重要资源植物诸葛菜属的研究进展

诸葛菜属是一种具有广泛应用价值的资源植物,本文主要综述了该属植物的系统位置、属内种及变种的分类学地位、组织培养及属间杂交、抗逆性、营养价值和驯化栽培等多个方面的研究进展。基于诸葛菜属植物已有的研究基础及成果,并针对该属中存在的关键科学问题,如物种形成及其界定、适应性机理及优良基因资源的发掘、杂交育种与新种质创建等,对可能采用的研究方法提出展望。其研究思路和研究方案为将诸葛菜作为研究植物进化、驯化以及如何高效利用野生资源植物的一个重要模式代表种提供了依据。

葡萄A病毒四川分离物的外壳蛋白基因克隆与原核表达

葡萄A病毒（Grapevine virus A，GVA）是葡萄病毒属（Vitivirus）的典型种，在世界葡萄产区广泛分布。采集10株‘藤稔’葡萄成熟枝条，使用6种葡萄病毒ELISA试剂盒检测发现，10个样本中有6个感染4种不同的葡萄病毒。以GVA的ELISA阳性植株为材料进行RT—PCR扩增，首次获得了GVA四川分离物SL10的完整外壳蛋白基因（CP），该基因全长597bp。将其与GenBank收录的15个GVA分离物的CP序列进行比对和构建系统进化树，把不同地理起源的GVA分离物分成两个变异组，其中Ⅰ组包括3个分离物（与Ⅱ组的其他分离物只有75．9％～80．1％的序列同一性）；其余的13个分离物组成Ⅱ组（组内分离物具有84．4％～99．5％的序列同一性）。构建了GVACP的原核表达质粒PET-30-GVAcp并转化BL21菌株，经IPTG诱导，目的基因得到了大量表达。

几种常用中草药抗氧化活性研究(英文)

当归、黄芪、银杏叶、益母草、野甘草是中国传统中药材,几千年来一直为中国人民所认可,在中国和世界都具有重要的科研和药用价值。本研究采用HO.清除及对肝微粒体和亚油酸脂质过氧化抑制的方法,测定五种草药精油和水煮提取物的抗氧化活性;采用Folin-Ciocalteu试剂法测定它们的总酚含量;用肝细胞体外培养法测定它们的细胞毒性并对它们的作用机制进行分析。结果发现五种草药提取物都具有一定的抗氧化活性,尤其是益母草、野甘草、银杏叶的水煮提取物活性较强,其抗氧化活性与总酚含量存在较好的线形关系。此外,本论文还为研究这些草药的一些抗病机制提供参考依据。

高温α-淀粉酶产生菌的筛选及酶学性质研究

从酒厂高温曲中筛选到一株产高温α-淀粉酶的野生菌株,经初步鉴定为链霉菌,命名为Streptomyces sp.1109。在45℃条件下,该菌株固体发酵产酶活力达到169.13 u/g。通过酶学性质研究,该酶反应最适温度为85℃,最适pH为6.5,具有较高的热稳定性。

大麦幼苗活性氧与其他叶绿体信号的关系

以普通大麦幼苗为材料,用除草剂、光合电子传递链抑制剂、H2O2、活性氧清除剂、强光或叶绿素合成前体物质浸根处理,通过过氧化氢和超氧阴离子染色和rbcS基因Northern杂交检测,研究了活性氧在大麦叶绿体信号传导中的作用.结果显示:除草剂20μmol/L norflurazon(NF)处理明显造成大麦幼苗活性氧染色加重和rbcS基因受抑制,同时用活性氧的清除剂处理可以部分逆转rbcS基因的下调;光合电子传递链的抑制剂也明显造成活性氧染色加重和rbcS基因受抑制,同时用活性氧的清除剂处理可以完全逆转rbcS基因的下调;光合电子传递链抑制剂对糖饥饿诱导的rbcS基因上调有抑制作用,同时用活性氧的清除剂处理可以完全逆转此抑制作用;高浓度糖或叶绿体蛋白质合成抑制剂都不能引发活性氧,但可以显著抑制核编码光合基因.可见,除草剂NF引发的信号是镁原卟啉信号与活性氧信号的叠加,光合电子传递链的氧化还原状态改变引发的信号绝大部分可以归结为活性氧信号,而高浓度糖和叶绿体蛋白质合成引发的叶绿体信号与活性氧没有直接联系.

牦牛白细胞介素2(IL2)基因cDNA的分子克隆和表达研究(英文)

目的克隆牦牛免疫基因并研究其免疫特性。方法以伴刀豆球蛋白A(Con A)激活的体外培养的牦牛血液淋巴细胞,提取激活淋巴细胞的总RNA,用RT-PCR方法,从中克隆出白细胞介素2 cDNA,连接到T载体上测序,并亚克隆到pGEX4T-1表达质粒,在大肠杆菌进行了重组表达,纯化融合表达YIL2产物,MTT比色法测定其体外刺激牦牛血液淋巴母细胞增殖的免疫活性。结果YIL2 cDNA序列分析显示:在其编码区442位点的一个碱基发生突变(由C突变为T),从而导致终止密码子(TAA)出现,使YIL2蛋白表达提前终止,与其它牛IL2蛋白相比少了8个氨基酸。MTT比色法测定结果表明重组牦牛IL2蛋白体外能显著促进牦牛淋巴母细胞的增殖。结论本实验成功克隆了牦牛IL2基因,其原核表达产物具有显著的免疫活性,这为研制新型免疫增强剂来提高牦牛对各种疾病的抵抗力,增强牦牛疫苗的免疫保护率奠定了基础。

miR-330调控TAp73α介导的结直肠癌细胞HCT116对顺铂的敏感性

microRNA调控靶向基因的表达,影响其细胞周期进程、凋亡等过程的进行.采用双荧光素酶报告基因的方法,发现miR-330可以降低结合P73-3′UTR的荧光活性,同时在HCT116细胞中,慢病毒过表达miR-330可以抑制内源性TAp73蛋白的表达,在此基础上,用cisplatin处理细胞后,过表达miR-330的细胞加速凋亡,而这一过程在恢复TAp73的表达后,细胞凋亡活动又被减弱.另一方面,包装慢病毒shRNA-P73感染HCT116细胞所引起的生物学效应与miR-330一致.而且这种作用不依赖于p53.所以,在结肠癌细胞HCT116中,过表达miR-330可下调P73的表达并增强细胞对治疗药物顺铂的敏感性,为治疗顺铂抗性的肿瘤细胞提供了一条新途径.

Pin1的细胞定位调控Rb蛋白的磷酸化状态

为了研究Pin1和Rb蛋白的细胞定位、Pin1调控Rb磷酸化的相关机制,本研究构建了慢病毒载体pLVX-Flag-HA-Pin1和Plko.1-shRNA,包装病毒感染人非小细胞肺癌(H1299),免疫印迹检测Pin1蛋白表达水平,采用免疫荧光染色、免疫组化技术研究蛋白的定位.结果表明,沉默Pin1可降低Rb的磷酸化并抑制细胞的增殖;培养的肿瘤细胞和肿瘤组织中,Pin1可定位到细胞质中,而胞质定位的Pin1也可增加Rb的磷酸化.

葡萄卷叶伴随3型病毒和葡萄A病毒的多重检测及其系统进化分析

葡萄卷叶伴随3型病毒(Grapevine leafroll associated virus-3,GLRaV-3)和葡萄A病毒(Grapevine virus A,GVA)常常复合侵染部分主栽欧美杂交葡萄品种。以半定量RT-PCR与qRT-PCR方法研究了‘希姆劳特’葡萄(Vitis vinifera L.×V.labrusca L.‘Himrod’)中不同组织内病毒的相对积累量,结果表明叶脉和韧皮部内的病毒相对积累量显著高于其他组织。以成熟枝条韧皮部组织的cDNA为模板,优化了RT-PCR多重扩增体系,可以同时扩增待测样本中两种病毒的目标基因。从一株复合感染GLRaV-3与GVA的‘藤稔’葡萄(Vitis vinifera L.×V.labrusca L.‘Fujiminori’)中,分别克隆了GLRaV-3外壳蛋白(coat protein,CP)基因全长序列和GVA部分基因组区域序列,后者包括CP基因的部分序列与病毒RNA沉默抑制子(viral suppressor of RNA silencing,VSR)基因全长序列。病毒核酸同源性分析与系统进化研究表明,不同GLRaV-3分离物的CP高度保守;而‘藤稔’葡萄的GVA分离物包含多种变异株,具有准种病毒的特点。

大量元素缺乏对小麦光合、呼吸作用和生理特性的影响

对小麦幼苗分别进行缺氮、缺磷和缺钾处理10～30d,研究大量元素缺乏对小麦叶片呼吸作用、光合活性和生理参数的影响。大量元素缺乏导致小麦叶片H_2O_2、丙二醛含量上升,含水量下降,抗氰呼吸被明显诱导。缺氮和缺磷还导致净光合速率(Pn)、PSⅡ光合电子传递量子效率(Φ_(PSⅡ))、PSⅡ原初光化学效率(Fv/Fm)、光适应下PSⅡ最大光化学效率(Fv′/Fm′)和非光化学猝灭系数(NPQ)下降。缺钾只导致NPQ下降,其它光合参数变化不大。通过对以上生理变化的分析,可以看出大量元素缺乏对植物体造成了显著的影响,但损伤机理各不相同。缺氮主要影响蛋白质合成,缺磷影响能量代谢,缺钾则主要影响膜脂透性,其中缺钾的影响在30d内相对较小。同时对大量元素缺乏下小麦叶片光合和呼吸作用变化的原因进行了探讨。