基于Cell⁃SELEX的核酸适配体在肿瘤诊治中的应用

细胞上的表面膜蛋白能够维持细胞结构的完整性以及调控细胞生理活动,膜蛋白种类及表达水平均与恶性肿瘤的发生发展密切相关。Cell⁃SELEX是将完整活细胞作为筛选靶标,其最大的优点是在筛选过程中能够同时以多种呈天然构象的膜蛋白为靶标分子,不需要预先了解细胞表面蛋白种类及其表达水平,特别适用于肿瘤细胞的核酸适配体筛选,为药物筛选、临床诊断、疾病治疗和基础医学研究等带来了新的思路和方法,在肿瘤诊治领域具有广泛的应用前景。本文对基于Cell⁃SELEX的核酸适配体在肿瘤诊治中的应用做一综述,以期对Cell⁃SELEX的研究提供参考依据,对恶性肿瘤的分子诊断、个体化治疗研究提供帮助。

靶向肝癌细胞自噬提高大黄素的毒性杀伤作用

背景与目的:大黄素处理肝癌细胞后能够诱导内质网应激和凋亡。鉴于内质网应激与自噬之间的关联及后者作为细胞对抗应激环境的一种自我防御机制,该研究拟探讨通过抑制肝癌细胞自噬信号通路的策略提高大黄素对肿瘤细胞的毒性杀伤作用。方法:大黄素处理肝癌细胞后,应用CYTO-ID自噬检测试剂盒和蛋白[质]印迹法(Western blot)分别检测大黄素诱发细胞自噬情况;利用细胞自噬抑制剂(氯喹)预先抑制肝癌细胞自噬的产生,然后用大黄素处理肝癌细胞,最后通过ATPlite试验和细胞克隆形成实验检测肿瘤细胞存活;通过流式细胞术检测氯喹和大黄素联合处理诱导肝癌细胞发生凋亡的凋亡率,采用Western blot检测凋亡效应蛋白caspase-3活化断裂后产生活性片段的水平。结果:大黄素处理肝癌细胞后能够诱导肝癌细胞自噬;利用氯喹抑制肝癌细胞自噬能够显著能够提高大黄素对肝癌细胞克隆存活的抑制作用;氯喹和大黄素联合处理肝癌细胞能够显著提高细胞周期sub-G1期和活化caspase-3蛋白的表达水平。结论:靶向肝癌细胞自噬能够提高大黄素的毒性杀伤作用。

大黄素诱导对内质网应激相关蛋白表达及肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的研究大黄素对肝细胞癌Hep G2细胞作用后内质网应激(ERS)相关蛋白表达的影响。方法采用不同浓度大黄素(0、10、50、100μmol/L)处理Hep G2细胞48 h,通过四甲基偶氮唑蓝比色法测定大黄素对肿瘤细胞增殖的影响,流式细胞术检测大黄素对Hep G2细胞的凋亡率,采用蛋白印迹法检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12(caspase-12)及caspase-12活化断裂后产生的活性片段的表达。结果大黄素以浓度依赖的方式抑制Hep G2细胞的增殖,促进细胞凋亡。大黄素处理Hep G2细胞后,内质网分子伴侣蛋白GRP78的表达明显增高;内质网相关凋亡分子CHOP和caspase-12的含量也显著增高,caspase-12活性增强。结论大黄素可能通过内质网应激相关途径诱导Hep G2细胞凋亡。

穴位注射联合穴位按摩治疗消化道癌术后胃瘫的临床观察

目的观察中西医结合治疗胃瘫的效果。方法选取28例术后胃瘫的患者,随机分为对照组及观察组,对照组采用常规治疗;观察组在常规治疗的同时给予穴位注射及穴位按摩,观察两组胃肠动力恢复时间和胃肠减压引流量。结果观察组胃蠕动功能的恢复时间短于对照组,持续胃肠减压的引流量较对照组减少。结论中西医结合治疗胃瘫疗效优于单纯西医治疗,可缩短胃蠕动功能恢复时间,减少胃肠减压引流量,促进功能恢复。

贞芪扶正颗粒辅助奥沙利铂治疗H_(22)移植瘤小鼠的疗效及其对Bax、Bcl⁃2表达的影响

目的探讨贞芪扶正颗粒辅助奥沙利铂治疗H22移植瘤小鼠的疗效及其对细胞凋亡相关因子B淋巴细胞瘤⁃2(Bcl⁃2)和Bcl⁃2相关X的蛋白质(Bax)的影响。方法腹腔驯化H22细胞悬液,于前肢右侧腋下接种建立KM小鼠H22荷瘤模型,以奥沙利铂+贞芪扶正颗粒(高、中、低剂量)干预10 d,并进行常规观察、称重和检测瘤体变化,末次给药24 h后处死小鼠,测量瘤体大小和计算抑瘤率及脾脏指数,应用免疫组化法和qPCR分别检测瘤体组织中Bcl⁃2、Bax的蛋白和mRNA表达、全自动蛋白电泳分析法(Simple Western)测定Bcl⁃2、Bax蛋白表达。结果与模型组比较,各药物组小鼠体质量均减轻(P<0.05),瘤体体积减小、质量下降(P<0.05);与奥沙利铂组比较,贞芪扶正颗粒(高、中、低剂量)+奥沙利铂组抑瘤率均增高(P<0.05),脾脏质量与脾脏指数减小(P<0.05),Bcl⁃2蛋白和mRNA降低(P<0.05),Bax蛋白和mRNA升高(P<0.05)。结论贞芪扶正颗粒具有增强奥沙利铂抑制肝癌移植瘤生长的作用,其分子机制可能与调节Bcl⁃2和Bax的表达有关。

乙肝病毒X蛋白可通过调控CXC趋化因子受体6表达促进肝癌细胞的侵袭和转移

目的探究乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)通过调控CXC趋化因子受体6(CXCR6)对肝癌HepG2细胞生长和凋亡的作用。方法按处理方式不同将HepG2细胞分成Control组、NC组(转染阴性对照质粒)、HBx组(转染HBx mimics)、HBx+si-CXCR6组(共转染HBx-mimics和CXCR6 siRNA)。二苯基四氮唑溴盐(MTT)、流式细胞术、Transwell实验分别检测细胞增殖、凋亡率、迁移和侵袭情况,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中CXCR6和HBx蛋白表达。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验。结果HBx组CXCR6、HBx蛋白表达及细胞增殖水平高于Control组和NC组[(0.49±0.05)比(0.27±0.04、0.26±0.03)、(0.59±0.05)比(0.32±0.04、0.30±0.05)、(0.96±0.07)比(0.66±0.03、0.62±0.03),t=5.951、5.732、7.304、8.195、6.823、7.495,P<0.05]。HBx+si-CXCR6组CXCR6蛋白表达及细胞增殖水平低于HBx组(0.18±0.02比0.49±0.05、0.63±0.02比0.96±0.07,t=9.971、7.851,P<0.05)。HBx组细胞增殖水平、迁移率、侵袭数高于Control组和NC组[(0.96±0.07)比(0.66±0.03)、(0.62±0.03)、(46.38±0.06)%比(20.21±0.04)%、(23.23±0.03)%、(78.53±0.06)比(36.19±0.02)、(39.18±0.03),t=7.914、7.833、628.583、614.025、1159.529、1024.361,P<0.05],细胞凋亡率低于Control组和NC组[(1.33±0.16)%比(5.84±0.11)%、(6.63±0.39)%,t=40.232、51.381,P<0.05]。HBx+si-CXCR6组细胞增殖水平、迁移率、侵袭数低于HBx组[(0.63±0.02)比(0.96±0.07)、(19.41±0.05)%比(46.38±0.06)%、(33.51±0.04)%比(78.53±0.06)%,t=8.025、603.548、1120.846,P<0.05],细胞凋亡率高于HBx组[(4.66±0.36)%比(1.33±0.16)%,t=45.715,P<0.05]。结论乙肝病毒X蛋白可通过提高CXCR6表达促进肝癌细胞的侵袭和转移。