免疫亲和层析法纯化重组人促红细胞生成素的实验研究

目的 以免疫亲和层析方法纯化重组人促红细胞生成素 (rhEPO)。方法 以rhEPO作为抗原 ,免疫Balb/C小鼠 ,制备抗rhEPO单克隆抗体 (mAb)。以纯化的抗rhEPOmAb 2F12与预活化的Sepharose 4B偶联 ,制成抗体亲和层析柱 ,纯化rhEPO。结果 经筛选共获得 4株可分泌抗rhEPOmAb的杂交瘤细胞株 ,分别为 :1A8、2F12、3D4和 3F10。亲和层析纯化的rhEPO经SDS PAGE显示单一条带 ;2g凝胶制备的层析柱一次层析可获得 1.5mg高纯度的rhEPO。利用纯化的mAb建立的ELISA法 ,用于检测rhEPO的蛋白含量可达ng水平。结论 免疫亲和层析法纯化rhEPO的效率高、纯度好 ,用纯化的mAb建立的ELISA法具有灵敏度高。

一种新的制备多克隆抗体的方法

用亲和色谱纯化的rhEPO作为抗原免疫KM小鼠和Balb/c小鼠 ,然后腹腔注射S180细胞或SP2 / 0细胞。S180细胞可刺激KM小鼠产生腹水 ,腹水量大 ,抗体效价高。而直接注射SP2 / 0细胞既未能使KM小鼠产生腹水 ,也未能使Balb/c小鼠产生腹水。实验提供了一种新的简便、快速。

抗rhEPO单克隆抗体的制备及初步应用

用重组人促红细胞生成素 (rhEPO)免疫Balb c小鼠 ,取其脾细胞在PEG4 0 0 0作用下与SP2 0小鼠骨髓瘤细胞融合 ,获得一株能分泌抗rhEPO单抗隆抗体的杂交瘤细胞株 2F12 ,染色体数目大于 10 0条 ,间接ELISA法测定腹水和细胞培养上清效价 ,分别为 1.6× 10 -7和 4× 10 -4 。测定抗体亚类时 ,则同时显示IgA和IgG1,其轻链为κ链 ;相对亲和力为 5× 10 -12 mol L。单抗 2F12腹水经纯化获高纯度抗体 ,并用此抗体制备了抗体亲和色谱柱 。