蛋白酶体抑制剂Oprozomib对顺铂耐药卵巢癌细胞的作用及机制研究

目的探讨蛋白酶体抑制剂Oprozomib(OZ)对顺铂(DDP)耐药卵巢癌细胞的作用,并初步揭示其机制。方法体外培养DDP耐药卵巢癌细胞SKOV3/DDP、A2780/DDP,传代后选取对数生长期细胞进行实验。研究OZ对耐药卵巢癌细胞活力的影响时,OZ浓度设为0、3、9、27、81、243、729、2181、6561 nmol/L,与细胞共培养;研究DDP对耐药卵巢癌细胞活力的影响时,DDP浓度设为0、3、9、27、81、243、729、2181、6561 nmol/L,另加入125 nmol/L OZ,采用CCK-8法检测细胞活力;采用流式细胞术检测DDP+OZ联用时的细胞凋亡情况。将实验分为对照组和OZ组,检测OZ对蛋白酶体糜蛋白酶(CT-L)活性和谷胱甘肽(GSH)合成的影响;采用Western blotting检测胞内谷胱甘肽合成酶(GSS)蛋白的表达。将实验分为对照组、DDP组、OZ组、DDP+OZ、DDP+OZ+GSH组和DDP+OZ+Tempol组,检测胞内活性氧簇(ROS)水平;采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果OZ对SKOV3/DDP、A2780/DDP细胞的IC50分别为140、350 nmol/L;与OZ联用时,DDP在两株细胞中的IC50分别为154、232 nmol/L。DDP+OZ联用时,两株细胞凋亡率均明显升高(P<0.01)。OZ可抑制蛋白酶体CT-L活性,并呈剂量依赖性。OZ可抑制胞内GSH合成及GSS蛋白表达(P<0.01),GSH水平降低导致ROS清除受阻,ROS清除剂Tempol可明显降低胞内ROS水平(P<0.05,P<0.01)。Tempol对DDP+OZ诱导的细胞凋亡具有明显抑制作用(P<0.01)。结论OZ通过抑制GSH生成阻碍胞内ROS清除,进而增强SKOV3/DDP和A2780/DDP细胞对DDP的敏感性。

白细胞介素-32及肝功能指标对CHB患者病情进展的诊断价值分析

目的探讨不同病程慢性乙肝(CHB)患者血清白细胞介素-32(IL-32)、总胆红素(TBIL)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)及HBV DNA载量中的差异及其相关性。方法选取2011年1月至2013年5月收治的105例慢性CHB患者(轻度组32例、中度组42例、重度组31例)为研究对象,另选取100例健康体检者为对照组,两组血清IL-32采用酶联免疫法测定,TBIL、ALT、AST采用采用日立7600-020全自动生化分析仪测定,HBV DNA载量采用荧光定量PCR测定。结果与对照组相比,CHB组血清IL-32、TBIL、ALT、AST及HBV DNA载量显著提高,差异有统计学差异(P<0.05)。与轻、中度组相比,重度HCB组血清IL-32、TBIL、ALT、AST及HBV DNA载量显著提高,差异有统计学意义(P<0.05)。HBV DNA高载量组(>105拷贝数/ml)血清IL-32、TBIL、ALT、AST水平显著高于HBVDNA低载量组(<105拷贝数/ml),差异有统计学意义(P<0.05)。结论血清IL-32可能介导CHB炎症反应,参与CHB病情的发生及进展,血清IL-32及肝功能指标可作为CHB患者病情进展的预测指标。

IL-18和 IL-33在不同发病期哮喘患者中的应用价值

【目的】探讨白细胞介素-18（IL-18）、IL-33在支气管哮喘（简称哮喘）中表达及意义。【方法】选取125例哮喘患者（哮喘组），根据患者病情将其分为哮喘缓解48例（缓解组），急性发作期77例（急性期组），其中轻度组32例，中度组25例，重度组20例，另选取正常体检者48例（对照组），采用免疫吸附法测定各组IL-18、IL-33水平，同时观察第一秒用力呼气容积（FEV1）占预计值的百分比（FEV1％）及嗜酸性细胞（EOS）的变化。【结果】与对照组相比，哮喘组 IL-18，IL-33，EOS 水平显著升高，而 FEV1％水平显著下降，差异有统计学意义（ P ＜0．05）；与缓解组相比，急性期组IL-18，IL-33，EOS水平显著升高，而 FEV1％水平显著下降，差异有统计学意义（ P ＜0．05）；与轻、中度哮喘组相比，重度组患者 IL-18，IL-33，EOS水平较高，而 FEV1％水平较低，差异有统计学意义（ P ＜0．05）。急性期各组患者治疗后IL-18，IL-33，EOS水平显著低于治疗前，而FEV1％，高于治疗前，差异有统计学意义（ P ＜0．05）。【结论】IL-18、IL-33在急性哮喘发作过程中起到促炎作用，加强气道反应；对急性期患者应用激素治疗能有效抑制炎症，控制气道反应，改善患者预后。

脂肪肝患者超声分度与生化指标的相关性分析

目的分析超声诊断脂肪肝的分度与多种生化指标的相关性,为该疾病的临床治疗提供参考。方法回顾性分析桂林电子科技大学医院2018年11月至2020年1月经超声诊断的75例脂肪肝患者临床资料,根据其超声分度分为轻、中、重度组,每组25例。比较不同程度脂肪肝患者生化指标阳性检出率与生化指标水平,分析生化指标与患者脂肪肝严重程度的相关性。结果重度脂肪肝患者丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)指标阳性检出率显著高于轻、中度脂肪肝患者(均P<0.05);而3组谷草转氨酶(AST)、空腹血糖(FPG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)指标阳性检出率比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);重度脂肪肝患者ALT、AST、TC、TG、LDL-C、FPG水平显著高于轻、中度脂肪肝患者;HDL-C显著低于轻、中度脂肪肝患者(均P<0.05);ALT、AST、TC、TG、LDL-C、FPG与患者疾病的严重程度呈正相关(r=0.816、0.808、0.831、0.826、0.794、0.813,均P<0.05),HDL-C与患者疾病严重程度呈负相关(r=-0.545,P<0.05)。结论经过对脂肪肝患者生化指标的检测,ALT、AST、TC、TG、LDL-C、FPG与患者疾病严重程度呈正相关,HDL-C与患者疾病严重程度呈负相关,因此可通过检测生化指标辅助判定患者的病情,为后续治疗提供有效支持。

沉默GTSE1基因通过p53通路诱导肝癌细胞凋亡

目的:验证G2/S期应答相关蛋白1(G2 and S phase-expressed protein 1,GTSE1)在原发性肝癌组织及细胞株中高表达,并探讨其表达下调对肝癌细胞凋亡的影响。方法:采用内置R程序对GEO(Gene Expression Omnibus)数据库中4项原发性肝癌临床研究的基因表达矩阵数据进行分析,筛选肝癌与癌旁组织差异表达基因。采用蛋白质印迹法验证3例肝癌组织和3株肝癌细胞中GTSE1蛋白表达水平。向肝癌Hep-G2和Bel-7402细胞中分别转染GTSE1 siRNA后,采用CCK-8和FCM法分别检测GTSE1表达下调对肝癌细胞增殖、凋亡及5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)敏感性的影响,进一步采用蛋白质印迹法检测p53含量及其亚细胞定位,以及Bcl-2家族成员的表达变化。结果:4项研究中原发性肝癌组织表达水平均上调和下调的基因分别为51和146个。其中,上调基因产物GTSE1蛋白在3例临床肝癌组织标本和3株肝癌细胞Hep-G2、Bel-7402和SMMC-7721中均得到进一步验证(P值均<0.001)。siRNA转染后,肝癌Hep-G2和Bel-7402细胞中GTSE1基因沉默效率>70%。与对照组相比,GTSE1表达下调后肝癌Hep-G2和Bel-7402细胞增殖被明显抑制,并随着时间延长,抑制作用逐渐增强(P值均<0.05);GTSE1表达下调后肝癌Hep-G2和Bel-7402细胞周期被阻滞在G1期,同时细胞凋亡率明显升高,且细胞对5-FU的敏感性明显增强(P值均<0.01)。GTSE1表达下调后的肝癌Hep-G2和Bel-7402细胞中总p53及磷酸化P53表达水平均明显上调(P值均<0.05),且细胞核内p53水平升高(P值均<0.01);Bcl-2家族促凋亡成员Bax和Bak表达水平均上调,而抗凋亡成员Bcl-2表达水平下调(P值均<0.05)。结论:下调肝癌中GTSE1蛋白表达能通过活化p53通路促进细胞凋亡,并增加肝癌细胞对化疗药物的敏感性。