雌激素通过雌激素受体α上调载脂蛋白M的表达

目的探讨雌激素调节载脂蛋白M的机制。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测不同浓度牛血清清蛋白结合雌激素(E2-BSA)处理HepG2细胞24 h后载脂蛋白M(ApoM)的表达;RT-PCR检测不同雌激素和雌激素受体α(ER-α)拮抗剂MPP共同处理HepG2细胞24 h后ApoMmRNA的表达;PCR扩增ER-α全基因和ApoM转录起始位点上游2 000 bp与下游+2 000 bp之间不同长度片段,连入荧光素酶报告基因质粒pGL3-basic,各重组质粒转染后对表达荧光素活性进行检测;凝胶迁移实验和染色质免疫共沉淀进一步验证ER-α和ApoM启动子区的相互作用。结果 E2-BSA呈剂量依赖性上调HepG2细胞ApoM的表达,这一效应可以被MPP所抑制;通过荧光素酶报告基因实验鉴定出ApoM基因启动子区存在明显促进基因转录的调控区域[-1 580～-1 575 bp(-GGTCA-)]。对该区域序列定点突变后重组荧光素酶报告基因表达的荧光素酶活性下降,而共转染未突变的荧光素酶报告基因质粒则荧光素酶活性上升;凝胶迁移阻滞和染色质免疫共沉淀结果显示,雌激素受体α与该区域特定序列存在相互作用。结论雌激素通过ER-α上调载脂蛋白M的表达。

过表达人载脂蛋白M基因对GK大鼠胰岛素敏感性的影响

目的 探讨过表达人载脂蛋白M（ApoM）基因是否改善Goto-Kakizaki （GK）大鼠胰岛素敏感性.方法 以慢病毒（LV）为载体,构建含人ApoM基因的重组慢病毒[LV4 （GFP）-ApoM].转染293T细胞24 h后,采用聚合酶链反应（PCR）芯片分析2型糖尿病相关基因;将10只GK大鼠随机分为ApoM阴性慢病毒组和ApoM阳性慢病毒组,每组5只.尾静脉注射5＆#215;108 TU慢病毒,用实时定量PCR（Real-time PCR）法检测ApoM mRNA水平,胰岛素耐量实验评价GK大鼠胰岛素敏感性.结果 （1）相较于ApoM阴性慢病毒组,293T细胞ApoM阳性慢病毒组ApoM mRNA水平增加79.43倍（P＜0.01）;同时,与胰岛素抵抗相关的基因丝裂原活化蛋白激酶8（MAPK8）下调了2.11倍（P＜0.05）,胰岛素样生长因子2（IGF2）下调1.23倍（P＜0.05）.（2）ApoM阳性慢病毒组GK大鼠肺组织中人ApoM mRNA表达较为明显;第14天GK大鼠空腹血糖水平和对照组之间的差异无统计学意义（P＞0.05）,但胰岛素耐量实验结果显示ApoM阳性慢病毒组GK大鼠血糖浓度下降50％的时间（60 min）明显早于ApoM阴性对照组（90 min）.结论 过表达ApoM基因有可能增强2型糖尿病个体的胰岛素敏感性.

雌激素通过雌激素受体上调载脂蛋白M表达

目的研究雌激素对载脂蛋白M的影响。方法采用RT—PCR法检测不同浓度、不同作用时间雌激素处理HepG2细胞以及雌激素和雌激素受体拮抗剂共同处理后，HepG2细胞载脂蛋白MmRNA的表达；将sD雌性大鼠分为5组：去卵巢组（OVX）；假手术组（Sham）；去卵巢＋苯甲酸雌二醇（EB）组（OVX＋EB）；正常大鼠组（对照组）；正常大鼠＋EB组（EB组），术后给予不同剂量的EB。常规生化检测血液标本中血清甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇（LDL）和高密度脂蛋白胆固醇（HDL），RT—PCR和Western印迹检测鼠apoM表达。结果雌激素上调HepG2细胞载脂蛋白M的表达，这种效应呈剂量和时间依赖性，可以被ER拮抗剂抑制。术后第1个月，OVX＋EB组和EB组大鼠apoMmRNA水平以及血清apoM、HDL、总胆固醇、甘油三酯和LDL水平分别较OVX组和对照组大鼠有显著性升高（P〈0．05）。结论雌激素通过ER途径上调载脂蛋白M的表达。