粉棒束孢对柑橘全爪螨的毒杀活性及其生物学特性

室内测定了粉棒束孢(Paecilomyces farinosus)菌株nq1–1对柑橘全爪螨雌成螨的毒力,并通过单因素试验,分析该菌的生物学特性。结果表明:nq1–1菌株对柑橘全爪螨雌成螨的LC_(50)和LT_(50)分别为1.59×10~7/mL和7.9 d;菌株最适生长和产孢培养基分别为萨氏培养基和PDA培养基;蔗糖和有机氮源(赖氨酸)有利于该菌生长和产孢;菌丝生长和产孢的最适温度均为20℃,最适孢子萌发温度为25~28℃;菌丝生长、产孢以及孢子萌发的最适pH均为6.0;nq1–1菌株具有较强的抗紫外线能力;82.6%氧化亚铜(水分散粒剂)、75%百菌清(可湿性粉剂)、50%喹啉铜(可湿性粉剂)等杀菌剂与菌株相容性较好。nq1–1菌株对柑橘全爪螨有较好的毒杀活性,喜好偏低温、中性以及富含有机营养的环境。

一株高致病力赭绿青霉的生物学特性及杀虫活性

为明确一株高致病力赭绿青霉Penicillium ochrochloron Q-1的生防潜力,室内测试了不同营养、环境因素及常见杀菌剂、杀虫剂对菌株Q-1的影响,并采用室内毒力测定方法研究菌株Q-1对不同昆虫的毒力。结果表明:菌株Q-1对营养要求较低,最适生长和产孢培养基分别为淀粉琼脂培养基(SYA)和马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA),最适生长碳源为麦芽糖,最适产孢碳源为葡萄糖,最适生长和产孢氮源均为蛋白胨,最适生长及产孢温度为28℃,最适p H为6.0,同时菌株Q-1的孢子对紫外线具有一定的耐受力;化学农药中四螨嗪等杀虫剂对菌株Q-1生长影响较小,多菌灵、咪鲜胺等杀菌剂明显抑制菌株Q-1生长;在1×107孢子/m L浓度下,菌株Q-1对棉铃虫幼虫、家蚕幼虫及柑橘全爪螨雌成螨的LT50分别为4.08、21.37和28.43h。综上,菌株Q-1生长快、产孢量高,对棉铃虫幼虫、家蚕幼虫及柑橘全爪螨雌成螨致病力高,本研究为赭绿青霉进一步开发利用提供理论依据。

冬虫夏草菌丝状菌源增殖培养的研究

冬虫夏草菌是珍稀濒危名贵中药材冬虫夏草的无性型菌种,是侵染蝠蛾幼虫的唯一菌种,其侵染后形成名贵中药材冬虫夏草。冬虫夏草菌在不同营养及条件下生长形态不同,主要有丝状体和菌球体两种生长形态。冬虫夏草菌丝状菌体能够侵染蝠蛾幼虫,有可能作为一种新的接种体被广泛应用;但丝状菌体对营养要求苛刻、生长缓慢、菌丝体得率低的特点,阻碍了冬虫夏草菌丝状菌体作为侵染蝠蛾幼虫的接种体的开发及应用,从而阻碍了冬虫夏草人工培殖产业化的进程。为了提高冬虫夏草菌丝状菌体的生物表达量,本文对营养及培养条件进行了优化研究,得出了最佳条件为:葡萄糖质量浓度40 g/L、酵母粉质量浓度65 g/L、培养温度17℃、MgSO_4质量浓度3 g/L、KH_2PO_4质量浓度1.5 g/L、培养时间12 d,按最优培养条件,冬虫夏草菌丝状菌体干重得率15.67 g/L,为下一步新的接种体的制备提供菌源保障。

土壤微生态环境对冬虫夏草寄主蝙蝠蛾幼虫病原菌粉棒束孢宿存及毒力的影响研究

测定了温度、含水量、土壤微生物三个因素以探讨蝙蝠蛾幼虫生长过程中微生态环境对粉棒束孢(Isaria farinose)宿存及毒力的影响。结果表明粉棒束孢30℃保存6个月的宿存量降低至10^3个/g以下。随着保存温度降低,宿存量的下降速度变缓,粉棒束孢在-18℃保存1年后,宿存量仍基本维持在10^6个/g以上。粉棒束孢在低湿环境下(含水量<35%)保存1年的宿存量维持在10^4个/g,含水量45%~65%,粉棒束孢宿存量会先增加后降低,降低的速度基本随湿度的增加而增加,1年后宿存量降低至10^3个/g以下。土壤微生物对粉棒束孢的宿存具有明显抑制作用,野外高山草甸土壤中微生物显著抑制粉棒束孢萌发,不利于粉棒束孢的宿存,而室内饲养土壤由于幼虫排泄物、饲料腐殖质可能有利于粉棒束孢的宿存。上述研究结果为进一步制定粉棒束孢防治方法,同时也为粉棒束孢作为生防菌的有效保存提供了参考。

冬虫夏草培殖中粉棒束孢病害动态变化规律

【目的】本文探索了高海拔地区冬虫夏草培殖过程中寄主蝙蝠蛾幼虫粉棒束孢病害在土壤中的动态变化规律。【方法】本研究以分离的粉棒束孢为研究对象,模拟野外自然条件和室内人工饲养条件下蝙蝠蛾幼虫感染粉棒束孢病原菌的情况,测定蝙蝠蛾幼虫僵虫体及其周围土壤中粉棒束孢的动态变化。【结果】在室内人工饲养环境下僵虫体上宿存量随着感染粉棒束孢孢子量先逐渐增加,巅峰可达到16.48×10^9个,随后缓慢下降,3个月后仍保持在109水平,致死率保持在80%以上,周围土壤中的粉棒束孢含量先增加后缓慢下降,但是时间比僵虫体延后,致死率保持在50%以上;野外自然僵虫体上粉棒束孢含量增速比室内饲养环境缓慢,孢子量也是先逐渐积累,巅峰仅室内人工饲养环境的一半,随后快速下降,3个月后衰减了约90%,致死率低至50%以下,周围土壤粉棒束孢的含量缓慢增加后快速下降,致病率降至20%左右。【结论】野外高海拔自然环境不利于粉棒束孢的宿存和传播,室内饲养环境为粉棒束孢的宿存和传播里提供了有利条件,这可能是室内培殖容易爆发粉棒束孢病害的原因之一。

冬虫夏草线状菌体制剂对蝠蛾幼虫感染的研究

为明确冬虫夏草线状菌体制剂的侵染力,进行了冬虫夏草线状菌体制剂对蝠蛾幼虫的感染试验。在相同条件下对蝠蛾幼虫进行人工接种,并对感染温度、菌剂用量和虫龄进行了优化。结果表明冬虫夏草线状菌体具有侵染蝠蛾幼虫的能力,优化后的感染条件为:菌体剂量为5 g(即5个标准剂量)、幼虫虫龄为3龄、培养温度为14℃。该结果为蝠蛾幼虫新型接种体的制备与开发提供了依据。

人工培殖冬虫夏草过程中一种眼蕈蚊属害虫的生物学特性及其防控研究

在四川康定基地的实验室(海拔高度3800 m)内研究了人工培殖冬虫夏草过程中一种眼蕈蚊属害虫的生物学特性及其防控方法。该虫在10℃-13℃,相对湿度65%-75%的条件下完成一个世代所需要的时间为85-95 d,幼虫期为28-30 d,蛹期为16-20 d,成虫期为15-20 d,卵期为27-30 d。基质和饲料都同时存在是该虫生存的必要条件。在无土条件下裸露饲养可以有效避免该害虫的发生。

小金蝠蛾幼虫β-1,3-葡聚糖识别蛋白βGRP1基因的分子特征与生物信息学分析

[目的]探索冬虫夏草寄主昆虫小金蝠蛾幼虫的β-1,3-葡聚糖识别蛋白βGRP1基因的结构特征与进化关系。[方法]通过PCR法克隆获得小金蝠蛾幼虫βGRP1基因的编码序列,并采用Protparam、NetPhos 2.0 Server cDNA、MEGA等软件分析βGRP1蛋白的理化特征和进化分析。[结果]小金蝠蛾幼虫βGRP1基因编码序列1593 bp,推断可编码530氨基酸组成的蛋白,该蛋白为分泌型蛋白,含有20个氨基酸的信号肽,包含2个功能结构域,该结构域与葡聚糖的识别密切相关;同源分析和分子系统进化树分析表明,鳞翅目昆虫中的βGRPs基因家族分为4个进化分枝,其中小金蝙蝠蛾与勾蝠蛾为单独的一个进化分枝,小金蝠蛾幼虫βGRP1进化较钩蝠蛾早,介于I型和Ⅲ型分支。[结论]该蛋白具有识别β-1,3-葡聚糖的结构域,并可能通过丝氨酸磷酸化激活酚酶源级联系统,启动免疫,为进一步探索βGRP1蛋白的免疫功能奠定基础。

膨大弯颈孢SCKDC10菌株的杀虫活性及培养条件

采用室内毒力测定方法,测定了膨大弯颈孢(Tolypocladiuminflatum)SCKDC10菌株对家蚕4龄幼虫、蚕蛹及柑橘全爪螨雌成螨的毒力,并比较了不同培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基、马铃薯蔗糖琼脂培养基、综合马铃薯培养基、淀粉琼脂培养基、察氏培养基、萨氏培养基、高氏一号培养基、L–broth培养基)、不同碳源(可溶性淀粉、甘露醇、肌醇、麦芽糖、葡萄糖、乳糖、甘油、蔗糖)、不同氮源(硝酸钾、尿素、蛋白胨、硝酸铵、甘氨酸、赖氨酸、氯化铵)、不同温度(10、15、20、25、28、30、35、40℃)、pH值(4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0)、紫外线照射时长(0、20、40、60、80、100、120min)以及常用杀虫剂(螺螨酯悬浮剂、甲氰菊酯乳油、丁氟螨酯悬浮剂、四螨嗪悬浮液、噻螨酮乳油)、杀菌剂(戊唑醇悬浮液、吡哆嘧菌酯乳油、咪鲜胺乳油、多菌灵可湿性粉剂、唑醚·代森联水乳剂)对SCKDC10菌株生长、产孢和孢子萌发的影响。结果显示:SCKDC10菌株对家蚕幼虫及蚕蛹的LC50分别为1.47×10^8个孢子/mL和4.25×10^8个孢子/mL,LT50值分别为6.51 d和7.87 d;对柑橘全爪螨雌成螨的LC50为9.26×10^7个孢子/mL,LT50值为6.34d;萨氏培养基和马铃薯葡萄糖琼脂培养基分别为SCKDC10菌株最适生长和产孢培养基;葡萄糖和甘氨酸更有利于该菌的生长和产孢;SCKDC10菌株的最佳生长和产孢温度均为28℃;最适pH值均为7.0;紫外线照射时长对孢子萌发产生较大影响;紫外线照射时长对孢子萌发产生较大影响,随紫外线照射时间延长,菌株生长速率、产孢量以及孢子萌发率逐渐降低,紫外线照射100min后,孢子完全不能萌发。SCKDC10菌株与杀虫剂相容性较好,对杀菌剂比较敏感。

小金蝠蛾蛹的发育规律及其性别的快速鉴别

目的探讨小金蝠蛾蛹发育规律和发育进度及其性别的快速无损的鉴别方法,调配小金蝠蛾鉴别和调配羽化后成虫的性别比例,提高人工饲养小金蝠蛾生物量。方法观察小金蝠蛾蛹的形态和颜色变化情况研究其发育规律;观察小金蝠蛾雌雄蛹的外部形态结构,再借助于解剖或观察羽化的成虫的性别等研究其无损鉴别方法。结果依据形态差异将小金蝠蛾蛹的发育分为了12个阶段;在恒温条件下9℃时50 d出蛾,12℃时42 d出蛾,15℃时30 d出蛾。小金蝠蛾雄蛹腹面第8腹节有点状凸起第8腹节和第9腹节间分节明显,第9腹节未向第8腹节纵伸,生殖孔位于第8腹节上,生殖孔两侧各有一半球形突起,生殖孔前缘与肛门前缘间的距离小于肛门的长度,点状凸起、生殖孔、肛门三者的位置关系(从头至尾看)为:生殖孔→点状凸起→肛门;雌蛹腹面第8腹节,生殖孔前缘与肛门前缘间的距离大于肛门的长度,点状凸起、生殖孔、肛门三者的位置关系(从头至尾看)为:点状凸起→生殖孔→肛门。结论在同一环境下,雌雄蛹在蛹期发育的进度基本一致,主要形态差异集中在蛹皮、复眼、触角、翅等器官的分化和颜色变化,该研究揭示了其发育规律。基于蛹的第8和第9腹节的这些特征开发的小金蝠蛾蛹快速无损鉴别雌雄的方法,准确率均为100%。

聚六亚甲基双胍对蝙蝠蛾幼虫病原菌粉棒束孢的杀菌效果和毒性评价

为了解聚六亚甲基双胍对冬虫夏草寄主昆虫蝙蝠蛾幼虫病原菌粉棒束孢的杀菌消毒效果和对蝙蝠蛾幼虫的毒性,本文采用了悬液定量杀菌试验、现场试验、稳定性试验及昆虫毒性评价方法,对该消毒剂的消毒相关性能及安全性进行试验观察。结果显示含2g/L聚六亚甲基双胍消毒液对粉棒束孢孢子悬液或者现场试验作用45–60min,杀菌率均可达到99.00%以上。聚六亚甲基双胍消毒原液及稀释液37℃保存3个月与1个月的下降率分别为2.10%和3.20%,性质比较稳定、杀菌效率短期内无显著降低;含量≤10g/L聚六亚甲基双胍消毒液对蝙蝠蛾幼虫死亡影响不显著,无明显的不良反应,属于实际无毒类物质。聚六亚甲基双胍消毒液性质稳定、杀菌效果好、无毒,可用于蝙蝠蛾幼虫饲料、饲养盒等的消毒。