糖基化实验技术在临床医学研究中的应用

血清蛋白大多数是糖蛋白,当疾病发生时,糖蛋白首先出现的变化就是糖基化改变。糖蛋白糖基化在人体生理、病理过程中所起的作用,正逐渐被人们所认识,尤其在肿瘤方面的研究,已成为国内外研究的热点。但是由于研究糖蛋白糖基化的实验方法和手段技术要求较高,以往多局限于基础研究,较少用于临床医学研究。近年来,随着相关学科的发展,开展了一系列以凝集素为基础的实验技术,如凝集素亲和层析法、电泳法、ELISA和Wesfern印渍法等方法,并广泛在临床中应用,进一步了解了疾病时的糖基化改变。目前已知疾病种类不同,发生的糖基化改变不同,如肝脏良性疾病时唾液酸化减弱,糖链分枝增加,而癌症时唾液酸化和岩藻糖化增加;肿瘤细胞的糖基化改变直接影响患者的细胞免疫功能状态,并影响治疗的效果和疾病的预后。

商陆皂苷甲对银屑病患者外周血单个核细胞产生α肿瘤坏死因子和可溶性白介素2受体的影响

目的:研究在体外商陆皂苷甲(EsA)对银屑病患者外周血单个核细胞(PBMC)分泌肿瘤坏死因子(TNF-α)和可溶性白介素2受体(sIL-2R)水平的影响,探讨其治疗银屑病的可能机制。方法:标本取自30例寻常性银屑病患者和20名健康献血员,利用EsA分别与脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)或植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)协同刺激PBMC,用双抗体夹心ABC-ELISA检测PBMC培养上清液中TNF-α和sIL-2R水平。结果:EsA浓度为1.0～10.0μg/mL时,呈剂量依赖性地明显抑制银屑病患者PBMC释放TNF-α(P<0.05)。EsA浓度在0.5～10.0μg/mL时,PBMC分泌sIL-2R呈轻微的下降趋势,但差异无统计学意义(P>0.05),EsA对PHA诱导的sIL-2R释放无显著的抑制作用。结论:抑制TNF-α等炎症递质的释放可能是中国商陆治疗银屑病的机制之一。

商陆皂苷甲对体外培养的人角质形成细胞增殖的影响

目的 研究商陆皂甙甲（EsA）体外对人角质形成细胞（KC）增殖的影响，探讨其治疗银屑病的可能机制。方法 外周血标本取自30例寻常型银屑病患者和20名健康献血员，以EsA与植物血凝素（phytohemagglutinin，PHA）协同刺激PBMC。皮肤标本取自10例行包皮环切术儿童。分离出正常人表皮KC与PBMC共育，加入设定浓度的EsA。MTT比色法检测细胞增殖率。结果 在体外EsA显著抑制生长于KSFM的KC增殖；EsA浓度在5．0-10．0μg／ml时呈剂量依赖性非常显著抑制PBMC对KC的促增殖作用（P〈0．01）。结论 银屑病患者PBMC体外可明显刺激KC增殖。EsA可显著抑制生长于KSFM的KC增殖并可阻断或抑制PBMC对KC的促增殖作用。

软骨组织工程种子细胞来源的最新研究进展

耳、鼻、喉和气管主要由软骨构成,软骨组织工程技术的进展为这些器官的修复开辟了新的途径。软骨细胞是软骨组织工程修复重建的原动力。在体外培养过程中,随着传代次数的增多,软骨细胞容易失去表型,丧失形成软骨的能力。组织工程软骨形成的重要条件之一是必须获得大量的有功能和活力的种子细胞,因此寻求广泛的种子细胞来源是软骨组织工程修复首先需要解决的关键问题。理想的软骨种子细胞必须具备取材方便、体外有较强的繁殖和定向分化能力等优点。

双自杀基因系统对乳腺癌细胞体外特异性杀伤作用

目的:探讨腺病毒介导VEGF启动子驱动的CD/TK双自杀基因体系(Ad-VEGFP-CD/TK)对乳腺癌细胞MCF-7的体外靶向杀伤作用。方法:用重组腺病毒Ad-VEGFP-CD/TK体外感染表达VEGF的MCF-7细胞和不表达VEGF的原代培养的乳腺上皮细胞,荧光显微镜观察其感染率,并以RT-PCR、Westernblot方法检测受感染细胞CD/TK的表达,然后给予前药GCV和5-FC,用MTT法观察该体系对细胞生长增殖的影响;电镜观察细胞的病变;用流式细胞术观察细胞内DNA含量的变化;分光光度法检测细胞内Caspase-3活性。结果:腺病毒对两种细胞的感染率相似,其感染率随腺病毒滴度的增高而递增。RT-PCR和Westernblot检测发现转染Ad-VEGFP-CD/TK的MCF-7细胞有目的基因和蛋白的表达,而乳腺上皮细胞无表达。MTT法检测显示表达VEGF的MCF-7细胞对前药具有较高的敏感性,而不表达VEGF的乳腺上皮细胞对前药不敏感。在感染复数为100时,电镜下可见用药组MCF-7细胞有凋亡改变。用流式细胞仪测定用药组出现典型的凋亡峰;且随着前药浓度的升高转基因细胞内Caspase-3活性逐渐升高。结论:VEGF启动子可调控双自杀基因体系选择性杀伤人乳腺癌细胞MCF-7并诱导细胞凋亡,细胞内Caspase-3活性升高可能是其诱导细胞凋亡的机制之一。

与软骨损伤修复有关的生长因子与基因治疗技术

软骨修复是一个极其复杂的过程,生长因子是软骨组织工程的重要工具,参与软骨细胞的增殖、分化和基质代谢活动,同时作为信号物质参与软骨修复的调节,在软骨修复的过程中起重要的促进作用。体外软骨细胞培养过程中软骨细胞表型的丧失以及植入体内后局部缺乏生长因子均影响软骨缺损的修复,通过基因转导技术修饰的软骨细胞既能够促进损伤软骨细胞的修复和增殖分化,又可以在体内软骨再生过程中持续、高效地在局部分泌生长因子,提高修复质量。

脑胶质瘤中性糖脂抗原的分离纯化及分析

应用离子交换层析技术从脑胶质瘤、正常人脑及胎儿脑组织中分离并纯化出中性糖脂（Ｈ─ＧＳＬ），经高效薄层色谱分析，纯度可靠。胶质瘤Ｎ─ＧＳＬ中出现一组特异性条带，主要分布于Ｇｌｃｃｅｒ与ＣＴＨ之间，而正常人脑则以Ｇｌｃｃｅｒ和Ｇａｌｃｃｅｒ表达为主，ＣＤＨ及ＣＴＨ等长糖链Ｎ─ＧＳＬ缺失。胎儿脑组织Ｎ─ＧＳＬ与胶质瘤Ｎ─ＧＳＬ相似，主要分布于ＣＴＨ与Ｇｌｏｂｏｓｉｄｅ之间。

经皮穿刺冷冻腰神经后支治疗腰痛的应用解剖

在15具成人尸体和6套成人骨架上,观测了腰神经后支。结合冷冻腰神经后支止痛术式,按本文提供的表面投影数据,垂直刺入4～5cm,即能贴近各腰神经的后支。对 L_5神经后支的穿刺,应在骶骨上关节突下内或 L_5神经横突占内下方1.5cm 处进针。

自体血光量子疗法治疗支气管哮喘的临床研究

近年来自体血光量子疗法(自体血紫外线照射回输疗法UBI)治疗某些疾病有明显疗效,引起国内研究者的关注。为进一步探讨UBI在内科疾病领域中的应用,本文用此疗法治疗13例急性发作期支气管哮喘,并与同期住院本病急性发作期患者8例未采用本疗法进行比较,以期对UBI治疗支气管哮喘的疗效做出评价。 材料和方法 一、对象 本文观察的21例支气管哮喘(急性发作期)均为我科住院病人,全部病例符合全国肺心病会议制定支气管哮喘诊断标准。分为治疗组13例及对照组8例。 二、方法 1.自血光量子疗法组(治疗组):13例患者均经各种平喘药及激素治疗后,哮喘仍反复发作者。其中2例哮喘持续状态,2例呼吸衰竭。其方法是取静脉血200ml。

肝癌、胎肝及正常肝组织中性糖脂纯化和分析

取肝癌、胎肝及正常肝组织，经氯仿：甲醇提取总脂，通过ＤＥＡＥ─ＳｅｐｈａｄｅｘＡ２５层析，碱水解和ｆｌｏｒｉｓｉｌ层析获得纯化的中性糖脂。经高效薄层色谱层析和薄层扫描分析，与标准中性糖脂比较，正常肝ＣＤＨ与ＣＭＨ表达减弱；肝癌ＣＤＨ和ＣＭＨ表达增加，胎肝ＣＤＨ也增加。肝癌中性糖脂的表达存在异质性。经乳酸脱氢酶法证实，肝癌中性糖脂对正常人外周血ＮＫ细胞的活性有明显的抑制作用。本文结果提示肝癌组织中性糖脂存在异常合成。

空气中致敏真菌数量和种类的调查

采用曝片和曝皿方法调查广州市区全年空气中致敏真菌数量、种类的分布及其季节性消长情况，室内采样设在距市中心１５００米附近大楼四楼内走廊，室外设在该大楼约１００米旅店四楼的顶平台。全年室外曝片３６５张，获得真菌孢子２３４６个，鉴定３２个种属共２２８６个，其孢子优势菌为交链孢霉、黑粉霉和锈菌；室内外曝皿７２个，获得菌落８ｌ２个，其菌落优势为无孢子群、着色芽生菌和青霉。本文就致敏真菌与广州地理环境、季节性消长规律的关系及其意义作了讨论。

乙酰肝素酶基因在子宫内膜异位症患者在位与异位子宫内膜组织中的表达

目的 研究乙酰肝素酶基因在子宫内膜异位症发病中的作用。方法 应用原位杂交技术 ,检测腹腔镜手术中证实为子宫内膜异位症患者 (EM组 ,2 3例 )的在位和异位子宫内膜组织乙酰肝素酶mRNA的表达 ,并与正常妇女 (对照组 ,2 5例 )子宫内膜组织比较。结果 ( 1)EM组在位与异位子宫内膜乙酰肝素酶mRNA阳性表达率一致 ,但异位子宫内膜组织中 ,阳性细胞着色较深。在位子宫内膜腺上皮细胞较间质细胞胞浆染色深 ,异位子宫内膜腺上皮细胞与间质细胞胞浆着色基本一致 ;EM组增生期与分泌期子宫内膜均有乙酰肝素酶mRNA的表达 ,增生期阳性表达率为 83 3%( 10 / 12 ) ;分泌期为 72 7% ( 8/ 11) ,两者比较 ,差异也无显著性 (P >0 0 5 ) ;( 2 )对照组增生期子宫内膜乙酰肝素酶mRNA的阳性表达率为 4 1 7% ( 5 / 12 ) ,分泌期子宫内膜阳性表达率为 7 7% ( 1/ 13) ,两者比较 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。 ( 3)EM组子宫内膜乙酰肝素酶mRNA阳性表达率为 78 3% ( 18/2 3) ;对照组为 2 4 0 % ( 6 / 2 5 ) ,两者比较 ,差异也有显著性 (P <0 0 5 )。结论 乙酰肝素酶基因的表达与子宫内膜异位症的发病相关 ,其可能成为子宫内膜异位症治疗的一个有价值的靶点。

内皮细胞生长因子治疗皮肤溃疡

用本院自制的内皮细胞生长因子(ECGF)治疗皮肤溃疡,取得较好疗效,现报告如下。一、临床资料由于我们采用自身皮肤溃疡作为对照,所以同时有2个或2个以上皮肤溃疡的病人才被选为观察对象。特殊感染与恶性肿瘤性溃疡不作为观察对象。共观察14例,皮肤溃疡总数达42个,其中男6例,女8例,年龄18～7l岁,平均44.8岁。按病因可分为三类即:静脉曲张性溃疡(5例)、褥疮溃疡(4例)和血管炎性溃疡(5例)。三类皮肤溃疡治疗组与对照组的平均溃疡数、平均面积、平均深度与平均持续时间在统计学上无显著性差异。