精子发生障碍患者Y染色体微缺失分子诊断

目的:通过建立的Y染色体微缺失筛查方法了解生精障碍与Y染色体微缺失的关系。方法:同时采用多重PCR-凝胶电泳技术和多重PCR-液态芯片技术对原发性无精症、少精症患者和精液常规正常男性对照进行Y染色体微缺失筛查。结果:42例无精症、少精症患者中,6例有AZF区域STS位点或基因的缺失,总缺失率为14.3%,AZFc/DAZ区发生微缺失的频率较高,AZFa区发生微缺失的频率较低。结论:本研究建立的Y染色体微缺失多重PCR-MASA检测系统具有相对高通量、简便、快速、特异性强、敏感性高等特点;染色体微缺失是导致男性精子发生障碍的重要原因之一,AZF的候选基因在精子发生过程中可能起重要作用。

山溪鲵的骨骼系统

用硬骨-软骨双色染色技术对山溪鲵Batrachuperus pinchonii骨骼系统做了较全面观察,对各骨块的形状、位置及与邻近骨块的关系作了较详细描述,并与小鲵科中其它5个种骨骼特征作了比较。

人乳头瘤病毒6和11亚型E6、E7基因的克隆及序列分析

[目的]了解四川地区引起尖锐湿疣的HPV-6和11亚型早期基因E6、E7的结构和变异特点。[方法]采用PCR和T-A克隆技术从尖锐湿疣样本中扩增、克隆HPV-6/11E6、E7基因,最后对其测序并与原型进行序列比对。[结果]成功扩增和克隆了HPV-6/11E6、E7基因,其序列与原型序列相比,存在多处核苷酸的突变,并且有几处核苷酸的突变引发了氨基酸序列的突变,其中有3处引起氨基酸的突变为所有样本共有:HPV-6E6:252G→C(谷氨酰胺→组氨酸);HPV-6E7:685A→T(酪氨酸→苯丙氨酸);HPV11E7:662G→T(丙氨酸→丝氨酸)。[结论]四川地区HPV-6和11亚型E6、E7基因均存在一定程度上的变异,大部分的突变为同义突变,E6基因较E7基因更易突变。

林麝IL-2细胞因子的克隆、表达和纯化

用林麝(Moschus berezovskii)外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)提取总RNA,RT-PCR扩增IL-2(interleukin-2,IL-2),连接pMD18-T载体后转化大肠杆菌,筛选阳性克隆并测序。然后将IL-2成熟肽编码序列连接到pGEX4T-1原核表达载体进行表达、纯化。结果表明林麝IL-2开放阅读框全长468 bp,编码155个氨基酸。序列分析表明,林麝IL-2及其受体结合域与水牛的高度保守,而在翻译后修饰的预测活性位点上和水牛的有所不同。IPTG诱导林麝IL-2蛋白表达,得到约41 kD的目标带;优化表达后,林麝IL-2表达含量达到了总蛋白量的25%。经GST亲和柱分离纯化,得到了约41 kD的单一目标带,这说明林麝IL-2基因的原核表达成功。