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题名人TSPAN12蛋白大胞外片段的可溶表达和纯化
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作者
串俊兰
谢天
王刚刚
杨正林
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机构
电子科技大学医学院人类疾病基因研究四川省重点实验室
电子科技大学医学院个体化药物治疗四川省重点实验室
中国科学院成都生物研究所环境微生物四川省重点实验室
中国科学院成都生物研究所环境生物四川省重点实验室
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出处
《中华眼视光学与视觉科学杂志》
CAS
CSCD
2019年第12期881-887,共7页
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基金
国家自然科学基金(81430008,81790643)
电子科技大学附属医院四川省人民医院青年人才基金(2016QN01)。
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文摘
目的:构建人源四次跨膜超家族蛋白12大胞外片段(TSPAN12-LEL)的原核表达质粒,诱导表达和纯化后获得可溶的重组蛋白。方法:实验研究。首先将目的基因克隆至pMal-c2x载体上,再经PCR扩增、酶切、连接,将带麦芽糖结合蛋白(MBP)标签的融合蛋白编码序列克隆至pETDuet-1载体的第一个多克隆位点,同时将大肠杆菌的DsbC基因克隆至pETDuet-1载体的第2个多克隆位点,与重组蛋白共表达,促进二硫键的正确形成。将重组质粒转化至OrigamiB(DE3)菌株中,用异丙基-β-D硫代半乳糖苷诱导表达,经交联直链淀粉树脂亲和层析和阴离子交换层析纯化重组蛋白。结果:成功构建重组表达质粒pETDuet-1-MBP-TSPAN12 LEL-DsbC,诱导表达后在蛋白上清中得到大量带MBP标签的融合蛋白(MBP-TSPAN12 LEL),经SDS-PAGE检测该融合蛋白分子量约为60 kD,与理论大小相符,经亲和层析和阴离子交换层析后能获得大量、高纯度可溶的重组蛋白。结论:经过优化,与DsbC蛋白共表达时,带MBP标签的TSPAN12蛋白大胞外片段可以实现在大肠杆菌中可溶表达。
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关键词
人源四次跨膜超家族蛋白12
麦芽糖结合蛋白
原核表达
可溶蛋白
纯化
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Keywords
TSPAN12
maltose binding protein
prokaryotic expression
soluble protein
purification
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分类号
R73
[医药卫生—肿瘤]
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