基于网络药理学探讨熟地黄应用于抗帕金森病的作用机理

目的通过网络药理学,探究并讨论熟地黄用于抗帕金森病的作用机制。为进一步研究熟地黄抗氧化、抗炎的作用机理和临床应用确立基础。方法通过中药系统药理学数据库(TCMSP)探寻其活性成分,并预测相关靶点。通过GeneCards与OMIM数据库查找与帕金森病相关的靶点,运用Cytoscape软件构建“熟地黄-活性成分-帕金森病-靶点”网络关系图。通过String数据库构建熟地黄治疗帕金森病的靶点-蛋白相互作用的网络图和条形图,并进行筛选,提出核心靶点。最后将熟地黄治疗帕金森病的靶点进行GO和KEGG富集分析。结果共获得熟地黄的76个有效活性成分和327个中药靶点。获得8264个帕金森病相关靶点,绘制Venn图,共有39个熟地黄-帕金森病靶点。熟地黄-活性成分-帕金森病-靶点网络关系图显示,熟地黄主要通过豆甾醇等有效成分作用于39个帕金森病的疾病靶点。熟地黄治疗帕金森病的核心基因可能为CASP3、IL6、PPARG、FOS、ESR1、MAPK8等。核心基因关联57条生物途径,主要与G蛋白偶联胺受体活性、神经递质受体活性、核受体活性、G蛋白偶联神经递质受体活性、突触后神经递质受体活性等有关。核心基因共涉及77条通路,主要与TNF信号通路、细胞凋亡、IL-17信号通路、糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路、半乳糖代谢、cAMP信号通路、NF-κB信号通路、Toll样受体信号通路等有关。结论熟地黄可能主要是通过sitosterol(谷甾醇)等有效成分作用于CASP3、IL-6、PPARG、FOS、ESR1、MAPK8等靶点,通过多种途径发挥治疗帕金森病的作用。

MMP-9与原发性肝癌的研究进展

原发性肝癌是常见的恶性肿瘤之一,目前的治疗方法主要是以手术为主要的综合治疗,但是,手术后容易复发、转移、预后比较差。抑制MMP-9才能从根本上治愈原发性肝癌,因此,MMP-9成为研究原发性肝癌的热点。笔者从目前研究MMP-9的进展进行综述。

石榴健胃片对D-IBS模型大鼠5-HT、SP、VIP的影响

目的观察石榴健胃片对肠易激综合征模型大鼠的治疗作用,探讨其药效及作用机制。方法建立大鼠肠易激综合征模型,随机分为正常组、模型组、阳性组(附子理中丸组),石榴健胃片高、中、低剂量组,每组8只,连续给药31 d。测定各组大鼠的体质量、摄食量、排便情况,末次给药后测定胃内残留率和肠推进率;酶联免疫法测定血清以及结肠组织匀浆5-羟色胺(5-HT)、血浆和结肠组织匀浆P物质(SP)、血管活性肠肽(VIP)水平。结果石榴健胃片各组,大鼠摄食量增加,固体粒状粪便增多,以高、中剂量组较明显。大鼠胃残留率和肠推进率减小。石榴健胃片各组大鼠血清和结肠组织匀浆5-HT水平下降,血浆VIP、SP水平升高,以高剂量组明显。结论石榴健胃片可能是调节脑肠轴5-HT、SP和VIP的异常分泌进而治疗肠易激综合征。

参芪抑瘤方抑制胃癌细胞MKN-45增殖和侵袭转移作用机制

目的:观察参芪抑瘤方(抑瘤方)血清抑制MKN-45增殖和侵袭转移作用,并探讨其作用机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力;Trans-well和划痕实验观察细胞侵袭与迁移能力;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术检测环氧合酶-2(COX-2)和人第10号染色体缺失的磷酸酶(PTEN)mRNA表达;免疫组化检测细胞COX-2,PTEN蛋白表达。结果:参芪抑瘤方含药血清(2.8 g·m L-1)干预24,48,72 h后,抑制率为31.25%,33.09%,34.50%;参芪抑瘤方含药血清(2.8 g·m L-1)干预48 h后,细胞侵袭能力、转移能力和迁移能力分别下降了36.18%,49.46%,36.46%;COX-2 mRNA表达量下降90%,PTEN升高89.72%;与空白血清组比较,参芪抑瘤方组COX-2蛋白表达减弱;PTEN蛋白表达增强(P<0.05)。结论:参芪抑瘤方药物血清通过影响COX-2,PTEN mRNA和蛋白表达,抑制MKN-45细胞的增殖,减弱其侵袭转移能力。

归芪聪志汤对VD模型大鼠海马神经元Claudin-1,TGF-β表达的影响

目的：研究归芪聪志汤对血管性痴呆（varscular dementia,VD）模型大鼠学习记忆和海马神经元紧密连接蛋白1（Claudin-1）和转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）表达的影响。方法：Wistar雄性大鼠120只,按随机数字表选10只大鼠作为假手术组,其余大鼠制备VD模型,选成功模型大鼠随机分为5组,分别为模型组、阳性组和归芪聪志汤低、中、高剂量组。归芪聪志汤低、中、高剂量组给药量分别为9.9,19.8,39.6 g·kg-1·d-1。阳性组给予脑复康吡拉西坦胶囊0.3 g·kg-1·d-1。假手术组、模型组给予等量水。每日1次。连续灌胃治疗28 d后,Morris水迷宫予以行为学检测,实时荧光定量PCR（Real-time PCR）,免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）与蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组海马组织Claudin-1,TGF-β基因和蛋白表达。结果：灌胃治疗28 d后,与假手术组比较,VD模型组大鼠的平均逃避潜伏期明显延长、跨原平台次数明显减少（P〈0.01）,大鼠海马的Claudin-1 mRNA及蛋白表达水平明显升高（P〈0.05）,大鼠海马的TGF-βmRNA及蛋白表达水平明显降低（P〈0.05）;与模型组比较,各治疗组大鼠逃逸潜伏期均缩短,跨原平台次数均增多（P〈0.01）,大鼠海马的Claudin-1 mRNA及蛋白表达水平明显降低（P〈0.05）,大鼠海马的TGF-βmRNA及蛋白表达水平明显升高（P〈0.05）,归芪聪志汤中剂量组与脑复康吡拉西坦胶囊组优于其他组（P〈0.05）。结论：归芪聪志汤能够显著改善VD大鼠的学习记忆能力,可能与调节脑组织细胞间黏附作用、抑制炎性因子表达等有关。

加味当归贝母苦参丸对H22肝癌荷瘤小鼠血清IL-2,IL-4,IFN-γ表达的影响

目的研究加味当归贝母苦参丸对H22肝癌荷瘤小鼠血清白细胞介素(IL)-2、IL-4、γ-干扰素(IFN-γ)表达的影响。方法于昆明小鼠腋下注射接种H22肝癌细胞复制H22肝癌荷瘤小鼠模型,造模后将60只小鼠随机分为模型组、顺铂阳性对照组、加味当归贝母苦参丸高剂量组、加味当归贝母苦参丸低剂量组、加味当归贝母苦参丸高剂量联合顺铂组、加味当归贝母苦参丸低剂量联合顺铂组6组,每组10只。造模后第2天开始各组给予对应药物进行干预,连续治疗14 d后,摘除眼球取血并分离血清,采用ELISA法检测血清中IL-2,IL-4,IFN-γ的含量。结果与模型组及顺铂阳性对照组比较,其他各治疗组IL-4含量明显降低,IL-2,IFN-γ含量明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组与顺铂阳性对照组各项指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05);加味当归贝母苦参丸高、低剂量联合顺铂对各项指标的作用明显优于单纯加味当归贝母苦参丸高、低剂量,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论加味当归贝母苦参丸可通过影响I L-2,IL-4,IFN-γ的表达调整机体免疫功能,从而起到抑瘤的作用。

寒热并用法在痞病中的应用

从寒热并用法的源流与发展,病因、病机及代表方剂3个方面对寒热并用法在痞病中的应用做一介绍,以期对临床治疗痞病进行指导。

参芪抑瘤方含药血清对BGC-823胃癌细胞增殖和周期的影响

目的：探讨参芪抑瘤方含药血清对胃癌细胞BGC-823增殖和周期的影响,并探讨其作用机制。方法：以参芪抑瘤方3%,5%,10%含药血清干预BGC-823细胞后,采用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐法检测其对细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测细胞周期变化;采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测细胞周期蛋白依赖性激酶（cyclindependent kinase inhibitor,CDKN）1B,CDKN1C mRNA表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测p27,p57蛋白表达情况。结果：不同浓度含药血清作用于BGC-823细胞24,48,72 h后,细胞存活率显著降低（P〈0.01）,且与时间和浓度呈依赖关系;不同浓度含药血清作用于BGC-823细胞24 h后,G0/G1期细胞增多,S期细胞减少;Real-time PCR结果表明,与溶剂组和空白血清组比较,参芪抑瘤方各组CDKN1B,CDKN1C mRNA表达上调（P〈0.05,P〈0.01）;Western blot结果显示,与溶剂组比较,参芪抑瘤方各组p27,p57蛋白表达上调（P〈0.05,P〈0.01）。结论：参芪抑瘤方含药血清可以抑制胃癌BGC-823细胞的增殖,其机制可能通过调节CDKN1B,CDKN1C mRNA及p27,p57蛋白表达,进而干预细胞周期有关。

外泌体介导的辐射旁效应对心肌成纤维细胞的干预及黄芪甲苷的防护作用

为探讨放射性外泌体介导的辐射旁效应对心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)的影响并观察黄芪甲苷(astragaloside IV,AST)的防护效应,该研究以2 Gy X线辐照大鼠CFs,48 h后超速离心提取放射性外泌体(X-exo),进行外泌体形态、浓度和表面标志蛋白鉴定。将CFs分为对照组(Control)、照射组(X-CFs)、CFs与放射性外泌体共培养组(X-exo+CFs)和黄芪甲苷干预组(X-exo+AST-CFs),采用流式细胞术检测各组细胞周期;划痕实验检测细胞迁移能力;Western blot检测纤维化相关分子TGF-β1、Col-I的表达情况。结果显示,X-CFs组和X-exo+CFs组在干预后24 h、48 h处于G/G期的细胞比例均低于Control组(P<0.01),S期和G/M期的细胞比例均高于Control组(P<0.01);X-CFs和X-exo+CFs组细胞迁移率在12 h、24 h、48 h时均显著高于Control组(P<0.05);在48 h时X-CFs组和X-exo+CFs组TGF-β1、Col-I蛋白表达量均高于Control组(P<0.01)。X-exo+AST-CFs组在干预后24 h、48 h时处于G/G期的细胞比例高于X-exo+CFs组(P<0.01),处于S期、G/M期的细胞比例均低于X-exo+CFs组(P<0.01);对比X-exo+CFs组,X-exo+AST-CFs组干预后,12 h、24 h、48 h细胞迁移率分别降低了62.6%、40.6%、41.2%(P<0.01),48 h时TGF-β1、Col-I蛋白表达量分别降低了15%、21.9%(P<0.01)。这说明X线诱导的外泌体(放射性外泌体)能促进共培养的CFs增殖、迁移、TGF-β1和Col-I高表达,且AST对这种放射性外泌体通过辐射旁效应引起的促纤维化有一定的抑制效应。