帕霉素对恒河猴体内调节性T细胞(Treg)的影响,探讨减少雷帕霉素用量,降低免疫抑制剂副作用的方法。材料及方法以CD4+FOXP3+调节性T细胞比例为观察对象,分组对比实验,4只雄性恒河猴8～10岁龄,体重7～8kg,随机分成实验组和对照组,每组2只。实验组采用低剂量雷帕霉素加凋亡细胞输注的方法,每天给予口服0.4mg雷帕霉素,同时静脉输注凋亡细胞一次;对照组每天给予同样剂量的雷帕霉素,同时静脉注射PBS。定期检测各组恒河猴外周血中CD4+Foxp3+Treg,并计算Treg占CD4+T细胞的比例。对比两组恒河猴Treg变化曲线的异同。结果单纯口服雷帕霉素的恒河猴,Treg/CD4+T比例在1只猴未见明显增加,在第38天为6.92%,另1只仅在4周后明显增加,在第38d为13.7%;而注射凋亡细胞联合雷帕霉素组的恒河猴,其Treg/CD4+T的比例在输注凋亡细胞后2～3周即有明显增加,2只猴在第38d Treg/CD4+T细胞比例升至16.67%和21.56%。结论凋亡细胞联合雷帕霉素有可能升高恒河猴体内Treg的比例。

肝窦内皮细胞与凋亡细胞相互作用对促炎症因子分泌水平的影响

目的研究肝窦内细胞(HSEC)与凋亡细胞互相作用后促炎症因子分泌水平的变化。方法紫外线诱导人淋巴细胞凋亡;对照组:体外人HSEC单独培养。实验组:人HSEC与同种异体凋亡淋巴细胞细胞直接共培养。两组均培养16h后,收集上清液,利用Luminex技术检测上清液促炎症性的细胞/化学因子水平,包括IL-2、ⅡNF-γ、TNF-α。结果实验组IL-2、ⅡNF-γ、TNF-α分泌水平比对照组下调约50%,两组数值的差异有显著性(P<0.05)。结论HSEC与凋亡细胞作用后能使促炎症因子下调,调控局部免疫微环境,使免疫反应偏向耐受。

冠心病患者外周血T淋巴细胞PD-L1的表达及意义

目的研究程序性死亡配体-1(PD-L1)在冠心病患者外周血中T淋巴细胞上的表达及意义。方法按照WHO关于冠心病诊断标准,将实验分为稳定型心绞痛(SA)组(n=23)、急性冠脉综合征(ACS)组(n=21)和正常对照组(n=18),三组均经冠状动脉造影证实。采集三组人群的外周血,用流式细胞技术及RT-PCR技术测定T淋巴细胞PD-L1蛋白及mRNA表达情况。结果与正常对照组比较,SA组和ACS组外周血T淋巴细胞PD-L1蛋白及mRNA表达水平均显著升高(P<0.01);但SA组与ACS组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论冠心病患者外周血T淋巴细胞PD-L1表达上调,其可能在动脉粥样硬化斑块形成过程中起作用。

环孢素A对小鼠体内调节性T淋巴细胞的作用及机制

目的探讨环孢素A（CsA）对小鼠体内CD4^＋ Foxp3^＋调节性T淋巴细胞的作用及机制。方法选择雄性C57BL／6小鼠20只，随机平均分为两组。实验组小鼠腹腔注射环孢素A20mg·kg^-1·d^-1×2周；对照组小鼠腹腔注射等体积的磷酸盐缓冲液（PBS）×2周。2周后，两组小鼠在无菌条件下经眼球采集外周血，并分离脾脏和胸腺，制备单细胞悬液。采用流式细胞仪检测小鼠外周血、脾细胞和胸腺细胞悬液中的CD4^＋Foxp3^＋T淋巴细胞的比例。结果实验组小鼠外周血、脾细胞和胸腺细胞悬液中CD4^＋Foxp3^＋T淋巴细胞的比例分别为（0．581±0．089）％、（2．189±0．046）％和（O．472±0．049）％，对照组的比例分别为（1．751±0．227）％、（3．684±0．169）％和（1．412±0．188）％，两组间比较，差异均有统计学意义（P〈0．001）。结论CsA可以损害小鼠体内调节性T淋巴细胞的发育，从而减少调节性T淋巴细胞的数量。

建立快速检测淋巴细胞内磷酸化信号传导及转录激活子的方法

目的建立淋巴细胞内磷酸化信号传导及转录激活子(STAT)的快速检测方法。方法人单个核细胞或外周静脉血淋巴细胞用IL-6、IL-4和IFN-α1体外刺激15min,运用流式细胞术检测胞内STAT3(pY705)、STAT6(pY641)和STAT1(pY701)磷酸化水平,并比较不同破膜剂对它的影响。结果与0.2%皂素、90%甲醇比较,PurmbufferⅢ破膜剂破膜后,能够显著地提高淋巴细胞内STAT3的磷酸化水平(P<0.01)。结论经PermbufferⅢ破膜后,运用流式细胞术可快速检测磷酸化STAT3、STAT6和STAT1。