全面性癫伴热性惊厥附加症6家系SCN1B基因突变筛查

目的探讨全面性癫伴热性惊厥附加症家系SCN1B基因突变情况。方法共收集GEFS+家系6个,采集40份外周血,并取健康对照组外周血50份。提取基因组DNA,设计7对引物,进行聚合酶链反应(PCR)扩增,琼脂糖凝胶电泳,选取符合条件的PCR产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,进行单链构象多态性分析,对个别PCR产物进行双向测序。结果6个先证者和50名健康对照进行SCN1B的5对外显子筛选时,均未发现异常带出现。6个先证者的PCR产物测序结果与基因组序列相比对,也未发现碱基改变。结论全面性癫伴热性惊厥附加症是一种复杂综合征,本组家系中未发现SCN1B基因突变,GEFS+具有遗传异质性。

遗传基因组学方法对Myoc基因调控网络的研究

背景原发性开角型青光跟（POAG）和高度近视的发病机制复杂，可能有较多致病基因及致病相关基因参与，构建基因调控网络有助于揭示发病机制。目的采用遗传基因组学方法研究Myoc基因的调控网络，探索其在POAG中的可能作用机制。方法Affymetrix基因芯片用于检测确定68个品系的BXD重组近交系（BXDRI）小鼠及其亲本C57BL／6J（B6）小鼠和DBA／2J（D2）小鼠、F1代小鼠眼组织中Myoc基因的差异表达。借助基因表达的数量性状分析（eQTL）方法，结合GeneNetwork网站（WWW．genenetwork．org）的在线分析工具，研究基因的作用特征，进而构建Myoc基因调控网络。结果Myoc基因在BXDRI小鼠眼组织中平均表达水平为10．83，不同品系小鼠表达量存在差异，其中B6小鼠表达量最高，达到11．43，BXD55小鼠表达量最低，为8．39。基因表达的eQTL分析结果显示，Myoc基因具有一个显著性QTL，其似然比统计量（LRS）达到21．78。该QTL位于2号染色体，与位于1号染色体的Myoc基因在不同的染色体，说明Myoc是反式调节基因。生物信息学分析方法进一步筛选结果提示，Olfml2a是Mroc的上游调控游候选基因。基于和Myoc高度相关基因的基因网络得以构建。结论本研究探索了Myoc的基因调控网络，显示遗传基因组学对复合性疾病发病机制的探索具有重要的指导作用。

GABRG2在全面性癫痫伴热性惊厥附加症中的研究

目的研究全面性癫痫伴热性惊厥附加症患者的GABRG2基因突变。方法对10个家系先症者的GABRG2基因进行体外扩增及测序分析。结果未发现相关突变。结论GABRG2基因突变在我国北方汉族人并不普遍。

全面性癫癎伴热性惊厥附加症家系GABRB2基因测序研究

目的对全面性癫伴热性惊厥附加症(GEFS+)侯选基因GABRB2进行测序研究。方法设计GABRB2外显子-内含子交界处内含子引物,采用PCR直接测序法,对一GEFS+家系GABRB2编码区全部11个外显子进行测序分析。结果患儿GABRB2基因外显子2,mRNA第133个碱基发现一新的C/G多态性。结论该家系未发现GABRB2基因编码区的突变;所显示的mRNA的单个碱基多态性对以后其他癫家系的连锁分析及GABRB2 mRNA、基因功能研究均有重要意义。

FLC-ELISA用于多发性骨髓瘤早期诊断的临床评价

目的对酶联免疫吸附法测定免疫球蛋白κ和λ自由轻链(FLC-ELISA)用于多发性骨髓瘤早期诊断进行临床评价。方法应用一种新型酶联免疫吸附法来测定多发性骨髓瘤病人血清及尿液中的免疫球蛋白κ和λ自由轻链并与免疫电泳法和免疫比浊光散射法测定的结果进行比较。结果 40例多发性骨髓瘤病人 FLC-ELISA总检出率为100％,而免疫固定电泳法和免疫比浊光散射法的总检出率则分别为57．5％和85．5％。同时,病人样品的测试还表明酶联免疫吸附法可以将多发性骨髓瘤的诊断提前两年以上。结论用酶联免疫吸附法来测定免疫球蛋白κ和λ自由轻链,具有较高的灵敏度,精确性和可重复性,适用于临床多发性骨髓瘤病的早期检测,同时对此疾病进程的跟踪及治疗效果的评价也具有重要意义。

经腹机器人辅助腹腔镜肾部分切除术治疗T2期肾肿瘤的国际多中心临床研究

目的通过国际多中心研究探讨临床T2期肾肿瘤行经腹机器人辅助腹腔镜肾部分切除术的安全性及有效性。方法回顾性分析2012年1月至2017年12月国际19家泌尿中心378例临床T2期肾肿瘤行经腹机器人肾部分切除术和经腹机器人根治性肾切除术患者的临床资料。根据手术方式不同，分为部分切除组和根治组。部分切除组159例，男118例，女41例；年龄（59.3±13.2）岁，体重指数（28.7±5.4） kg/m^2，术前GFR （77.3±22.1）ml/min；肿瘤位于左侧72例，右侧87例；肿瘤直径（83±16）mm；R.E.N.A.L.评分（8.6±2.2）分。根治组219例，男156例，女63例；年龄（62.0±12.9）岁，体重指数（28.7±6.1） kg/m^2，术前GFR （71.4±20.3）ml/min；肿瘤位于左侧112例，右侧105例，双侧2例；肿瘤直径（92±25）mm；R.E.N.A.L.评分（9.7±1.5）分。两组患者性别、体重指数、肿瘤位置的差异均无统计学意义（P〉0.05）。部分切除组患者年龄、肿瘤直径、R.E.N.A.L.评分均低于根治组（P〈0.05），术前GFR优于根治组（P=0.012）。比较两组围手术期资料、肿瘤病理类型、随访时间、复发时间及术后GFR等。结果378例手术均顺利完成。部分切除组手术时间中位值150 min（65-353 min），短于根治组[180 min（85-361 min），P〈0.001]，术中出血量中位值150 ml（40-3 000 ml），多于根治组[100 ml （10-1 100 ml），P〈0.001]。术中并发症发生率部分切除组为5.7%（9/159），根治组为3.2%（7/219），两组差异无统计学意义（P=0.240）。部分切除组术后并发症发生率高于根治组[19.5%（31/159）与10.5%（23/219），P=0.014]，但≥3级并发症发生率的差异无统计学意义[4.4%（7/159）与2.3%（5/219），P=0.246]。部分切除组无复发生存率高于根治组[91.4%（117/128）与81.9%（167/204），P=0.013]。部分切除组术后GFR降低值16.9 ml/min（10.4-84.7 ml/min）明显少于根治组29.0 ml/min（14.0-54.0 ml/min），肾部分切除术更利于术后肾功能的保护（P〈0.001）。结论临床T2期肾肿瘤行机器人肾部分切除术可获得有效的肿瘤控制率，同时可以更好地保护肾功能，可作为临床T2期肾肿瘤有效的手术方式。

基因表达数量性状定位的研究进展

近年来,随着人类和一系列模式生物全基因组测序工作的完成,阐明基因互作、调控网络及代谢途径的生物学功能,成为后基因组时代生物学研究的重点及热点。最近将数量性状定位(quantitative trait loci,QTL)和基因表达分析联合运用,产生了遗传基因组学或基因表达数量性状定位(expression QTL;eQTL)。本文简要地回顾了基因表达遗传变异的本质及eQTL分析的基本原理。在此基础上,结合我们当前的研究工作,重点介绍了eQTL分析方法在候选基因挖掘和基因调控网络构建中的运用,并结合单核苷酸多态性(SNP)对基因表达的影响等问题,讨论eQTL在实际研究分析中面临的困难,并探讨该领域的挑战和发展方向。

Gpnmb基因在BXD重组近交系小鼠眼组织的表达差异和基因调控网络分析

目的研究色素播散综合征(PDS)和色素性青光眼(PG)致病基因糖蛋白神经调节肽B相关基因(Gpnmb)在BXD重组近交系(BXD RI)小鼠眼组织的表达差异及其基因调控网络。方法采用Affymetrix基因芯片检测确定68个品系的BXD RI小鼠眼组织中Gpnmb基因的表达差异。采用基因表达数量性状基因座(eQTL)分析方法,结合GeneNetwork网站上的在线分析工具,研究差异表达的特征,进而构建Gpnmb基因调控网络。结果 Gpnmb在BXD RI眼组织中平均表达水平为10.92,不同品系小鼠表达量存在差异。Gpnmb基因为顺式作用的eQTL,End3基因是其下游候选基因。基于和Gpnmb高度相关基因的基因网络得以构建。结论构建Gpnmb基因调控网络,为PDS和PG发病机制的深入研究提供线索。

单纯腭裂并全面性癫伴热性惊厥附加症家系的基因定位及GABRD基因测序研究

目的对单纯腭裂并全面性癫伴热性惊厥附加症家系进行基因定位,并对候选基因GABRD进行测序研究。方法对家系进行全基因组扫描两点间连锁分析,设计GABRD基因9对外显子-内含子交界处内含子引物,PCR扩增患者及健康对照GABRD基因组序列,测序采用Sanger双脱氧链终止法,PCR产物直接测序,对比分析患者的突变序列及健康对照序列。结果两点连锁分析在1p36区域最大LOD值为1.68。GABRD基因测序显示第4外显子患者的序列分别为T/C和T/T,健康对照的序列分别为T/T和A/C。编码序列分析GGT、GGC及GGA均为甘氨酸。患者GABRD基因mRNA碱基序列为C425T多态性。GABRD第7外显子患者的序列分别为C/T和T/T,健康对照分别为T/T和C/C;异常序列位于mRNA第911碱基处,编码分析AGT及AGC均编码丝氨酸。患者的碱基序列出现了T911C多态性。结论单纯腭裂并全面性癫伴热性惊厥附加症致病基因在1p36区域取得一定的连锁关系,在该家系未发现突变基因;所发现的C425T和T911C单个碱基多态性为其他腭裂及癫家系的连锁分析、关联分析及分子遗传学研究提供了依据。