重组大肠杆菌催化合成谷胱甘肽的研究

利用PCR技术扩增编码γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(GSH )及谷胱甘肽合成酶(GSH )的基因,并进行了部分序列分析,分别构建了表达质粒pTrc-gsh 和pTrc-gsh ,它们在E.coliBL21中的稳定性很好。在E.coliBL21(pTrc-gsh )∶E.coliBL21(pTrc-gsh )=3∶1的情况下,谷胱甘肽的合成达3.31g/L,高于工程菌E.coliBL21(pTrc-gsh)催化合成的谷胱甘肽的量(2.51g/L)。利用E.coliBL21(pTrc-gsh )与E.coliBL21(pTrc-gsh )将γ-谷氨酰半胱氨酸的合成与谷胱甘肽的合成分步进行,谷胱甘肽的合成达3.78g/L,比利用E.coliBL21(pTrc-gsh)采用两步法合成的谷胱甘肽高42.1%,解决了GSH对GHI的反馈抑制,并降低了ADP对第二步反应的抑制程度。

甲氨蝶呤-聚乙二醇偶联物的合成及其体外抗肿瘤活性

为了改善甲氨蝶呤的溶解性能和生物学性能,本工作在合成甲氨蝶呤-聚乙二醇偶联物的基础上,考察了该偶联物的溶解性和体外抗肿瘤活性。通过采用微波催化与化学催化相结合的方法,制备了新型甲氨蝶呤-聚乙二醇偶联物,其结构得到了紫外、红外和核磁共振谱的确证。测定了偶联物在水中的溶解度及其在辛醇/水中的分配系数,测得偶联物的水溶性和脂溶性均有明显增加,在纯水中的溶解度提高了128倍,分配系数提高了近5倍。以小鼠L1210白血病细胞作为研究对象,测定该偶联物的体外抗肿瘤活性,结果表明,偶联物的抗肿瘤活性与甲氨蝶呤基本接近。与文献相比,该甲氨蝶呤的聚乙二醇修饰方法具有快捷、方便的特点。