硫模块启动子对提高L-甲硫氨酸的生物合成的影响及发酵培养条件的优化

研究生物合成硫模块对L-甲硫氨酸产量的影响并优化了发酵条件。利用实验室构建的重组菌株,用trc启动子替换基因组上cysK的组成型启动子,在质粒pA*H上插入glpE和nrdH基因;通过构建PG3启动子文库,获得转录强度最高的p32启动子,进一步优化硫模块,最后通过对培养基的优化提高了硫代硫酸盐的供给,从而提高L-甲硫氨酸产量。结果表明:使用构建得到的E.coli W3110 JAHFEBL trc-cysK/pA*H-p32-nrdH-glpE菌株,发酵48 h后L-甲硫氨酸摇瓶水平产量达到1.3 g/L,较对照组提升了41.5%;通过对培养基的进一步优化,L-甲硫氨酸产量最终达到2.3 g/L,相比未优化的发酵水平提高了77.0%,且该研究为其他含硫氨基酸的生物合成提供了基础。

产S-腺苷蛋氨酸酵母菌的诱变选育

以选育产S-腺苷蛋氨酸的高产酿酒酵母菌株为目标,利用常温常压等离子体和137 Csγ-射线对菌株进行诱变。通过5轮常温常压等离子体诱变和4轮γ-射线诱变,结合乙硫氨酸、制霉菌素抗性筛选,获得突变株AC-10,摇瓶发酵48 h,其S-腺苷蛋氨酸产量达到1.15 g/L,与出发菌株相比提高了130.0%。摇瓶发酵最适条件为30℃、初始pH 5.5。经5 L发酵罐分批补料发酵68 h,S-腺苷蛋氨酸产量达到5.62 g/L。