甘肃省庆阳地区湖羊皮下脓肿病的流行病学调查及病原体分析

2019—2022年,甘肃省庆阳地区湖羊皮下脓肿病呈爆发趋势,为指导疾病防控和合理用药,本研究随机选取6个千头以上湖羊养殖场进行流行病学和致病病原调查,采用16S微生物多样性测序检测病料菌种差异;常规细菌分离培养鉴定致病病原;动物感染试验测定分离菌致病性及试验动物组织病理变化;纸片扩散法进行药敏试验。结果表明,该病以断奶后育成公羊多发,发病率2.3%~18.4%;6份脓肿样本均以金黄色葡萄球菌为优势菌种,临床分离得到6株金黄色葡萄球菌和3株大肠杆菌;分离菌感染小鼠出现皮下脓肿症状;组织病理观察结果可见,小鼠内脏器官以充血、出血、坏死和炎性细胞浸润等病变为主,皮肤组织结构被破坏;金黄色葡萄球菌和大肠杆菌对常用抗生素敏感性良好,大肠杆菌对头孢噻吩耐药。本研究结果为该地区湖羊皮下脓肿病的防制及合理用药提供了理论依据,为全国湖羊皮下脓肿病流行规律研究提供了参考。

甘肃省部分地区养殖场饲料中玉米赤霉烯酮的检测及分析

【目的】了解甘肃省定西、张掖等地养殖场饲料中玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEA)的污染状况,为改善养殖场饲料存储方法提供基础数据。【方法】随机采集甘肃不同地区6个养殖场的饲料,通过超高效液相色谱法测定饲料中玉米赤霉烯酮的含量并进行分析。【结果】6个养殖场共计48份饲料中,玉米赤霉烯酮的总检出率为75.00%,其中21份饲料中的玉米赤霉烯酮含量超出国家标准(500μg/kg),12份饲料中未测出玉米赤霉烯酮。【结论】对定西、张掖等地养殖场饲料中存在的霉菌毒素应引起高度重视,在污染源头和存储方法上应加以甄别,从而保障养殖场经济效益。

缺氧诱导基因1C在牦牛隐睾中的表达及其调控机制研究

旨在探究缺氧诱导基因1C(HIG1 hypoxia inducible domain family member 1C,HIGD1C)对牦牛睾丸支持细胞凋亡的影响。本研究分别选择3头3~6岁龄健康状况良好的公牦牛和隐睾症公牦牛,以其睾丸组织作为研究材料。通过HE染色、牦牛睾丸支持细胞分离培养、间接免疫荧光、RT-qPCR、Western blot、HIGD1C过表达与干扰载体构建及体外细胞转染等技术,探究HIGD1C对牦牛睾丸支持细胞凋亡的调控机制。结果显示:正常睾丸基底膜及间质组织完整,曲细精管、管周肌细胞及支持细胞等排列紧密,隐睾中曲细精管断裂萎缩且HIGD1C在牦牛隐睾组织中转录及蛋白的表达水平极显著于高于正常睾丸组织(P<0.01);HIGD1C蛋白主要分布在睾丸间质细胞和支持细胞;成功分离培养出牦牛睾丸支持细胞且HIGD1C蛋白定位于原代睾丸支持细胞胞核;HIGD1C过表达支持细胞后,Bcl-2 mRNA表达水平显著上调(P<0.05),蛋白表达水平极显著上调(P<0.01),Bax和Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平均极显著上调(P<0.01),流式细胞术结果显示过表达HIGD1C组支持细胞凋亡率极显著上升(P<0.01);反之,HIGD1C敲除后,Bax、Bcl-2和Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平均极显著下调(P<0.01),流式细胞术结果显示HIGD1C敲除组支持细胞凋亡率极显著下调(P<0.01)。本研究结果表明:正常睾丸组织结构完整,隐睾间质疏松,且HIGD1C在牦牛隐睾组织中高表达。体外细胞试验表明上调HIGD1C,可以激活促凋亡蛋白,促进牦牛支持细胞凋亡;反之,下调HIGD1C表达水平会抑制支持细胞凋亡。提示HIGD1C参与调控牦牛睾丸支持细胞的凋亡,为揭示牦牛隐睾的发生机制提供了参考。

玉米赤霉烯酮影响绵羊卵母细胞体外成熟的分子机制研究

实验旨在研究玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEA)对绵羊卵母细胞体外成熟相关基因表达及活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)水平的影响。采集绵羊卵巢,收集卵母细胞,分为4组,包括对照组(CG组)和实验组(TG1、TG2和TG3组)。CG组不做任何处理,TG1、TG2和TG3组分别在成熟液中添加10、20、30μmol/L ZEA进行体外成熟培养,qPCR技术检测减数分裂成熟和凋亡等相关基因mRNA的相对表达量,ROS检测试剂盒检测卵母细胞内ROS水平。结果表明:与CG组相比,当培养液中ZEA浓度达到20μmol/L时,卵母细胞成熟率显著降低,GPX、SOD1、SOD2、Caspase3、ATG3和ATG7的mRNA表达水平显著升高,而CDC20、GDF9和BMP15的mRNA表达水平显著降低,但LC3、BAX和BCL-2的mRNA表达水平在统计学上没有显著差异;与CG组相比,添加ZEA后卵母细胞内ROS含量极显著升高。以上结果提示,ZEA能通过诱导绵羊卵母细胞发生凋亡和氧化应激,抑制细胞分裂从而影响卵母细胞的体外成熟。

白藜芦醇对玉米赤霉烯酮所致雌性大鼠子宫和卵巢损伤的影响

本试验通过建立有效的玉米赤霉烯酮所致雌性大鼠毒性模型,探讨白藜芦醇对玉米赤霉烯酮所致雌性大鼠子宫和卵巢损伤的影响。1)将32只2月龄雌性大鼠随机分为4组,每组8个重复,每个重复1只。对照组大鼠每天腹腔注射玉米油,低、中、高浓度组大鼠分别每天腹腔注射1.5、3.0和5.0 mg/kg玉米赤霉烯酮,每天注射量均为0.5 mL,试验期5 d。2)将32只2月龄雌性大鼠随机分为4组,每组8个重复,每个重复1只。第1~21天,RSV组和RSV+ZEA组大鼠每天灌胃40 mg/kg白藜芦醇,空白组和ZEA组大鼠每天灌胃羧甲基纤维素钠溶液,每天灌胃量均为1 mL;第22~26天,ZEA组和RSV+ZEA组大鼠按上述方法构建玉米赤霉烯酮所致雌性大鼠生殖系统凋亡的动物模型,空白组和RSV组大鼠腹腔注射玉米油。结果表明:1)与对照组相比,中、高浓度组子宫内膜变薄,子宫腺增多,闭锁卵泡数量增多,黄体增大且充血严重,子宫和卵巢中B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的mRNA和蛋白相对表达量显著升高(P<0.05),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的mRNA和蛋白相对表达量显著降低(P<0.05)。2)与ZEA组相比,RSV+ZEA组子宫内膜变厚,上皮细胞排列整齐,子宫腺减少;卵巢中可见发育卵泡,闭锁卵泡数量减少,黄体充血减少。与空白组和RSV+ZEA组相比,ZEA组的子宫和卵巢中Bax和Caspase-3的阳性表达增强,而Bcl-2的阳性表达减弱。与ZEA组相比,RSV+ZEA组的子宫和卵巢中Bax和Caspase-3的mRNA和蛋白相对表达量显著降低(P<0.05),Bcl-2的mRNA和蛋白相对表达量显著升高(P<0.05)。由此可见,2月龄雌性大鼠连续腹腔注射玉米赤霉烯酮5 d(每天3.0 mg/kg,玉米油为溶剂)可成功建立雌性大鼠玉米赤霉烯酮毒性动物模型。玉米赤霉烯酮对雌性大鼠子宫和卵巢有损伤,白藜芦醇对玉米赤霉烯酮引起的生殖毒性有明显保护作用。

性激素受体在双峰驼正常睾丸及隐睾的分布

【目的】比较双峰驼(Camelus bactrianus)正常睾丸及隐睾中性激素受体分布差异,探究双峰驼隐睾病理学变化与性激素受体的相关性,为双峰驼睾丸病理研究提供形态学参考。【方法】采用常规组织切片染色及特殊染色法观察隐睾病理学组织形态以及糖原和蛋白的分布变化;应用免疫组织化学法及免疫荧光技术定位雄激素受体(androgen receptor,AR)、雌激素受体α(estrogen receptor alpha,ERα)、雌激素受体β(estrogen receptor beta,ERβ)、促黄体生成素受体(luteinizing hormone receptor,LHR)和促卵泡激素受体(follicle-stimulating hormone receptor,FSHR)在正常睾丸及隐睾的分布及表达。【结果】与正常睾丸相比,隐睾中各类细胞数量显著减少,Leydig细胞发育迟缓,Sertoli细胞多呈幼稚态,结缔组织及生精小管基膜酸性黏蛋白阳性强度下降,总蛋白分布下降;ERα、LHR和FSHR的表达极显著升高(P<0.01),AR的表达极显著降低(P<0.01),ERβ的表达差异不显著(P>0.05);AR在Leydig细胞和Sertoli细胞中的表达强度减弱,ERα在Sertoli细胞中的表达强度减弱,ERβ在Leydig细胞和Sertoli细胞中的表达强度无变化,LHR和FSHR在Leydig细胞和Sertoli细胞中的表达强度增强。【结论】双峰驼隐睾组织结构发育迟缓,糖原及蛋白分泌异常。隐睾Leydig细胞和Sertoli细胞性激素受体表达异常,不利于精子正常发生,阻碍生精细胞发育。

STAR基因在不同发育期绵羊睾丸和附睾中的表达与组织分布

为探讨STAR基因在发育的绵羊睾丸和附睾中的表达模式及潜在功能,该研究采集3月龄、 1周岁和3周岁藏绵羊睾丸和附睾(头、体和尾)组织样本,利用实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹和免疫组织荧光染色法检测STAR基因的表达及其编码蛋白的细胞定位。结果发现,随着年龄的增加,在藏绵羊睾丸和附睾(附睾头除外)中STAR基因在转录水平的表达总体呈下降趋势,而在蛋白质水平的表达呈上调趋势。STAR蛋白主要存在于藏绵羊睾丸间质细胞和附睾假复层纤毛上皮主细胞。鉴于间质细胞和主细胞的主要生物学功能是分泌睾酮和分泌促进精子成熟所需的蛋白质,由此推测,STAR基因可能主要在睾丸间质细胞和附睾主细胞的发育和功能维持中发挥作用,进而促进雄激素的合成和精子的成熟。

妊娠家兔生殖轴系KISS1和TrkA的分布特征和表达规律

为明确吻素(KISS1)和酪氨酸蛋白激酶A(TrkA)在诱导排卵动物生殖轴组织中的表达模式和生理功能,解析KISS1和TrkA对诱导排卵动物生殖的调控机制,以家兔为诱导排卵动物模型,采集妊娠中期(14~18 d)家兔生殖轴系组织(下丘脑、垂体、卵巢和子宫),通过苏木精-伊红染色(H&E)、免疫组织化学染色(IHC)、半定量PCR(RT-PCR)、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫印迹(WB)分析妊娠家兔生殖轴组织中KISS1和TrkA的表达规律和分布特征。IHC结果表明,家兔垂体嗜碱性细胞和卵子透明带中KISS1蛋白的阳性反应较强;TrkA蛋白在下丘脑神经内分泌小细胞、垂体嗜碱性细胞、卵巢颗粒黄体细胞、子宫固有层呈阳性表达。RT-PCR结果显示,妊娠家兔生殖轴组织中均有KISS1表达,且两两比较组间差异显著;下丘脑、垂体、卵巢各组织中TrkA mRNA表达丰度组间差异极显著。KISS1和TrkA基因qRT-PCR结果与RT-PCR结果表达趋势一致。WB结果发现,KISS1蛋白仅在垂体组织表达;TrkA蛋白在生殖轴组织中均有表达,且表达量在子宫、卵巢、垂体、下丘脑各组织依次呈下降趋势。结果说明,KISS1和TrkA参与调控家兔妊娠过程,且TrkA的作用范围更为广泛。

双氢睾酮通过调控孕酮、雌二醇和细胞凋亡参与绵羊子宫功能

旨在探究双氢睾酮(dihydrotestosterone,DHT)是否通过调节孕酮(progesterone,P_(4))、雌二醇(oestrogen,E_(2))和细胞凋亡参与影响绵羊子宫功能,以揭示其在绵羊生殖生理中的潜在作用。本试验以1.5岁左右的雌性小尾寒羊为试验动物,检测卵泡期、黄体期和妊娠期子宫中DHT合成酶和雄激素受体(androgen receptor,AR)的表达变化。随后,体外培养绵羊子宫内膜上皮细胞,并用DHT(10^(-10)~10^(-7) mol·L^(-1))和AR拮抗剂氟他胺(Flu,10^(-8) mol·L^(-1))处理(n=3)。通过酶联免疫吸附试验、细胞免疫荧光、蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR检测P_(4)和E_(2)水平、合成酶和受体表达。此外,还检测经DHT和Flu处理后,绵羊子宫内膜上皮细胞中凋亡因子Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)、B细胞淋巴瘤蛋白2(B cell lymphoma protein 2,Bcl-2)、半胱天冬酶3(caspase 3,CASP3)和活化半胱天冬酶3(active-caspase 3,Act-CASP3)的表达变化。结果表明,绵羊子宫不同时期DHT的合成和AR的表达存在差异,妊娠期子宫DHT合成及AR表达显著低于卵泡期和黄体期(P<0.05)。10^(-10)~10^(-7) mol·L^(-1) DHT处理后,P_(4)合成酶表达显著上调(P<0.05),在10^(-8)~10^(-7) mol·L^(-1) DHT时P_(4)合成显著增加(P<0.05),在10^(-10)~10^(-8) mol·L^(-1) DHT时孕酮受体蛋白表达显著增加(P<0.05),但10^(-7) mol·L^(-1) DHT时孕酮受体蛋白表达显著下降(P<0.05);在10^(-8)~10^(-7) mol·L^(-1) DHT时E_(2)相关合成酶显著减少,并且E_(2)水平显著下降(P<0.05),在10^(-9)和10^(-7) mol L^(-1) DHT时E_(2)受体ERα蛋白显著下调(P<0.05),在10^(-10)~10^(-7) mol·L^(-1) DHT时ERβ和GPER显著增加(P<0.05)。经Flu处理后部分解除DHT对P_(4)和E_(2)的调控。此外,10^(-10)~10^(-7) mol·L^(-1) DHT显著促进子宫内膜上皮细胞凋亡(P<0.05)。本研究证实DHT至少部分通过AR调节P_(4)和E_(2)合成及受体表达,影响细胞凋亡,参与调节子宫功能,这为进一步阐明雄激素参与调节子宫功能提供了新的基础和相关数据。

银川某牛场牛源金黄色葡萄球菌的耐药性分析及毒力基因检测

为了解宁夏某牛场引发奶牛乳房炎致病菌情况,采集临床型乳房炎奶牛乳样52份,采用Baid-Parker选择性培养基分离纯化细菌,革兰氏染色镜检、生化试验、16S rDNA序列分析鉴定疑似菌株。采用琼脂纸片扩散法(K-B法)对细菌进行药敏试验,利用PCR检测分离株中携带的耐药基因、mecA基因和毒力基因。结果显示,52份乳样分离鉴定出29株金黄色葡萄球菌,其中有12株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),检出率为41.4%;不同程度的多重耐药菌株达到20株,多重耐药率达到68.9%,万古霉素的敏感率为100%,左氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星的敏感率达到了65%以上;磺胺类耐药基因sul1和sul2的检出率均为100%,β-内酰胺类耐药基因pbp1A、pbp2B和氯霉素类耐药基因catA3的检出率40%以上,其他类耐药基因检出率较低;毒力基因检测结果显示,nuc、coa的检出率为100%,clfa和spa的检出率较高,hlb、sea、seg、sak、set1、FnBPA、PVL、FnBPB的检出率较低。

降钙素基因相关肽在牦牛附睾中的定位与表达

【目的】分析降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)在牦牛附睾中的转录水平及蛋白分布特点,探究其对精子运输及成熟的功能。【方法】采集6头3~4岁健康成年牦牛的附睾,将其解剖为头、体、尾三部分,应用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、Western blotting分别检测CGRP mRNA和蛋白在附睾的头、体、尾中的表达水平;采用H.E染色法分析附睾组织结构特点;采用免疫组化和免疫荧光技术分析附睾各部分CGRP的分布及表达情况。【结果】RT-qPCR结果表明,CGRP在牦牛附睾头的相对表达量显著高于附睾体和附睾尾(P<0.05),附睾尾表达量最低(P<0.05);Western blotting检测结果表明,CGRP蛋白水平在附睾尾中的表达水平显著高于附睾头和附睾体(P<0.05)。显微镜下观察表明,牦牛附睾组织纤毛长度从头部至尾部逐渐降低,差异显著;附睾头间质组织的间质平滑肌层厚度显著低于附睾体和附睾尾(P<0.05);基细胞和晕细胞在附睾尾分布显著,上皮厚度亦在附睾尾显著降低。免疫组化及免疫荧光分析发现,CGRP主要分布于附睾上皮、基底膜及附睾间质小血管,附睾上皮晕细胞的表达强度最高。【结论】CGRP主要分布于牦牛附睾上皮和间质小血管,提示CGRP对牦牛附睾间质小血管的收缩发挥调节作用。牦牛附睾尾晕细胞数量最多,晕细胞中CGRP的高强度表达提示其可能参与附睾尾的免疫调节。

亚急性瘤胃酸中毒湖羊瘤胃液中菌群和B族维生素丰度变化的关联分析

【目的】本试验旨在探讨湖羊亚急性瘤胃酸中毒(subacute rumen acidosis,SARA)对瘤胃液中微生物菌群结构和B族维生素表达丰度的影响,同时分析二者之间的相关性。【方法】选用体况良好的湖羊12只,随机均分为2组,每组6只,对照组饲料精粗比为3∶7,SARA组饲料精粗比为7∶3建立SARA模型。通过16S rRNA测序技术分析菌群结构变化,利用液相色谱-串联质谱(LC-MS)方法分析瘤胃液中B族维生素的表达丰度,并用Pearson法分析二者相关性。【结果】对照组湖羊瘤胃菌群多样性指数(Shannon和Chao1)显著高于SARA组,菌群多样性显著高于SARA组(P<0.05)。在细菌门水平,对照组放线菌门(Actinobacteria)、Candidatus_Saccharibacteria、软壁菌门(Tenericutes)丰度显著高于SARA组(P<0.05);在细菌属水平,对照组双歧杆菌属(Bifidobacterium)、夏普氏菌属(Sharpea)、产丁酸盐菌属(Saccharibacteria)、未分类的瘤胃球菌属(unclassified_Ruminococcaceae)显著高于SARA组(P<0.05);而未分类的脱硫弧菌属(unclassified_Desulfovibrionaceae)、未分类的梭菌属(unclassified_Clostridiales)和拟普雷沃氏菌属(Alloprevotella)显著低于SARA组(P<0.05)。对照组与SARA组筛选出VB 6(吡哆醛、吡哆醇、吡哆胺)、VB 3、VB 9及VB 126种差异代谢物,其表达丰度SARA组显著高于对照组(P<0.05)。Pearson相关性结果显示,6种差异B族维生素与绝大多数瘤胃微生物具有显著相关性(R>0或R<0)。【结论】SARA改变了瘤胃液中菌群门与属水平结构,导致菌群多样性降低,增加了VB 6、VB 3、VB 9及VB 12表达丰度,且与瘤胃液中大部分菌群具有显著相关性。

兰州市猫传染性腹膜炎发病情况及治疗效果分析

猫传染性腹膜炎是猫饲养过程中最严重的传染病之一,对猫的健康有很大威胁。2021年3-12月,通过应用临床、实验室及特殊检查方法,对兰州市1 145例猫科疾病中的79例猫传染性腹膜炎病例进行诊疗与分析,以期为该病的诊疗及预防提供参考性资料。分析结果显示,兰州市各区域、不同生存环境及各年龄段的病例数均存在显著差异(P<0.05)。兰州市猫传染性腹膜炎发病率为6.90%,主城区平均确诊率(7.41%)比地县区高2.08%,其中城关区确诊率最高,达到7.72%(20/259);发病率最高的救助猫(17.96%)比家养猫高14.29%;发病率随年龄增长而降低,1岁以下确诊率为10.07%(41/407)。病例的体温、体重、肠道淋巴结及白球比指标随着治疗逐渐恢复正常,但所需时间存在差异。结果表明,兰州市猫传染性腹膜炎发病率与其他地区接近,其与病例来源、生存环境、年龄存在相应联系,体温、体重、肠道淋巴结及白球比指标提示了治疗效果。

脂多糖对绵羊输卵管上皮Claudin-1和Occludin表达的影响

绵羊等反刍动物瘤胃的异常代谢及炎症会造成脂多糖(LPS)异位诱发集体其他部位炎症风险,然而LPS对绵羊输卵管上皮屏障关键蛋白紧密连接蛋白封闭蛋白-1(Claudin-1)和闭合蛋白(Occludin)的影响尚不清楚。为阐明LPS对绵羊输卵管上皮Claudin-1和Occludin的影响,本研究采集成年绵羊输卵管通过苏木精-伊红染色、免疫荧光、蛋白免疫印迹法(WB)检测,并体外培养原代输卵管上皮细胞通过免疫荧光、蛋白免疫印迹法及实时荧光定量PCR(qRT-PCR)进行试验。结果表明,Claudin-1和Occludin表达于绵羊输卵管伞部、壶腹部和峡部上皮,Claudin-1和Occludin在伞部的表达量显著高于壶腹部和峡部。采用浓度为0、10、50和100 ng·mL^(-1)的LPS诱导原代壶腹部上皮细胞,发现LPS可促进TLR4、NFκB及TNFα的mRNA表达,并影响Claudin-1和Occludin的蛋白表达水平。表明LPS在短时间内可诱导输卵管炎症反应,并导致上皮细胞Claudin-1和Occludin表达紊乱。进一步提示反刍动物瘤胃异常代谢及炎症导致的LPS易位,可能会诱发输卵管炎症反应,造成输卵管上皮屏障损伤及生理功能障碍,严重影响绵羊的经济价值。本研究结果为反刍动物瘤胃异常代谢及炎症疾病期间LPS易位造成全身性炎症的相关研究提供了理论基础。

丙戊酸对双峰驼成纤维细胞重编程影响

【目的】探讨提高双峰驼成纤维细胞重编程效率,减少因原癌基因引入造成致瘤风险。试验在成纤维细胞重编程过程中添加丙戊酸(valproic acid,VPA),探索小分子物质对双峰驼成纤维细胞重编程的影响,为双峰驼发病机制研究提供参考依据。【方法】采用3月龄双峰驼胎儿成纤维细胞,结合经典诱导组合OSKM(Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc及治疗)和EGFP等5种逆转录病毒对双峰驼成纤维细胞进行重编程(OSKM组),并在第二次病毒感染后添加VPA处理7 d(OSKM+VPA组)收集细胞。利用PCR技术对所得细胞进行内、外源基因检测以证实逆转录病毒对双峰驼成纤维细胞的修饰作用,根据RNA-seq数据从VPA影响较为明显的基因中随机挑选8个基因,检验其在添加VPA前后的变化趋势是否与RNA-seq数据趋势一致,以验证RNA-seq数据的准确性。通过GO分析对转录组样本基因进行分类,并使用KEGG通路富集分析和超几何验证分析明确目的基因显著富集通路。对收集到的细胞进行总RNA提取并结合RNA-seq技术和实时荧光定量PCR(Real time-quantitative interpretation,RT-qPCR)技术检测VPA对双峰驼成纤维细胞重编程的影响。【结果】使用PCR技术检测内、外源基因在不同分组的表达,结果显示nSox2、Sox2、Oct4、Klf4、c-Myc在OSKM和OSKM+VPA组中均有表达,且OSKM+VPA组表达量高于OSKM组,而其在BCEFs组不表达。随机挑选8个基因检测,结果表明与细胞周期信号通路有关的TP53、CCNB1、CDC20这3个基因在添加VPA后表达量下调;与癌症表型特征相关的S100A4、CKS2、VIM、MMP9表达下调;PI3k-Akt信号通路中VEGFC表达上调;此表达趋势与组学数据趋势一致。结果显示在添加VPA后,增殖基因Mki67和PCNA表达下调,而凋亡基因CASP7表达上调。对转录组数据进行KEGG和超几何验证分析,根据分析结果筛选出959个差异表达基因,富集在276个信号通路中,其中Q值小于0.05的信号通路有八条:类固醇生物合成、细胞周期、PPAR信号通路、孕酮介导的卵母细胞成熟、脂肪酸代谢、ECM-受体相互作用、细胞黏附分子和胆固醇代谢。经筛选获得与细胞周期、脂肪酸代谢、细胞黏附分子和胆固醇代谢等相关的26个差异表达基因,并随机选取其中四个基因进行检测,结果表明:VPA可使双峰驼成纤维细胞黏附分子信号通路中L1CAM、CNTN1、NFASC三个基因表达上调,细胞间互作增强,同时上调脂肪酸信号通路中CD36基因的表达。【结论】VPA可将细胞阻滞在分裂期之前,以减少重编程过程中分化几率。同时,VPA对双峰驼成纤维细胞重编程过程中多条信号通路均具有影响,调节信号通路中相关基因表达趋势,有效提高细胞重编程效率,在双峰驼成纤维细胞重编程中发挥重要作用。

基于肿瘤坏死因子信号通路探讨槲皮素对小鼠乳腺炎模型的作用机制

本试验旨在探讨槲皮素对金黄色葡萄球菌致小鼠乳腺炎的肿瘤坏死因子(TNF)信号通路机制。将90只母鼠按照解剖时间(第3、5、7天)分为3个大组,每组共30只母鼠,再将各大组母鼠分为空白对照组(注射生理盐水)、模型组(注射菌液)及槲皮素高(200 mg/kg)、中(100 mg/kg)、低(50 mg/kg)剂量组,共5个小组,每小组各6只母鼠,分别在治疗第3、5、7天采血,检测血液生理指标,随后颈椎脱臼处死,取乳腺组织,通过苏木精-伊红(HE)染色观察病理组织的变化,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测核因子抑制蛋白α(IKBα)、 IκB激酶β(IKKβ)及核转录因子-κB(NF-κB) mRNA相对表达量,蛋白免疫印迹检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IKKβ及NF-κB蛋白表达量。结果表明:1)与空白对照组相比,模型组血液白细胞数量极显著升高(P<0.01),乳腺组织病变严重,乳腺组织中IKBα、IKKβ、NF-κB的mRNA相对表达量显著升高(P<0.05)。2)与空白对照组相比,高剂量组NF-κB、IKBα的mRNA相对表达量差异不显著(P>0.05),高剂量组IKKβ的mRNA相对表达量在治疗第3、7天差异不显著(P>0.05)。蛋白免疫印迹结果显示,与空白对照组相比,高剂量组TNF-α蛋白相对表达量差异不显著(P>0.05),高剂量组IL-6、IKKβ、NF-κB蛋白相对表达量在治疗第3天差异不显著(P>0.05),在治疗第5、7天差异显著(P<0.05)。综上所述,槲皮素可以通过抑制TNF信号通路中IKBα、IKKβ、NF-κB mRNA相对表达量及TNF-α、IL-6、IKKβ、NF-κB蛋白相对表达量来发挥作用,且随着槲皮素添加剂量的升高,其治疗效果也越好,呈现出明显的剂量依赖性。在整个疾病的发生发展过程中,符合疾病发展的规律,在治疗第7天时,基本进入转归期,所有指标基本恢复正常。

张掖市某牛场1例牛源格氏乳球菌的分离鉴定及毒力基因检测

为了确定甘肃省张掖市某养殖场致奶牛乳腺炎的病原,本实验从12份患牛乳汁中分离病原菌,并对其进行了形态学、生化鉴定、16S rRNA基因的PCR扩增及序列同源性分析。利用K-B纸片扩散法检测分离菌株的药物敏感性,采用PCR方法检测其11种毒力基因。结果显示,分离出1株革兰氏阳性球菌,且其生化特性与格氏乳球菌相符,16S rRNA基因序列经比对结果显示,分离菌与GenBank登录的格氏乳球菌(MT597590.1)的同源性高达100%,表明分离菌为格氏乳球菌,并命名为LG01。将分离菌株以腹腔注射方式感染小鼠(1.5×10^(8) cfu/mL),0.2 mL/只,在7 d的观察期内观察小鼠的临床症状,并从死亡小鼠内取其脏器组织,制备组织病理切片并观察。结果显示,接种16 h后小鼠出现竖毛、眼部红肿、流涎、震颤、精神沉郁等临床症状,48 h内小鼠陆续死亡,并且从死亡小鼠病变组织中重新分离到该菌。死亡小鼠的组织病理切片观察结果显示,感染组小鼠的肝脏、脾脏、肺脏、肾脏均出现较明显的病理变化;对照组小鼠均未出现死亡,且其脏器组织无明显病变,表明分离出的格氏乳球菌对小鼠有致病性。药敏试验结果显示,分离菌对阿米卡星、头孢他啶、克拉霉素、多粘菌素B、复方新诺明等药物耐药,对氨苄西林、头孢西叮、四环素、诺氟沙星、环丙沙星、万古霉素、庆大霉素等药物敏感。11种毒力基因检测结果显示,该分离菌携带Adhesin PsaA、Enolase、LPxTG-3、Adhesin cluster 1、Adhesin cluster 2、Capsule gene cluster、folp、gapc 8种毒力基因,推测该分离株的致病性可能较强。本实验为临床格氏乳球菌感染的防治提供数据参考。

BMP6和SMAD5在藏绵羊睾丸组织中的表达和定位

骨形态发生蛋白6(BMP6)能够促进睾丸支持细胞的DNA合成和细胞增殖,SMAD蛋白5(SMAD5)是其下游信号介质,抑制细胞凋亡,两者在雄性动物生殖过程中起着关键作用。以不同发育阶段(3月龄、1岁龄和3岁龄)藏绵羊(Ovis aries)为研究对象,运用实时荧光定量PCR、Western blot和免疫组织化学染色法从转录和翻译水平检测了BMP6和SMAD5在藏绵羊睾丸不同发育阶段的表达和分布模式,研究BMP6/SMAD5在藏绵羊睾丸发育和精子发生过程中的作用。结果显示:1岁龄(性成熟期)和3岁龄(成年)藏绵羊睾丸中BMP6 mRNA相对表达量和蛋白表达量均极显著高于3月龄(性成熟前)(P<0.01),且两者在性成熟后趋于稳定;随年龄增长,藏绵羊睾丸中SMAD5 mRNA相对表达量极显著降低(P<0.01),但SMAD5蛋白表达量极显著升高(P<0.01)。BMP6和SMAD5蛋白在藏绵羊睾丸不同发育阶段的支持细胞和间质细胞中均有表达,推测BMP6/SMAD5在精子发生过程中发挥作用。

宁夏吴忠地区奶牛临床型乳房炎主要病原菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解宁夏吴忠地区奶牛乳房炎的主要病原菌及其耐药情况,采集56份罹患乳房炎的奶牛乳样进行病原菌分离,并对分离菌进行了生化鉴定、16S rRNA基因序列分析、药敏试验以及耐药基因检测。结果表明,该地区的主要病原菌为大肠埃希氏菌和无乳链球菌,检出率分别为23.2%和14.3%。药敏试验结果表明,大肠埃希氏菌主要对头孢他啶、环丙沙星敏感,无乳链球菌主要对阿米卡星敏感。耐药基因检测结果表明大肠埃希氏菌和无乳链球菌主要对氨基糖胺类、氟喹诺酮类、四环素类药物敏感,大肠埃希氏菌对磺胺类药物耐药,对β-内酰胺类药物部分药物敏感,部分药物耐药;无乳链球菌主要对磺胺类药物和β-内酰胺类药物耐药。

马子宫内膜炎病原分离鉴定及致病性与耐药性检测

采集8匹患子宫内膜炎母马的子宫灌洗液并进行细菌的分离鉴定,分离出的病原菌有大肠埃希氏菌、马链球菌兽疫亚种、葡萄球菌、肺炎链球菌和无乳链球菌。选取上述病原菌对小鼠进行攻毒试验,攻毒后的小鼠分别于16 h(大肠埃希氏菌)、10.5 h(马链球菌兽疫亚种)、18 h(肺炎链球菌)和20 h(无乳链球菌)后死亡。剖检病死小鼠发现肝脏、肺脏、肾脏和脾脏都有不同程度的充血、淤血及肿大。采集小鼠组织石蜡包埋后切片观察,发现组织破碎并且伴有严重的充血及淤血现象。药敏试验结果显示,大肠埃希氏菌对四环素耐药,对氨苄西林、头孢哌酮、头孢噻肟等敏感;葡萄球菌对青霉素、氨苄西林耐药,对红霉素、左氧氟沙星、头孢唑林等敏感;肺炎链球菌对青霉素、红霉素、四环素、克拉霉素、头孢唑林、链霉素耐药,对左氧氟沙星敏感;马链球菌兽疫亚种对氨苄西林有一定耐药,对青霉素、红霉素、头孢类以及左氧氟沙星等敏感;无乳链球菌对青霉素、红霉素、万古霉素、氨苄西林、四环素耐药,对氧氟沙星敏感。研究结果对预防和治疗马子宫内膜炎有一定的指导意义。