生物制剂Ⅰ期临床试验中的风险管控:案例分享

本文以1例健康受试者应用托珠单抗后出现中性粒细胞缺乏症不良事件为例,概述生物制剂Ⅰ期临床试验过程中进行风险管控的重要性,应从知情、筛选、给药、受试者培训及不良事件处理等各个方面做好风险管控,以确保受试者安全及临床试验顺利进行。

鼠神经生长因子生物学活性测定方法的研究

目的建立一个简单、稳定、重复性好的鸡胚背根神经节培养法测定m NGF活性的实验方法。方法通过对鸡胚运输温度控制、神经节分离和接种时间限制、培养结果观察时间摸索、活性测定的浓度范围、重复性等试验,建立了鼠神经生长因子生物学活性的测定方法。结果该方法具有操作简便,灵敏度高、重复性好、测试结果准确的特点。结论采用鸡胚背根神经节培养法可有效测定鼠神经生长因子的生物学活性。

水解物对CHO细胞培养工艺的影响

目的对比3种水解物对CHO悬浮培养细胞生长的影响,以及对细胞分泌表达的抗体质量的影响。方法应用3种不同来源的水解物,采用摇瓶培养CHO细胞,观察培养过程中细胞密度、活性和代谢产物的变化,以及抗体质量的影响。结果水解物对CHO生长无显著促进作用、但可大幅度提高抗体产量;对抗体糖型无显著影响,可显著影响抗体电荷分布。结论3种水解物中,Preteose peptone和Phytone peptone对CHO有很好的促进作用。但Preteose peptone含有动物然产分,随着各国药监对动物来源成分监管制度的严格,将进一步限制Preteose peptone的应用,因此Phytone peptone具有优势。

各国生物类似药适应症外推技术要求的比对研究及完善我国生物类似药适应症外推技术要求的建议

生物类似药的适应症外推,需要满足科学的前提条件。通过对美国、欧盟等国家以及WHO生物类似药适应症外推技术要求进行比对研究,提炼生物类似药适应症外推的前提条件,设计问卷、开展调研和研讨;结合对比研究、调研及专家研讨,提出完善我国生物类似药适应症外推技术要求考量的建议。

藤本古降真香的药学特性概述

目的概述藤本古降真香的药学特性。方法以“降真香”,“降香”,“紫藤香”等为关键词,利用《古代文献全文检索系统》全面检索有关降真香的医药方面的文献古籍,并进行综合分析与归纳总结。结果与结论共检索了《本草纲目》、《证类本草》等900多部相关古籍。通过对检索结果的整理,系统总结了藤本古降真香的别名、基源、采收加工、商品质量分级、性味归经、功效、用法用量、使用禁忌等药学特性,为藤本古降真香的药用价值研究与应用提供重要参考。

Denosumab治疗绝经后骨质疏松症的临床研究进展

狄诺塞单抗(Denosumab)是首个上市的抗核因子κB受体活化因子配体(RANKL)治疗性单克隆抗体产品,主要用于治疗骨质疏松症和其他骨骼疾病。本文主要综述其近年国外治疗绝经后骨质疏松症的临床研究进展。

关于医药企业新药研发项目管理的优化探究

随着医药事业的国际化发展,新药研发逐渐成为提高我国医药企业国际产业竞争力的主要途径,并日益引起各个医药企业的高度重视。然而,由于新药研发的过程较长,且具有技术难度大、资金投入多等特点,因此要求医药企业必须加强对新药研发的项目管理,才能为新药研发的成功提供保障。基于此,文章通过对项目管理以及医药企业新药研发特点的分析,提出了医药企业的新药研发项目管理的优化途径,期望促进医药企业新药研发项目的顺利实施和开展,促进企业的健康发展。

离子交换凝胶Capto-DEAE替代DEAE-Sepharose纯化乙脑病毒抗原研究

乙脑病毒抗原离子交换层析中,使用新型的凝胶填料Capto-DEAE替代DEAE-Sepharose纯化乙脑病毒抗原的研究。研究结果表明,使用离子交换凝胶填料Capto-DEAE层析不仅产品质量更好,而且生产效率也得到了提高。

探究我国化学新药临床试验注册申请流程

目的提高我国化学新药注册申请人进行临床试验注册申请时的效率。方法本文以文献研究法,阅读我国化学新药临床试验注册申请相关法规要求及参考文献,结合化学新药临床试验注册申请的实际情况,梳理我国化学新药临床试验注册申请流程。结果与结论申请人在化学新药临床试验注册申请前需要先了解NMPA、CDE发布的相关法规要求,提前了解CDE的注册审评部门和程序,做好资料提交的准备工作。在注册申请过程中,需要按照相关法规要求提交申报资料、缴纳注册费用,配合CDE等相关部门进行形式审查、技术审评等过程中的沟通交流、资料补充等工作。

第1批重组人绒促性素(生物测定用)国家标准品的制备与协作标定

目的:制备并标定第1批重组人绒促性素(recombinant human chorionic gonadotrophin,rHCG)国家标准品(生物测定用)。方法:以WHO第5批绒促性素国际标准品07/364效价为162 IU·瓶^(-1)作为标准,采用2020年版《中华人民共和国药典》四部1209绒促性素生物测定法,联合5个实验室对第1批rHCG待标品进行生物活性协作标定。对待标品原液进行了等电点、肽图、相对分子质量测定等结构确认。对待标品进行了紫外分光光度法蛋白含量测定、SEC-HPLC法纯度和聚体分析、RP-HPLC法氧化亚基分析等关键理化性质分析,并进行了稳定性考察。结果:,rHCG素待标品经协作标定,最终定值其生物效价为6400 IU·瓶^(-1);,rHCG素含量约为290μg·瓶^(-1),SEC-HPLC纯度约为100%。结构确认结果符合要求;聚体、解离亚基、氧化亚基等各项理化指标符合规定;稳定性考察结果满足要求。结论:本批待标品可作为第1批rHCG国家标准品,以供rHCG及相关制剂的生物效价测定用,定值为6400 IU·瓶^(-1)。

均相时间分辨荧光(HTRF)法测定重组单抗含量

建立了一种HTRF检测方法，可以快速、简便、稳定地测定重组单克隆抗体的含量。将检测试剂、标准品及待测样品加入96孔板，孵育后即可在酶标仪上读取荧光信号值，用软件对信号值进行四参数曲线拟合，绘制标准曲线，根据标准品四参数方程计算待测样品中抗体的含量；同时对方法进行了验证。结果表明：该方法专属性强，抗体含量测定范围为25～1000ng/ml，线性相关系数在0．99以上，回收率范围为92．8％～103．6％，平均为98．9％；该法精密度较好，精密度的变异系数范围为0．2％～11．6％，平均为4．3％。适用于生物制药工艺开发过程中细胞培养上清、纯化产物及制剂中抗体含量的测定。

重组融合蛋白产品电荷异质性分析方法研究

建立重组融合蛋白产品的电荷异质性分析方法。方法 通过优化条件,建立了重组融合蛋白产品电荷异质性的分析方法,即样品经过高浓度尿素处理,再加入两性电解质、1%甲基纤维素、高和低pI标志物,用成像毛细管等电聚焦电泳仪分析;并从方法的精密度、准确性、范围和线性、溶液稳定性考察了方法的可行性和耐用性。结果 方法重现性、准确度、线性范围和溶液稳定性好,能很好的分辨融合蛋白产品的各电荷异质性组分。结论 建立的方法可用于重组融合蛋白产品电荷异质性的分析,为保障重组融合蛋白类产品生产工艺的稳定性及质量控制提供了可靠的分析方法。

人参寡糖的固相甲基化研究及定量分析

以CH_3I为甲基化试剂、NaOH为填料的填充柱对麦芽三糖进行固相甲基化,利用液相色谱-质谱(LC-MS)检测甲基化产物并优化甲基化条件。最优条件为4.6 mm×150 mm的不锈钢填充柱,流速40μL/min和柱温25℃,在此条件下分别对麦芽糖、蔗糖、蔗果四糖及人参寡糖提取物进行固相甲基化,并以蔗果四糖为例进行方法学考察。蔗果四糖的线性范围为10.8~5400 ng/mL,r^2=0.9974,平均加标回收率为122.5%。

ELISA法测定大鼠血浆中抗体偶联药物浓度及药代动力学研究

目的:建立检测大鼠血浆中抗体偶联药物(ADC006M)[重组抗人表皮生长因子受体2(HER2)结构域Ⅱ人源化单克隆抗体-单甲基澳瑞他汀E(MMAE)偶联剂]浓度的酶联免疫吸附分析法(ELISA),并用于研究单次静脉注射的药代动力学特征。方法:基于ELISA的检测原理,在96孔板上预先包被抗MMAE抗体,加入待测样品,用HRP标记的抗体B1G7(B1G7-HRP)进行检测,加入TMB底物显色,终止反应后,在酶标仪450 nm/630 nm波长处读取吸收度(A),并参考相关法规进行方法学验证。同时,单次静脉注射给予SD大鼠5 mg·kg^(-1)ADC006M测定其血浆浓度,对测定结果进行曲线拟合并计算药代动力学参数。结果:确定方法的线性范围为31.25~2000 ng·mL^(-1),定量限为31.25 ng·mL^(-1);方法批内、批间准确度RE分别在-14.6%~12.6%和-13.1%~-0.7%,批内、批间精密度RSD均≤12.6%;方法的选择性(基质效应)、特异性、稀释线性与钩状效应以及各项稳定性考察结果均良好。通过对SD大鼠血浆样品进行浓度测定,获得ADC006M药代动力学参数,雌鼠、雄鼠的C_(max)分别为(114218±17845)μg·L^(-1)和(119900±12259)μg·L^(-1),AUC_(0-∞)分别为(90546±6481)μg·L^(-1)·d^(-1)和(89648±13735)μg·L^(-1)·d^(-1),t_(1/2)分别为(1.46±0.33)d和(1.70±0.28)d。结论:本文建立的检测大鼠血浆中ADC006M浓度的ELISA方法,特异性、准确度、精密度、稳定性等均符合生物制药临床前药代动力学研究指导原则要求,ADC006M在大鼠体内的药代动力学特征不存在性别差异,其与同类ADC药物的代谢特征基本一致,具有较好的药代动力学特性。

毛细管电泳用于测定人绒促性素的解离亚基及其质量控制

人绒促性素(hCG)是用于治疗不孕症等的常用药物。其由α亚基和β亚基组成,研究发现hCG在生产及储存过程中均可能产生亚基的解离,从而影响其活性。本文旨在建立hCG解离亚基的测定方法,通过考察样品制备缓冲体系、样品制备温度、分离电压、毛细管温度等,建立了毛细管电泳(CE-SDS)定量测定hCG解离亚基的方法。方法验证结果表明,α亚基和β亚基含量具有良好的灵敏度、线性、准确度和精密度,优于传统的凝胶电泳SDS-PAGE。本文所开发的方法适用于不同来源的hCG,并可应用于指导工艺开发及稳定性研究。因此,该方法应作为hCG生物制品的重要质控方法。

应用于抗体药物捕获的耐碱亲和层析介质性能的比较

目的比较应用于抗体药物捕获的耐碱的4种蛋白A亲和层析介质和2种小分子亲和层析介质的性能,为单抗纯化工艺的选择提供参考。方法利用两种单抗纯品（mAb1和mAb2）测定4种蛋白A亲和层析介质MabSelectSuRe、POROS MabCaptureA、Absolute High Cap、TOYOPEARL AF-rProtein A-650F和2种小分子亲和层析介质Mabsorbent A2P HF、Fabsorbent F1P HF在停留时间分别为4、6、8 min时的动态载量;利用含mAb2的发酵液,从回收率和杂质去除方面比较6种亲和层析介质的纯化效果。结果在5%穿透点,各介质对mAb1和mAb2的动态载量在35～73 g/L之间。小分子亲和层析介质Mabsorbent A2P HF纯化mAb2的回收率为89%,其他5种介质纯化mAb2的回收率均≥96%;6种介质纯化mAb2的宿主细胞蛋白（host cell protein,HCP）在2 000 ppm之内,蛋白A残留量在20 ppm之内。结论结合流速、动态载量、回收率和杂质去除效果等指标,可从6种亲和层析介质中挑选适用于抗体类药物下游纯化工艺的耐碱型蛋白A或小分子亲和介质。

充氮配液对蛋白质药物注射剂氧化的影响探讨

目的:研究蛋白质药物注射剂制备工艺中充氮对产品氧化的影响。方法:对配液搅拌过程中溶氧造成的产品氧化,进行配液过程中充入氮气进行抗氧保护的工艺优化。结果:配液过程中充氮后,配液后半成品氧化程度较之原液无增长。结论:在蛋白质药物注射剂制备过程中,配液充氮工艺可有效改善产品因溶氧而发生不同程度氧化的现象,能有效预防蛋白降解,可提高产品质量和稳定性。

灌装方式对蛋白质药物注射剂稳定性的影响探讨

目的:研究蛋白质药物注射剂制备工艺中灌装方式对产品稳定性的影响。方法:对剪切力敏感的蛋白质分子,考察不同灌装方式对产品稳定性的影响。结果:使用蠕动泵灌装的产品,较之活塞泵灌装的产品,可见异物及稳定性相关指标均明显改善。结论:在蛋白质药物注射剂制备过程中,蠕动泵灌装工艺可尽量降低剪切力对蛋白质的伤害,能有效预防蛋白聚集,可提高产品质量和稳定性。

用ELISA法检测血清中抗TNF-α单克隆抗体药物浓度的方法开发与验证

目的建立检测一种测定血清中抗肿瘤坏死因子α(TNF-α)单克隆抗体浓度的间接酶联免疫吸附测定(ELISA)方法。方法对TNF-α包被浓度及酶标抗体种类、存放稳定性和浓度等进行考察,确定关键试验参数。考察优化后方法的专属性、精密度与回收率、标准曲线与定量下限。结果TNF-α包被浓度为400 ng·mL^(-1),选择Sigma辣根过氧化物酶标记羊抗人免疫球蛋白G,以1∶3.0×10^(5)倍进行稀释;稀释后的酶标抗体4℃保存3 d稳定性良好。同时确认了方法专属性良好,回收率为84.00%~10^(6).82%,不同浓度样品精密度的变异系数均≤10%,方法线性良好,曲线方程为y=(-8.37×10^(3)-2.37×10^(6))/[1+(x/29.80)1.06]+2.37×10^(6)(R2=0.999),定量下限:1 ng·mL^(-1),均符合要求。结论本研究建立了一种准确、可靠的ELISA法测定血清中抗TNF-α单克隆抗体药物的浓度。