鼠矿化组织中非胶原蛋白的提取和层析分离

目的 :提取小鼠矿化组织中的基质蛋白 ,用离子交换层析法分离非胶原蛋白 ,并进行初步分析。方法 :取新生小鼠的颅盖骨和成年鼠的股骨 ,用盐酸胍和EDTA提取基质蛋白 ,采用MonoQHR离子交换柱层析 ,4% - 16%SDS -PAGE梯度胶电泳 ,Stains-All染色结合银染鉴定蛋白质 ,抗骨唾蛋白 (bonesialoprotein ,BSP)抗体 ,抗骨桥素(osteopontin ,OPN)抗体进行免疫印迹。结果 :用MonoQHR离子交换柱能够有效地分离出矿化组织的非胶原蛋白 ,Stains-All硝酸银染色和免疫印迹显示出不同组份的蛋白质提取分析情况。结论 :对矿化组织中的非胶原蛋白的初步提取、分离可以采用MonoQHR离子交换柱层析 ,采用银染结合Stains -All染色。

双向电泳分析维生素D对牙髓细胞分化的影响

目的:用双向电泳分析牙髓细胞分化过程中产生或分泌的新蛋白质.方法:在体外培养牙髓细胞,给予一定时间的1,25-双羟维生素D3,促使牙髓细胞分化,结合双向电泳技术分析细胞分化前后蛋白质合成、分泌的变化.结果:pH4-8 和相对分子量MW 20～90 kD范围的蛋白斑点分布较多.双向电泳凝胶图像分析软件ImageMaster 2D Platium比较分析,给予维生素D孵育24 h后,检测到77个新的蛋白点,同时有17个蛋白点消失.结论:维生素D促使牙髓细胞分化,并产生或分泌了一些新的蛋白质,维生素D和这些蛋白质对牙齿的发育、矿化的过程起调节作用.