骨肉瘤的生物学治疗进展

骨肉瘤是一种原发的骨恶性肿瘤,以恶性程度高、易发生早期转移、预后差为特点。传统手术治疗方法生存率小于20%,通过对骨肉瘤化疗方案的不断改进,以新辅助化疗结合手术为主的治疗方案使患者的5年生存率提高到60%~70%。但是,目前的化疗方案无法使骨肉瘤患者生存率进一步提高,且如果患者产生化疗耐药性则预后极差。为解决化疗"瓶颈期"问题,近几年多提倡以免疫疗法、基因疗法及靶向治疗与化疗结合的综合性治疗方案。本文通过探讨近年来骨肉瘤在免疫治疗、基因治疗和靶向治疗等方面取得的进展,对骨肉瘤治疗方法做一总结。

全反式维甲酸诱导前列腺癌细胞系DU-145凋亡的分子机理

目的 克隆全反式维甲酸诱导前列腺癌细胞系 DU- 1 45细胞产生凋亡的相关基因。探讨维甲酸诱导前列腺癌细胞产生凋亡的分子机理。方法 应用全反式维甲酸诱导前列腺癌细胞系DU- 1 45细胞凋亡 ,采用基于 PCR的改良消减杂交技术克隆与凋亡相关的基因。结果 在前列腺癌 DU- 1 45细胞凋亡过程中 ,有大量肿瘤坏死因子 (TNF)的表达 ,同时 ,克隆出 c- erb B- 2基因。结论 TNF及 c- erb B- 2基因在由全反式维甲酸诱导的前列腺癌细胞系 DU- 1

一种新的(1→3)-β-D-葡聚糖识别蛋白的鉴定及其分子克隆

目的从大黄粉虫 (Tenebriomolitor)体内鉴定出一种 (1→ 3) β D 葡聚糖识别蛋白 (Tm GRP)并对其进行分子克隆。方法通过制备一种 β 1,3 葡聚糖固定化柱 ,从大黄粉虫的体液中筛选出能与 (1→ 3) β D 葡聚糖发生特异性结合的蛋白质。利用DNA探针法和随机引物法从大黄粉虫的cDNA文库中筛选Tm GRP的全部DNA序列。结果Tm GRP是一个由 14 4 3个核苷酸编码产生的具有 4 81个氨基酸残基的蛋白质。结论Tm GRP是大黄粉虫体内的一种葡聚糖识别蛋白。

新基因Restin的克隆及比较生物学分析

采用PCR介导的减法杂交技术,从全反式维甲酸诱导的HL-60细胞中克隆得到一新基因,该基因编码219个氨基酸.借助生物信息学分析技术,发现该基因表达蛋白与神经细胞生长抑制因子（Necdin）的功能结构域高度同源（49％）,均为碱性蛋白,命名为Restin（细胞静息相关蛋白）.更有意义的是,同源搜索发现Restin,Necdin和Mages（黑色素瘤相关抗原家族）为同一蛋白家族,提示Restin和Mages是两类具有某种联系而功能又不同的蛋白质.对所有这些蛋白进行综合分析发现,它们分别属于两个不同的亚家族,碱性蛋白家族和酸性蛋白家族,其中Restin,Necdin和Mage D1含有碱性同源结构域（理论pI为8.6～10.1）,主要在终末分化细胞中表达,在肿瘤组织极少表达或不表达,实验结果表明,Necdin可以与转录因子（E2F1）及p53相互作用,从而抑制细胞增殖,推测此类蛋白可能与细胞静息状态相关;而 Mage A,C等表现为酸性同源结构域（理论pI为4.2～4.9）,主要在肿瘤组织和胎儿组织中表达,推测此类蛋白可能与细胞增值有关.这两类蛋白是否构成一对与细胞周期调控相关的正负系统值得进一步深入研究.

抗人CD_3单链抗体基因的构建及序列分析

本文在已克隆抗人ＣＤ３抗体ＶＨ和Ｖｋ基因的基础上，设计并合成了ＰＣＲ引物。两个外侧引物分别含有ＥｃｏＲＩ和ＳａｌＩ酶切位点及起始码和终止码序列，４个内侧引物各含部分连接肽基因序列。用加端ＰＣＲ分别在ＶＨ基因３＇端和Ｖｋ基因５＇端延伸部分连接肽基因序列，回收后混合运火；应用重叠延伸拼接法，将ＶＨ和Ｖｋ基因通过Ｌｉｎｋｅｒ序列串联为单链抗体基因；利用ＰＣＲ产物两端预先设计的ＳａｌＩ和ＥｃｏＲＩ酶切位点，将其克隆到ｐＵＣ１９质粒中，筛选到阳性克隆。经双脱氧终止法序列测定：ＶＨ和ＶＫ基因及Ｌｉｎｋｅｒ序列均正确，为用基因工程技术生产单链抗体奠定了基础。

中国南海海绵提取物renierol对黄嘌呤氧化酶的抑制作用

目的:本实验的目的是探讨中国南海海绵提取物renierol对黄嘌呤氧化酶的抑制作用及对小鼠高尿酸血症的影响。方法:从海绵中分离提取renierol成分,将20、40、60μg/ml renierol或1μg/ml阳性对照别嘌呤醇(1μg/ml),分别加入黄嘌呤溶液(50μmol/ml)和0.1 U/ml黄嘌呤氧化酶中,利用5 min超氧离子生成量来测定黄嘌呤氧化酶活性(NBT显色法)。再将20、40、60μg/ml renierol或100 U/ml阳性对照SOD加入25℃预热过的邻苯三酚,在波长420 nm处测定吸光值,观察renierol对自由基的直接清除作用。建立尿酸酶抑制剂氧嗪酸钾造成小鼠高尿酸血症模型,并给高、中、低剂量renierol组小鼠口服10、203、0 mg.kg-1renierol,别嘌呤醇组给药量为2 mg.kg-1,用全自动生化分析仪测定实验鼠的血清尿酸值,观察renierol体内降尿酸作用。结果:Renierol体外是黄嘌呤氧化酶的竞争性抑制剂,其IC50为1.36μg.ml-1,在体内也有明显的降尿酸作用。结论:Renierol通过抑制黄嘌呤氧化酶来降血尿酸。

广东人群CYP2C9等位基因及基因型分布频率

目的了解广东人群CYP2C9等位基因及基因型分布频率。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,对100例健康广东人个体进行CYP2C9基因分型。结果CYP2C91及CYP2C93等位基因频率分别为0.965及0.035,未检测到CYP2C92等位基因;基因型CYP2C91/CYP2C91和CYP2C91/CYP2C93的频率分别为0.930、0.070,符合Hardy-Weinberg平衡分布。结论广东人群CYP2C93等位基因频率与国内其他人群及亚洲其他各国人群相比,差异无显著性,而与欧美高加索人群显著不同。广东人群使用CYP2C9底物药时,应进行相应的CYP2C9基因型检测,以指导临床合理用药和个体化医疗。

代谢综合征大鼠模型的实验研究

目的通过2种不同饲料联合链脲佐菌素(STZ)诱导建立代谢综合征(MS)大鼠模型,为该疾病的研究探索理想的建模方法。方法 90只大鼠随机分为3组:MS模型正常盐组(NS)、MS模型高盐组(HS)和对照组(NC)。NS组大鼠饲喂高脂高糖饲料,HS组大鼠饲喂高脂高糖高盐饲料,NC组大鼠饲喂基础饲料。10周末,NS组和HS组选择腹围达标的大鼠,给予一次性腹腔注射STZ25mg/kg。分别在不同时间点测定各组大鼠体重、腹围、血压、空腹血糖及血脂等指标。结果 NS组和HS组大鼠体重、腹围、空腹血糖与NC组相比均升高,差异有统计学意义(P<0.05～0.01)。12周末时,HS组大鼠血糖及腹围较NS组增高,差异有统计学意义(P<0.05);12周末时,HS组大鼠高密度脂蛋白胆固醇较NS组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。NS组成模率为40.0%,HS组成模率为66.7%,2组成模率差异有统计学意义(P<0.05)。结论采用高脂高糖饮食或高脂高糖高盐饮食诱导加腹腔注射小剂量STZ的方法可在短时间内成功复制稳定的MS大鼠模型,且HS组成模率较NS组高。

高能电子线辐射损伤对TGF-β_1表达及Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的影响

探讨了高能电子线辐射损伤后Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的改变情况及TGF - β1对其的调控作用。采用电子直线加速器照射制作动物的辐射损伤模型 ,对NIH 3T3细胞进行照射 ,观察胶原总量及Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的改变 ;测定损伤后细胞因子TGF - β1表达的变化情况。结果显示 ,损伤后胶原总量变化不大 ,而Ⅰ型胶原含量下降 ,Ⅲ型胶原含量上升 ;损伤后TGF - β1表达量增加。结果提示 ,放射性皮肤损伤引起了胶原代谢的变化 ,损伤后胶原代谢的调控机制中 ,TGF -

一种双顺反子表达载体的构建及应用的研究

将表达载体ｐＥＣ３４中的一段寡核苷酸序列，其中包括翻译增强子序列、ＳＤ序列、终止码、起始码及两端的限制性内切酶位点，插入ＧＳＴ基因后，构建成双顺反子的表达载体．利用此载体表达了非融合的人骨形成蛋白２Ａ（ｈＢＭＰ２Ａ）和人骨形成蛋白３（ｈＢＭＰ３）Ｃ端肽段，将第一顺反子基因（ＧＳＴ基因）切小到原来的１／３时，则位于下游的第二顺反子基因编码的蛋白质在大肠杆菌中的表达量增加一倍。

膀胱移行细胞癌中cPKCα的表达及意义

目的 探讨cPKCα 与膀胱癌生物学行为之间的关系及意义。方法 采用WesternBlot技术检测 38例膀胱癌及癌周正常膀胱粘膜组织胞膜、胞浆中cPKCα 的表达。结果 1 与癌周正常膀胱粘膜组织相比 ,cPKCα 在膀胱癌中胞膜表达升高 ,胞浆表达渐降低 ,膜质比增高 (P <0 0 1) ;2 cPKCα随膀胱癌病理分级的升高 ,胞膜表达渐增高 ,胞浆表达渐降低 ,膜质比渐增大 (P <0 0 5 ) ;3 cPKCα 随膀胱癌临床分期的升高 ,胞膜表达渐增高 ,胞浆表达渐降低 ,膜质比渐增大 (P<0 0 0 1)。结论 cPKCα 在膀胱癌的发生发展过程中存在CKP膜转位 ,其表达与膀胱癌的恶性程度及患者预后关系密切。

重组人核糖核酸酶抑制因子 基因的siRNA表达载体构建及B16细胞中基因沉默的鉴定

人核糖核酸酶抑制因子(Human ribonuclease inhibitor, hRI)是细胞质中的一种酸性糖蛋白,可以与血管生长因子(Angiogenin, Ang)紧密结合从而抑制血管形成.利用全基因组合成法合成针对人核糖核酸酶抑制因子基因(hri)的发夹shRNA序列,亚克隆到siRNA表达载体pKD;重组载体经酶切鉴定后,用脂质体法与报告基因绿色荧光蛋白重组融合的人核糖核酸酶抑制因子的逆转录病毒载体pLNCX-EGFP-C1-hri共转染到小鼠黑色素瘤细胞B16中,在荧光显微镜下检测干扰效果.用Image-Pro plus 4.5软件对绿色荧光照片半定量分析干扰效率.结果表明,荧光显微镜显示B16中表达的绿色荧光被干扰,荧光强度半定量分析干扰效率可达80%以上.成功重组构建了针对hri的siRNA表达载体.

氧化修饰的β_2-糖蛋白-1诱导抗心磷脂抗体的产生

目的：探讨蛋白质的氧化修饰与体内抗磷脂抗体产生的关系。方法：首先，在体外以次黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶氧化系统氧化大鼠β_2-GP1，然后以氧化的β_2-GP1（oxβ_2－GP1）免疫同种大鼠，最后以ELISA方法检测被免疫大鼠β_2-GP1血清中的抗心磷脂抗体（ACA）。结果：氧化的β_2-GP1免疫的大鼠血清中产生高滴度的ACA。结论：β_2－GP1的氧化修饰在ACA的产生上可能起十分重要的作用。

慢性染铅对海马CA1区LTP及ERK2活性影响

目的 探讨慢性染铅对海马CA1区LTP及ERK2活性的影响。方法 用同心圆电极刺激海马的Schaffer侧支 ,于CA1区用细胞外玻璃电极记录单脉冲刺激引起的群峰电位 (PS) ,观察对照组和染铅组大鼠于高频刺激后PS幅值的变化 ;同时利用WesternBlots方法检测海马CA1区ERK2的活性。结果 HFS前记录的对照组和染铅组的PS幅值无显著性差异 ;HFS后染铅组的PS平均幅值与对照组相比下降了 79% (P <0 0 1) ;染铅组CA1区的ERK2的活性比对照组下降了 2 4 1% (P <0 0 1)。结论 慢性染铅可抑制CA1-LTP的形成 。

子宫内膜异位症腹腔液中转化生长因子的测定及其意义

目的 测定转化生长因子 β1(TGF β1)在子宫内膜异位症患者腹腔液中的浓度 ,探讨其与异位子宫内膜的种植、盆腔粘连的关系。方法 采用双抗体夹心ELISA法测定正常盆腔 (15例 )、盆腔粘连 (10例 )、内膜异位症 (30例 )腹腔液中TGF β1的含量。结果 子宫内膜异位症患者腹腔液中TGF β1的含量明显高于正常盆腔组和盆腔粘连组 (P <0 0 1) ,盆腔粘连组高于正常盆腔组 (P <0 0 1)。结论 子宫内膜异位症患者腹腔液中TGF