大鼠Ⅲ度烧伤混合植皮愈合时生长因子mRNA表达的研究

目的：为了探索大面积Ⅲ度烧伤混合植皮创面愈合过程中生长因子的作用。方法：本实验以大鼠为模型，在异体皮移植后３、５、７、１４、２１和２８天以及自体皮移植后２、４、１１、１８和２５天分别取自体皮区、异体皮区皮肤，用酸性硫氰酸胍苯酚氯仿（ＡＧＰＣ）法提取总ＲＮＡ，经逆转录聚合酶链反应（ＰＴＰＣＲ），测定ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＰＤＧＦ和ｂＦＧＦ的ｍＲＮＡ表达量。结果：１）这四种生长因子ｍＲＮＡ表达在自体皮区及异体皮区各时相都能被检测到，并且自体皮区表达均高于异体皮区。２）在自体皮区，ＴＧＦα的表达在２大以后持续升高，表达峰值在１８天；ＴＧＦβ１在２天就有高表达，第二峰值出现在１８天；ＰＤＧＦ在２天有较高表达，表达峰值在４天，随后逐渐下降，２５天回升：ｂＦＧＦ也在２天有很高表达，以后下降，象ＰＤＧＦ一样，２５天回升。３）在异体皮区，创面愈合早期这四种生长因子表达都较低，以后各有不同程度升高。结论：１）移植的自体皮与异体皮都存活，并反映了自体皮区的愈合再生较异体皮区旺盛。２）在自体皮区这四种生长因子通过自分泌作用，旁分泌作用，到达创伤区，沿着信号转导通路，相互协同发挥效应，促进创面愈合。３）在异体皮区存在排异反应，?

减轻烧伤创面早期进行性损害的研究

烧伤创面早期存在进行性损害过程,寻找阻断这种损害的方法极具意义,且是烧伤领域研究的重点之一。本文综合介绍近年来有关这方面的研究。

Ⅲ度烧伤混合植皮愈合时生长因子表达初步研究

本实验应用大鼠Ⅲ度烧伤后混合植皮动物模型,定期取异体皮和自体皮区的皮肤,采用RT-PCR方法,从分子水平检测转化生长因子α(TGFα)、转化生长因子β_1(TGFβ_1)、血小板衍生生长因子(PDGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的mRNA表达动态变化,研究这些生长因子在混合植皮愈合中的作用。 材料与方法 1.Ⅲ度烧伤混合植皮模型 参照文献 2.标本采集 Ⅲ度烧伤后混合植皮的大鼠36只,随机分成6个时相组,每组6只,分别在大张异体皮移植后3、5、7,14、21、28d全麻下切取移植区的异体皮区。

增生性瘢痕中的金黄色葡萄球菌“超载”通过TLR-2/AP-1/TGF-β1途径介导瘢痕成纤维细胞胶原产生的机制研究

目的:探讨增生性瘢痕中的金黄色葡萄球菌“超载”对成纤维细胞纤维化功能的影响机制。方法:取16例行瘢痕切除和自体皮移植的增生性瘢痕住院患者的增生性瘢痕组织和正常皮肤组织进行固定切片。用革兰氏染色观察组织中的细菌,用免疫荧光检测是否为金黄色葡萄球菌,免疫组化和免疫印迹检测Toll样受体-2(TLR-2)、激活蛋白-1(AP-1)在组织中的表达。另外,选择灭活后的金黄色葡萄球菌干预正常成纤维细胞,观察细胞TLR-2、AP-1、转化生长因子-β1(TGF-β1)和胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ表达变化的变化。最后,分别阻断TLR-2、AP-1的活性,观察TGF-β1和胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ表达的变化。结果:革兰氏染色发现增生性瘢痕中革兰氏阳性细菌显著高于正常皮肤组织,免疫荧光检测为金黄色葡萄球菌。免疫组化和免疫印迹均提示瘢痕中TLR-2、AP-1表达显著高于正常皮肤。1×105CFU/mL金黄色葡萄球菌能显著促进正常成纤维细胞TLR-2、AP-1、TGF-β1和胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ的表达。而用分别使用TLR-2和AP-1抑制剂处理细胞,发现均能显著抑制TGF-β1和胶原的产生。结论:增生性瘢痕的金黄色葡萄球菌“超载”,通过TLR-2/AP-1/TGF-β1途径促进胶原的产生,干预TLR-2或AP-1表达可能是未来瘢痕治疗手段之一。

增生性瘢痕发生和演变过程中微血管和氧分压动态变化的研究

目的·探讨增生性瘢痕在发生和演变过程中,微血管和氧分压动态的变化。方法·选择人不同时期增生性瘢痕,分为早期、增生期、消退期和成熟期瘢痕,每组8例。术前进行经皮氧分压检测,正常皮肤作对照。术后对瘢痕组织进行固定切片、H-E染色,采用免疫组化进行CD34和HIF-1检测。结果采用两样本均数比较的t检验对数据进行显著性分析。结果·经皮氧分压检测发现:与正常皮肤氧分压[(75.3±10.1)mmHg]相比,瘢痕早期氧分压开始降低[(51.2±8.3)mmHg,P=0.037],增生期进一步降低[(30.2±6.1)mmHg,P=0.026],消退期最低[(6.9±2.1)mmHg,P=0.011],成熟期基本回复正常[(71.1±9.6)mmHg,P=0.080]。H-E染色发现:正常皮肤具少量微血管,瘢痕早期微血管逐渐增多,在增生期达到高峰,消退期大部分血管狭窄或闭塞,成熟期基本正常。CD34检测结果进一步证明微血管这种形态和数量的变化。HIF-1检测发现:正常皮肤HIF-1表达低,瘢痕早期显著升高,在增生期进一步升高,而在消退期则显著下降,成熟期几乎回复正常。结果·增生性瘢痕发生和演变过程中,微血管和氧分压存在动态改变,这种变化与瘢痕的病理改变相互关联,而HIF-1可能介导了其中的作用。

广西壮、汉族深Ⅱ度烧伤及一期愈合手术切口缝合伤患者伤后瘢痕增生程度变化及相关因素分析

目的:研究广西壮、汉族换药愈合未经抗瘢痕治疗的深Ⅱ度烧伤以及一期愈合的手术缝合切口患者,在创面愈合后12个月内瘢痕增生程度的变化情况以及瘢痕增生的影响因素。方法:对广西不同地区壮、汉族伤后3,6,12个月3个时相点439例换药愈合且未经抗瘢痕治疗的深Ⅱ度烧伤及一期愈合手术缝合切口患者伤后瘢痕增生程度进行定量测定以及流行病学资料分析,比较创面愈合后不同时期两种类型损伤瘢痕增生情况以及多种因素与瘢痕增生的相关性。结果:广西壮、汉族烧伤后瘢痕平均增生程度均比同期手术后瘢痕平均增生程度明显(P<0.05),两民族瘢痕同样损伤类型同期比较无差异(P>0.05),两民族同样损伤类型3,6,12个月瘢痕平均增生程度比较差异无统计学意义(P>0.05)。广西壮、汉族人群中,女性手术后瘢痕增生程度均比男性明显(P<0.05),烧伤后瘢痕男性均比女性明显(P<0.05);未婚人群伤后瘢痕增生均比已婚人群明显(P<0.05);有过敏史和有辛辣饮食习惯者比无过敏史和无辛辣饮食习惯者瘢痕明显(P<0.05)。在相关因素分析中,过敏史(r=0.145,P=0.028)和辛辣饮食习惯(r=0.154,P=0.012)与瘢痕增生程度呈正相关。结论:广西壮、汉族烧伤后瘢痕增生程度均比同期手术后瘢痕增生程度明显,两民族瘢痕同样损伤类型同期比较无差异,两民族同样损伤类型在创面愈合后12个月内瘢痕增生程度无明显变化。瘢痕增生程度与性别、婚否以及有无过敏史和辛辣饮食习惯者有关。

增生性瘢痕中成纤维细胞生物学功能变化与微血管病理改变的研究

目的探索增生性瘢痕中成纤维细胞的生物学功能变化与微血管病理改变的关系。方法首先取人增生性瘢痕组织和正常皮肤组织进行HE染色观察,分离和培养瘢痕和正常皮肤中成纤维细胞,ELISA分别测定2种来源的成纤维细胞在转移生长因子(TGF-β1)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、内皮素-1(ET-1)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)分泌水平的变化,再采用Tran-swell共培养模式,观察增生性瘢痕中成纤维细胞对血管内皮细胞增殖的影响。结果HE染色可见正常皮肤微血管数目较少,胶原疏松。增生期瘢痕胶原致密,微血管数目增多,微血管狭长扭曲,甚至闭塞。ELISA检测结果发现,增生性瘢痕中成纤维细胞TGF-β1、bFGF、PDGF、ET-1和VEGF分泌水平明显高于正常皮肤来源的成纤维细胞。另外,Transwell共培养结果发现,增生性瘢痕来源的成纤维细胞具有显著促进血管内皮细胞增殖的作用。结论增生性瘢痕中微血管的病理改变与成纤维细胞大量产生TGF-β1、FGF、PDGF、ET-1和VEGF等因子有关。

烧伤创面覆盖物

由于严重烧伤病人往往面临供皮区相对不足，探索和研究烧伤创面人工覆盖物已日益引起人们的关注。本文综合回顾了烧伤创面覆盖物的发展历史及其近年来的进展情况，分别叙述了各种覆盖物的优势，存在的不足，并简述了有些覆盖物在临床上的使用情况。

丝蛋白敷料对大鼠浅二度创面的疗效研究

目的：观察大鼠二度烫伤创面应用丝蛋白创面敷料覆盖后的疗效。方法：SPF级雄性大鼠20只,体重230~250 g,随机分成对照组和实验组。76℃热水烫伤10 s,形成8 cm×5 cm浅二度烫伤创面。腹腔注射平衡液5 ml抗休克处理。对照组创面覆盖消毒凡士林纱布,实验组创面覆盖丝蛋白创面敷料,外用无菌纱布包扎固定。手术后3 d行创面取材,组织培养后测定其释放表皮细胞生长因子（EGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、血小板衍生生长因子-AB（PDGF-AB）及白细胞介素-8（IL-8）的水平,并通过HE和Masson染色对创面组织坏死程度进行形态学观察。结果：实验组与对照组创面组织EGF、bFGF、PDGF-AB及IL-8的表达水平有明显差异（P均〈0.01）。结论：丝蛋白创面敷料覆盖大鼠浅二度烧伤创面能促进局部生长因子的释放,抑制炎性因子的表达,有效抑制创面炎症反应并且对大鼠浅二度烫伤创面的愈合有促进作用。

人外周血淋巴细胞褪黑素受体的基因与蛋白表达的研究

目的 :研究人外周血淋巴细胞褪黑素受体 (MR)的基因与蛋白表达的特点。方法 :分离健康成年人外周血淋巴细胞 ,采用异硫氢酸胍 -苯酚 -氯仿一步法抽提总RNA ,分别采用Northern印迹和RT -PCR方法检测MR亚型mt1和MT2 的mRNA ,并将RT -PCR的阳性产物通过自动测序仪测序 ;同时应用免疫组化染色方法检测mt1和MT2 受体亚型蛋白在淋巴细胞内的分布特点。结果 :Northern印迹方法检测出长约 1 1kbmt1mRNA ,但未检出长约 1 1kbMT2 的mRNA ;RT -PCR方法则得到了 36 8bpmt1cDNA片段 ,无 32 1bpMT2 cDNA片段 ,同时将mt1阳性条带通过胶回收、测序 ,结果显示扩增产物与人mt1受体亚型的基因序列相吻合 ;免疫组化结果显示 :人外周血淋巴细胞存在mt1受体蛋白 ,主要分布于细胞膜和细胞浆 ,呈棕褐色阳性颗粒 ,而细胞核上未见阳性颗粒 ,MT2 受体蛋白则未检出。结论 :证实正常人外周血淋巴细胞存在mt1的基因与蛋白的表达 ,而无MT2 的基因与蛋白的表达 ,提示外周血淋巴细胞为褪黑素 (Mel)作用的外周靶器官 ,为研究生理及病理情况下Mel对免疫系统的调节奠定了基础。

烧伤急性期中性粒细胞的激活

烧伤机体内的一系列介质可最先激活中性粒细胞,使之表达膜表面分子,并与内皮细胞粘附而游出血管,激发氧自由基等物质的产生和释放。但大量中性粒细胞在血管内同时激活,不但会导致机体早期抗感染能力下降,还会带来组织继发损伤,因此应设法使其活化保持在有利于机体的水平上。

纳米金对人体表皮细胞增殖作用的体外实验研究

目的:探讨纳米金对人体表皮细胞的增殖作用,为纳米金材料在皮肤组织相关医学领域的开发应用提供科学依据。方法:首先运用柠檬酸钠还原法制备纳米金溶胶,然后观察培养液中含有不同终浓度纳米金溶胶体溶液对人正常皮肤表皮细胞增殖的影响。结果:培养液中纳米金含量在0.48mg/L时就能显著促进表皮细胞增殖,随着纳米金含量增加,细胞增殖率增加,在含量达到12mg/L时,细胞增殖达到高峰,此后,细胞增殖率逐步下降。结论:培养液中纳米金含量在一定范围内具有促进人体皮肤组织表皮细胞增殖的作用。

基于经筋理论及髋关节生物力学特点的膝骨关节炎研究进展

从中医经筋理论及髋关节生物力学的角度综述膝骨关节炎(KOA)的临床研究进展。通过整理国内外文献,概述KOA发展过程中髋关节生物力学的变化特征,并结合中医经筋理论对其进行阐述。髋关节作为下肢活动的起始关节,大部分丰厚的屈伸肌群附着于髋关节上,其对下肢功能起着至关重要的作用。髋关节生物力学的变化会导致膝关节功能和结构的改变。KOA可造成髋关节力学的变化,髋关节生物力学的改变亦可诱导或加重KOA。而中医经筋理论则认为经筋是维持膝关节平衡稳定的基础,髋、膝关节通过经筋联系。经筋的病理状态可导致髋关节应力失衡,诱发并加重KOA。基于髋关节生物力学的特点及经筋理论进行KOA的研究和临床方案制定,使疗效显著提高。

GM-CSF促进创面愈合作用机理的研究进展

GM-CSF是一多效能的细胞因子,具有促愈合的重要功能。本文总结了GM-CSF促愈合的相关研究,阐明了其可安全、有效促进创面愈合的作用机理:能有效启动创面愈合,并对愈合过程的每个阶段均有促进作用。具体为:趋化并活化中性粒细胞及单核/巨噬细胞,提高创面抗感染能力、利于坏死组织脱落;趋化、激活角质细胞、内皮细胞及成纤维细胞,促进其增殖、分化,加速新生血管化、肉芽组织形成及再上皮化;有助于促愈合因子的分泌、创面缩小及组织重塑。

L-精氨酸对糖尿病烧伤创面促愈作用的研究

目的 探讨精氨酸对糖尿病烧伤创面修复的影响及其可能的机制。 方法 SD大鼠随机分为正常对照组 (A组 )、糖尿病对照组 (B组 )、糖尿病精氨酸干预组 (C组 )和糖尿病甘氨酸对照组 (D组 )。糖尿病模型通过腹腔注射STZ建立 ,然后喂养 8周后给予深Ⅱ度烫伤 ,于伤后 0、1、3、7、14、2 1d时相点对创面愈合面积、组织形态学改变、创面组织糖含量、羟脯氨酸 (OHP)含量及局部组织释放转化生长因子 β1 (TGF β1 )含量进行检测。 结果 应用精氨酸后 ,皮肤组织糖含量降低 ,创面局部炎症反应出现较早 ,坏死组织脱落及上皮匍行提前 ,OHP含量、组织释放TGF β1 能力均增加 ,创面愈合明显加快 (P <0.0 5～ 0.0 1)。 结论 L 精氨酸可通过降低皮肤组织糖含量及增加TGF β1 的合成和释放 。

激光共聚焦显微镜和改良微孔板法观察细菌生物膜形成

目的利用激光共聚焦显微镜(CLSM)和改良微孔板法观察细菌生物膜形成,探索细菌生物膜检测的有效手段。方法烧伤患者植入性导管分离的金葡菌、鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌,经体外分别培育24、48、72h和5d后,先后用CLSM和改良微孔板法,观察细菌生物膜形成和黏附的过程与特点。结果鲍曼不动杆菌、金葡菌、铜绿假单胞菌形成生物膜的时间、生物膜的形态与特点都有显著的差异。结论 CLSM和改良微孔板法是观察和检测细菌生物膜形成过程的有效手段。

糖尿病足溃疡患者的生活质量及其影响因素

目的了解糖尿病足溃疡患者的生活质量水平,并分析其影响因素。方法采用Wagner分级和SF-36健康调查表,对119例首诊糖尿病足患者进行糖尿病足溃疡严重程度分级和生活质量调查,并分析其相关性。结果糖尿病足溃疡患者SF-36评分中,生理职能维度得分最低,中位数为10.00分;SF-36总分为(370.91±151.66)分。多元逐步回归结果显示,Wagner分级、血管病变、溃疡位置及溃疡深度等4个变量是生活质量的主要影响因素。结论糖尿病足溃疡患者的生活质量普遍较差,应注重足溃疡的三级预防,采取有针对性的干预措施,以提高其生活质量。

自体皮与异体皮混合移植中的层粘蛋白表达

目的 通过对大张异体皮打洞嵌植小块自体皮混合移植皮片中层粘蛋白 (L N )的表达研究 ,探讨自体皮与异体皮混合移植促进 度烫伤创面愈合的机制。方法 清洁级 SD大鼠背部脱毛后 ,造成占体表总面积10 %～ 15 %的 度烫伤。伤后 3天切痂 ,移植大张打洞的异体皮。异体皮移植后第 3天 ,嵌植小块自体皮 ,完成皮肤混合移植。在异体皮移植后 3、5、7、14和 2 1天 ,采用免疫组织化学方法测定移植皮片中 L N的表达。结果 异体皮移植后第 7天出现排异反应 ,表现为异体表皮逐渐被爬行而来的自体表皮所铲除替代 ,异体真皮表面仍可见 L N阳性表达。异体皮移植后第 14天 ,从自体皮岛迁移来的表皮细胞下有零星 L N表达 ,异体皮中的 L N仍基本保持完整。异体皮移植后第 2 1天 ,自体表皮已基本覆盖异体皮区 ,L N表达已基本完整。结论 大张异体皮打洞嵌植小块自体皮混合移植中的异体皮为创面愈合提供了基底膜成分 。

基质金属蛋白酶-2及其组织抑制因子-2在糖尿病皮肤损伤修复过程中的动态变化(英文)

背景:创面愈合是个复杂而有序的生物学过程,近期研究表明慢性创面愈合延迟往往与一些特定的基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase,MMP)表达失调有关。目的:研究活化的MMP(activematrixmetalloproteinase,aMMP)-2及其组织抑制因子(tissueinhibitorofmetalloproteinases,TIMPs)在糖尿病皮肤损伤修复过程中的动态变化。设计:随机对照实验研究。地点和对象:实验在上海市第二医科大学附属瑞金医院烧伤研究所完成。对象为SPF级Sprague-Dawley大鼠72只,体质量250g左右,雌雄不限,以链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠深Ⅱ度烫伤为模型,将伤后0,1,3,7,21d的组织标本进行组织块培养24h。主要观察指标:组织培养上清液中aMMP-2和TIMP-2的含量。结果:伤后糖尿病和正常鼠皮肤组织释放的aMMP-2和TIMP-2逐渐升高,糖尿病组未损伤组织释放的aMMP-2明显高于正常组(t=3.214,P<0.05),伤后21dTIMP-2明显低于正常组(t=2.427,P<0.05);正常组aMMP-2/TIMP-2比值基本稳定于一定的水平,而糖尿病组aMMP-2/TIMP-2比值逐渐下降,自伤后7d起,显著低于0时相点(t=10.019,P<0.01)。结论:糖尿病者在创伤前后皮肤组织中基质金属蛋白酶及其相关的生物活性物质的平衡均出现异常。

人外周血粒细胞褪黑素受体亚型的基因与蛋白表达

目的:研究人外周血粒细胞褪黑素受体(melatonin receptor,MR)亚型的基因与蛋白表达的特点。方法:通过密度梯度离心法分离得到健康成年人外周血粒细胞,采用异硫氰酸胍-苯酚-氟仿一步法抽提总RNA,分别采用Northern印迹和RT-PCR方法检测MR亚型mt1和MT2的mRNA,并将RT～PCR的阳性产物通过自动测序仪测序;同时应用免疫组化染色方法检测mt1和MT2受体亚型蛋白在粒细胞内的分布特点。结果:Northern印迹方法检测出长约1.1 kb的mt1mRNA,但未检出长约1.1 kb的MT2mRNA;RT-PCR方法则得到了约370 bp的mt1cDNA片段,无320 bp的MT2cDNA片段,mt1阳性条带测序结果显示扩增产物与人mt1受体亚型的基因序列相吻合;免疫组化结果显示:人外周血粒细胞存在mt1受体蛋白,主要分布于细胞膜和细胞质,呈棕褐色阳性颗粒,而细胞核上几乎未见阳性颗粒,MT2受体蛋白则未检出。结论:证实正常人外周血粒细胞存在mt1亚型的基因与蛋白的表达,而无MT2亚型的基因与蛋白的表达,提示外周血粒细胞为褪黑素(melatonin,Mel)作用的外周靶器官。