来源于大鼠脊髓星形胶质细胞的神经干细胞的增殖分化特性

目的:通过研究碱性成纤维生长因子(bFGF)和表皮生长因子(EGF)在A-NSC培养中的作用来观察其增殖特性;通过添加血小板生长因子PDGF-AA作为诱导因子来研究A-NSC分化的特性。方法:将A-NSC分四组:bFGF+EGF添加组,bFGF添加组,EGF添加组和对照组进行培养,通过形态观察和流式细胞仪检测细胞周期。同时添加PDGF-AA诱导A-NSC分化,以自然分化为对照组,通过免疫荧光染色观察比较其各类细胞分化比例的差异。结果:可观察到A-NSC在bFGF添加组和bFGF+EGF添加组有正常的分裂周期,而EGF添加组和对照组的细胞几乎都停滞在G0/G1期,显示其增殖受到阻滞;诱导实验检测到对照组细胞的分化比例分别为神经元(89.0±4.2)%,星形胶质细胞(4.6±3.2)%,少突胶质细胞(7.6%±2.5%),具有很高的神经元分化比例;诱导组细胞的分化比例分别为神经元(80.6±4.1)%,星形胶质细胞(3.0±1.3)%,少突胶质细胞(20.6±1.8)%,诱导组分化成少突胶质细胞的能力有显著提高(P<0.001)。结论:在A-NSC的生长过程中,bFGF对A-NSC的增殖起重要作用,在本实验条件下A-NSC倾向于向神经元分化,同时PDGF-AA能够显著诱导A-NSC分化成少突胶质细胞。

Evans蓝血管显影法在脊髓损伤研究中的应用

为了观察脊髓损伤缺血区的血管变化,本研究就灵敏有效的血管显影方法进行了探索。由于Evans蓝可与血浆白蛋白结合,而且血管内皮细胞上有血浆白蛋白受体,所以Evans蓝可能用于显示血管,并具有不同于常用方法的独特优点。我们尝试了Evans蓝液的不同配方及在染液静脉灌注前或灌注后固定的两种固定方法。Evans蓝液的不同配方为单纯Evans蓝、Evans蓝加明胶以及Evans蓝加明胶及铬明矾。我们观察到每一种配方都有其优缺点,而且能彼此互补。有的方法可进行免疫组化双标染色。由于许多物质与脊髓血管的病理变化有关,大多可用免疫组化染色予以显示,故此对脊髓损伤研究非常重要。

孕酮对脊髓损伤后神经纤维的保护作用

据报导孕酮可以加强髓鞘蛋白的表达量,稳定神经系统的白质。脊髓内移植背根节神经细胞后,其长出的神经纤维可长距离的在溃变神经纤维的支架上生长。为了研究脊髓损伤后孕酮对受损白质的溃变和再生神经纤维生长的影响,将C57小鼠脊髓胸8(Th8)节段皮质脊髓束横断后,将孕酮溶于芝麻油(10mg/ml)后皮下注射,隔日注射1次,持续2周采用丽春红2R-亮绿染色法显示皮质脊髓束在脊髓内的位置、形态。结果显示:皮下注射孕酮之后皮质脊髓束远端轴突更加完整,排列更加规则、致密,对照组中远端轴突碎裂严重,排列杂乱,纤维丢失。上述结果提示孕酮能够保护小鼠受损的皮质脊髓束远端轴突。

睾酮对小鼠坐骨神经损伤后脊髓前角运动神经元的保护作用

目的探讨睾酮对坐骨神经损伤后脊髓运动神经元的保护作用。方法12只性成熟C57雄性小鼠随机分为:芝麻油对照组(n=6)和睾酮实验组(n=6)。采用单侧坐骨神经切断损伤模型,手术后分别隔日皮下注射芝麻油和睾酮。两周后通过尼氏染色统计腰骶髓坐骨神经损伤侧的前角运动神经元数量和截面积。结果睾酮实验组腰骶髓前角运动神经元状态要好于芝麻油对照组,胞体饱满,突起较多。神经元数量和平均截面积明显大于芝麻油对照组(P<0.01)。结论坐骨神经损伤后,睾酮对支配该神经的运动神经元具有明显的保护作用,增加存活运动神经元的数量和截面积。

匹罗卡品诱导的颞叶癫痫小鼠恐惧记忆行为学变化

目的研究匹罗卡品(PILO)诱导的颞叶癫痫小鼠的恐惧记忆行为学变化规律,探讨此行为学检测评价颞叶癫痫的可行性。方法建立PILO小鼠癫痫模型,分PILO注射2周组(n=11)、PILO注射6周组(n=7)和PILO注射10周组(n=11),同时设正常对照组(n=10)。对各组小鼠进行场景恐惧记忆实验,同时进行海马Nissl染色观察。结果经过声音提示恐惧记忆训练,小鼠恐惧记忆的获得受到了损害。场景恐惧记忆测试发现PILO注射2周组小鼠的僵住时间与对照组无统计学差异(P>0.05),而6周组和10周组则显示明显的恐惧记忆减弱(P<0.05);声音提示的恐惧记忆测试发现PILO注射2周组和6周组小鼠僵住时间与对照组无统计学差异(P>0.05),而10周组则出现明显的恐惧记忆减弱(P<0.05)。Nissl染色显示,PILO注射6周和10周组小鼠海马CA3的锥体细胞脱失,排列稀疏,间隙增大,许多细胞胞质中的Nissl小体减少或消失。结论PILO诱导的颞叶癫痫小鼠恐惧记忆的形成及场景恐惧记忆的回忆都受到了损害,但声音提示的恐惧记忆得到了一定程度的保留。恐惧记忆行为学的变化可能会成为评价颞叶癫痫的一个临床指标。

带血管蒂肌瓣贴附脊髓创伤对脊髓的保护作用

目的采用带血管蒂肌瓣贴附的手术方法,增加损伤脊髓缺血区的血供以减轻脊髓继发性损伤。方法通过全贴附和半贴附的方法将带蒂椎旁肌覆盖在损伤脊髓上方,2w后灌注进行血管显影,并进行组织学染色观察病理变化。结果血管显影结果显示肌肉贴附的正下方有血管从肌肉长入脊髓实质。组织学结果显示贴附肌肉2w后贴附部脊髓继发性损伤较未贴附部大幅减轻。结论脊髓损伤后在缺血区上方贴附肌蒂,可以改善缺血区的血液供应,减轻继发性损伤,有良好的临床应用前景。

Proline rich结构域介导Nogo-A激活NF-κB信号

髓鞘来源的中枢神经再生抑制因子——Nogo-A被发现除表达于成熟的少突胶质细胞,还广泛高表达于多种类型的神经元中.目前,神经元中Nogo-A的功能还不明确.为探讨神经元内Nogo-A的功能,以HEK293FT细胞为模型,利用信号途径报告基因系统筛选过表达Nogo-A对多种信号途径的调控作用,发现过表达Nogo-A能特异激活NF-κB信号,利用不同的Nogo-A剪接体和截断体形式研究,证明Nogo-A激活NF-κB信号依赖于其氨基端的prolinerich结构域,进一步使用NF-κB信号途径相关分子显性突变体揭示IκBα、TRAF6、Rac/Cdc42参与Nogo-A激活NF-κB信号.结果提示,Nogo-A可以显著激活NF-κB信号,且依赖于Nogo-A氨基段的prolinerich结构域.

人骨肉瘤细胞株MG63功能性N-甲基-D-天冬氨酸受体的表达

目的:研究人骨肉瘤细胞株MG63上功能性N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体的表达。方法:利用钙离子成像系统检测NMDA或谷氨酸对MG63细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响。结果:仅6.4%MG63细胞对NMDA产生[Ca2+]i升高反应,对谷氨酸则没有反应。多数MG63细胞呈现自发性的钙离子震荡现象,且该现象不能被MK801所阻断。结论:MG63细胞表达的功能性NMDA受体很少。