婴幼儿配方乳粉及婴幼儿米粉中的蜡样芽胞杆菌流行情况、耐药性及分子特征研究

目的 了解流通环节市售婴幼儿配方乳粉和婴幼儿米粉中的蜡样芽胞杆菌流行情况、抗生素耐药性和毒力基因等分子特征。方法 采用GB4789.14—2014《食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验》对样品中的蜡样芽胞杆菌进行检测与生化鉴定。进一步通过抗生素敏感实验和全基因组测序对11株代表性分离株进行研究,获得耐药表型及耐药、毒力基因等分子特征信息。结果 婴幼儿配方乳粉和婴幼儿米粉中蜡样芽胞杆菌的检出率分别为11.97%(56/468)和20.74%(28/135)。11株代表性蜡样芽胞杆菌均为多重耐药菌株,全基因组测序结果发现11株分离株共携带8个耐药基因和14个毒力基因,其中主要携带磷霉素、β-内酰胺类抗生素抗性基因,以及肠毒素基因(hbl和nhe),另发现1株携带ces基因簇蜡样芽胞杆菌菌株。多位点序列分型表明,11株分离株具有遗传多样性,分属10个ST型。结论 婴幼儿配方乳粉和婴幼儿米粉中的蜡样芽胞杆菌检出率较低,但代表菌株的耐药谱和遗传特征具有多样性,应进一步加强监测及采取有效措施进行控制,以保障相关食品的安全性。

光谱检测技术在禽蛋品质评价中的应用研究进展

禽蛋营养丰富,是居民饮食结构中重要的组成部分。禽蛋品质的优劣影响其产品功能特性、消费者的购买意愿,因此实现禽蛋品质精准检测十分重要。传统的禽蛋品质检测方法存在样品损坏、耗时等问题,而无损检测技术可以在不破坏禽蛋完整性的前提下提供准确、快速的分析结果。无损检测技术中最常用的是光谱检测技术,光谱分析作为一种成熟的检测方法,是建立禽蛋蛋品质检测系统的有效工具。本文概述了禽蛋品质的传统检测方法的优缺点,并系统阐述了光谱检测技术在禽蛋品质分析上的应用,包括可见-近红外光谱、拉曼光谱、高光谱成像、脉冲红外热成像及介电光谱。同时,本文提出了光谱检测技术在禽蛋品质分析中存在的问题,如光谱信息没有选择性、现有分析模型难以系统化等。未来如何更好地结合光谱技术与科学分析技术,实现无损、快速、环保的禽蛋品质无损检测,是禽蛋品质无损检测研究中仍需解决的关键问题。本综述为禽蛋品质无损检测技术的快速发展提供理论参考,为满足禽蛋行业的实际生产需求指明方向。

对硫磷纳米抗体筛选及分子识别机制研究

对硫磷是一种广谱的有机磷酸酯类杀虫、杀螨剂,毒性极强,可对环境和人类健康造成严重危害。尽管我国已禁止使用对硫磷,但仍存在违禁使用现象,加强对其监测十分必要。纳米抗体是已知最小的与抗原结合的片段(15 kDa),来源于骆驼科动物体内重链抗体的可变区,具有稳定性强、灵敏度高、易表达、水溶性好等特性。本研究基于噬菌体展示技术构建了抗对硫磷纳米抗体库,其库容为2.41×10^7 cfu/mL,经抗原-抗体固相亲和筛选及噬菌体酶联免疫法(Phage ELISA)鉴定,获得5种抗对硫磷纳米抗体VHH1、VHH6、VHH13、VHH21和VHH24。以结合能力最强的VHH1为基础,采用同源建模和分子对接技术探讨VHH1与对硫磷分子的识别机制,发现VHH1与对硫磷存在氢键和疏水间分子作用力,关键氨基酸是Ser60、Lys104、Phe105、Gly106和Arg107。本研究为抗体的进化改造和半抗原的设计提供了新思路。

低温液浸渍温度对鸡胸肉品质的影响

为了更好地提高禽肉冻藏保鲜效果,以优质三黄鸡胸肉作为研究对象,分析不同温度低温液浸渍处理对鸡胸肉品质的影响。结果表明:鸡胸肉的冰点温度为-1.9℃,最大冰晶生成带的范围为-1.9^-3.1℃;采用低温液浸渍新鲜肉样时,-5℃浸渍液处理组的胸肉滴水损失率为4.36%,显著低于-10℃和-15℃浸渍液处理组(P<0.05),-5℃浸渍液处理组胸肉的硬度、弹性及咀嚼性等指标高于-10℃和-15℃浸渍液处理组。提示-5℃浸渍液对新鲜胸肉的保鲜效果显著优于-10℃和-15℃浸渍液。

不同品种蜂花粉总黄酮含量与自由基清除能力的相关性分析

为研究油菜、虞美人、柳树等3种蜂花粉的总黄酮提取物(total flavonoids of bee pollen, TFBP)的自由基清除能力,比较不同蜂花粉之间的抗氧化能力,并探究总黄酮含量与自由基清除能力之间的关系,进而筛选出具有理想抗氧化活性的蜂花粉品种,本研究采用超声醇提取大孔树脂纯化的方法提取3种蜂花粉的TFBP,同时采用分光光度法测定其中总黄酮的含量。以槲皮素作为阳性对照品,通过测定梯度稀释的各样品对DPPH,·OH,·O_2^-及ABTS+等4种自由基的清除率,评价各种蜂花粉TFBP的自由基清除能力,并对蜂花粉的总黄酮含量及各种自由基的清除活性进行相关性分析。结果表明:3种蜂花粉TFBP对DPPH自由基的清除能力排序为柳树>油菜>虞美人,对·OH自由基的清除能力排序为油菜>柳树>虞美人,对·O_2^-自由基的清除能力排序为油菜>柳树>虞美人,对ABTS+自由基的清除能力排序为油菜>虞美人>柳树。相关性分析结果显示,蜂花粉总黄酮含量与·OH、·O_2^-及ABTS+自由基的清除能力均有很强的相关性,但与DPPH自由基清除能力的相关性较弱。在3种蜂花粉中,油菜蜂花粉TFBP表现出较强的自由基清除活性,具有良好的抗氧化潜力,可作为开发效果理想的天然抗氧化剂的备选材料。另外,相关性分析指出,蜂花粉的自由基清除能力不仅仅与其总黄酮含量有关。

潮汕脆性肉丸的感官评定与质构评价相关性分析

目的:探索一种综合评价潮汕脆肉丸脆性品质的方法。方法:采用质构剖面法(texture profile analysis,TPA)和穿刺实验测定肉丸的质构特性,同时进行感官评定实验,并对感官和质构指标之间进行相关性分析。结果:TPA实验的硬度、咀嚼性与感官评定指标硬度、弹性、脆性、咀嚼性之间存在显著相关性(r=0.554~0.793,P<0.05),TPA实验的回复性与感官评定的脆性、组织状态之间存在显著相关性(r=0.556,0.625,P<0.05)。穿刺实验的破裂力与感官评定指标之间均存在显著相关性(r=0.595~0.709,P<0.05)。运用主成分分析从仪器质构指标数据中提取出2个最主要的独立成分,这2个主成分的方差贡献率累计达74.5%。结论:潮汕肉丸的脆性可以采用TPA实验的硬度、咀嚼性和穿刺破裂力的定量评价结合感官评定进行综合评价,为构建客观、精确、便捷的潮汕脆性肉丸感官性状评价体系奠定基础。

抗克百威单链抗体的可溶性表达、纯化与鉴定

在前期获得了抗克百威单链抗体基因的基础上,为进一步研究克百威单链抗体的性质,本文构建了两种抗克百威单链抗体可溶表达载体,p ET22b(+)-C-6His-CBF-sc Fv和p ET22b(+)-N-6His-CBF-sc Fv。比较His标签处于不同位置时,目的蛋白与Ni结合作用,发现His标签处于N端的目的蛋白与Ni结合作用比His标签处于C端时要强。对影响N-6His-CBF-sc Fv可溶性表达的条件进行优化,进而对其进行纯化。结果表明,当选用LB培养基,表达温度18℃,表达时间为16 h,IPTG浓度为1 mmol/L时可溶表达效果最好,可溶表达的目的蛋白量占总目的蛋白量从优化前的10%增加到50%。优化表达后的N-6His-CBF-sc Fv破壁上清经Ni Sepharose HP金属螯合亲和层析及阳离子交换层析两步纯化,纯化后纯度达90%。经ic ELISA鉴定,抗克百威单链抗体保持抗原结合活性,IC_(50)值为63.80 ng/m L。获得的抗克百威单链抗体可用于后续特性研究。

艾草对猪肉丸品质和抗氧化特性的影响

运用模糊数学感官评定法研究了添加0.25%~1%潮汕艾草对猪肉丸感官的影响,同时分析了其对猪肉丸质构特性、抗氧化能力的影响。结果表明:根据模糊数学模型判定,添加艾草组别中,有84%评价人员认为艾草添加量为0.75%时综合感官评分最佳(4.18分);当艾草添加量由0%提高至1%,肉丸的硬度、咀嚼性和破裂力先降低后升高且变化显著(P<0.05),L^(*)值和a^(*)值显著降低、b^(*)值显著升高(P<0.05);ABTS自由基清除率从28.37%显著提高至60.48%(P<0.05),总还原力从0.28显著提高至0.40(P<0.05);当艾草添加量提高至0.75%时,肉丸的DPPH自由基清除率从21.36%显著提高至90.49%(P<0.05);综上所述,艾草添加量为0.75%时,不仅能够改善肉丸的质构和感官品质,还能显著提高其抗氧化特性。本研究为艾草肉丸产品的开发提供了一定的理论依据。

基于3种载体蛋白的莱克多巴胺抗原的合成与检测

为制备高效莱克多巴胺(Ractopamine,RAC)抗体,将人工合成的RAC-琥珀酸酯半抗原与3种载体蛋白(BSA、OVA和KLH)偶联合成人工抗原,采用紫外光谱扫描、测定偶联比和ESI-MS进行鉴定;通过免疫小鼠获得抗血清,采用ELISA比较其效价,对3种人工抗原的免疫原性进行评定,结果显示3种抗血清效价为4000~32000,表明合成的3种人工抗原都具有免疫原性,其中以KLH为载体蛋白的抗原的免疫效果较好,可用于制备高效RAC抗体。

致晕方式对黄羽肉鸡品质的影响

以90日龄的黄羽肉鸡为研究对象,对比二氧化碳(CO_(2))致晕、电击致晕、不致晕(直接屠宰)3种处理方式对黄羽肉鸡品质的影响。结果表明:CO_(2)致晕组的胴体损伤最小,肌肉僵直进程缩短,沥血量增加,pH值下降速率较快,与其他2组均差异显著(P<0.05);宰后45 min CO_(2)致晕组的亮度值(L^(*))、红度值(a^(*))及黄度值(b^(*))显著低于其他2组(P<0.05);宰后24 h CO_(2)致晕组的L^(*)显著高于其他2组(P<0.05);宰后45 min CO_(2)致晕组的保水性、嫩度及肉质较好,与其他2组均差异显著(P<0.05);宰后24 h CO_(2)致晕组的保水性和肉质较差,与其他2组均差异显著(P<0.05);宰后24 h电击致晕组和直接屠宰组的鸡肉气味和肉质评分显著高于CO_(2)致晕组(P<0.05)。综合考虑,CO_(2)致晕不建议应用于黄羽肉鸡的屠宰,建议进一步优化电击致晕方式。

直接竞争ELISA法检测蜂蜜中氯霉素残留

建立蜂蜜中氯霉素直接竞争酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测方法。以抗氯霉素单克隆抗体为包被原,氯霉素-辣根过氧化物偶联物为标记物,3,3’,5,5’-四甲基联苯胺作显色底物,对其主要影响因素,如标准品稀释液、包被温度、包被抗体稀释倍数等6个因素进行优化,同时还对该方法的准确性和稳定性进行考察。结果表明:所建立的直接竞争ELISA标准曲线方程式为y=-17.425x+97.509,相关系数R^2为0.991 2,IC_(50)值为0.63 ng/mL,检出限和线性检测范围分别为(0.04±0.01)ng/mL和0.10~4.17 ng/mL;另外整个检测反应过程耗时约为40 min。蜂蜜样品的检出限和定量限分别为0.15 ng/g和0.33 ng/g,添加回收率在97.58%~100.94%之间,批内变异系数和批间变异系数均小于11%,表明该方法具有高精确度和稳定性。

黄原胶和魔芋胶抑制碱诱导鸭蛋清凝胶的高温液化

本研究分别将黄原胶和魔芋胶添加至鸭蛋清中制备碱诱导凝胶,以探究亲水胶体对凝胶高温液化的抑制作用,结果表明:与对照组相比,添加亲水胶后的蛋清凝胶黏度、储能模量和损耗模量增大明显(p<0.05),褐变强度增加了7.99%和33.21%;当黄原胶和魔芋胶的浓度由0.50%增加至1.50%,凝胶硬度值提高49.60%和119.56%,穿刺强度提高20.59%和78.42%,持水性提高1.02%和9.47%,且添加黄原胶的蛋清凝胶硬度、穿刺强度和持水性均显著大于魔芋胶(p<0.05)。两种胶的浓度均为1.00%时,蛋清凝胶的感官评分最高。两种亲水胶的加入会改变蛋白质的二级结构及凝胶内部的分子间作用力:黄原胶量的增加显著降低了离子相互作用(p<0.05),无规则卷曲减少了41.23%,α-螺旋增加了81.29%;魔芋胶量的增加显著降低了疏水相互作用(p<0.05),β-折叠减少了34.97%,无规则卷曲和α-螺旋分别增加了68.97%和70.37%;氢键和二硫键均随两种胶浓度的增加而增强。综上所述,添加黄原胶和魔芋胶均能抑制碱诱导蛋清凝胶在高温处理过程中的液化现象,且加入黄原胶所形成的凝胶质构特性和持水性优于魔芋胶,而魔芋胶对于凝胶褐变强度的影响大于黄原胶。

蒜蓉超高压处理条件优化及其理化性质

该文采用Box-Behnken响应面法优化蒜蓉超高压(ultra-high-pressure,UHP)处理工艺,同时测定蒜蓉品质相关理化指标。探究压力、保压时间和黄原胶添加量对蒜蓉感官评分和b*值的影响,进一步通过响应面法优化蒜蓉超高压处理条件,并进行预测分析及验证试验。结果表明,蒜蓉超高压处理的最佳条件为压力400 MPa、保压时间15 min、黄原胶添加量0.3%。在此条件下,蒜蓉感官评分为17.80,与预测值18.16接近,此时蒜蓉呈淡黄色,质地均匀,口感鲜香。3个因素对蒜蓉感官评分的影响大小为保压时间>压力>黄原胶添加量。最佳条件下处理的蒜蓉酸价为0.318 mg/g,过氧化值为0.008 g/100 g,水溶性多糖含量为132.04 mg/g,大蒜素含量为0.102 mg/mL,未检出微生物和大肠杆菌残留。

400 MPa超高压处理对蒜蓉品质及抗氧化特性的影响

采用400 MPa超高压处理蒜蓉5,10,15,20,25 min,探究400 MPa下不同时间处理对蒜蓉品质及抗氧化能力的影响。结果表明,15 min处理组的蒜蓉L*值(29.376)和a*值(-2.29)显著大于其他处理组(P<0.05),此时蒜蓉亮度最大,绿变程度最低,感官评价最佳;当处理时间大于15 min时,蒜蓉中大蒜素含量下降显著(P<0.05),从0.103 mg/mL下降至0.052 mg/mL;流变频率扫描结果显示蒜蓉的储能模量和损失模量均随超高压处理时间的延长而增大,表明超高压处理能增强蒜蓉的弹性和粘性;蒜蓉的抗氧化能力随处理时间的延长呈先上升后下降的趋势,15 min处理组的蒜蓉DPPH·清除率、Fe^(3+)还原力和Fe^(2+)络合能力显著强于其他时间处理组(P<0.05),分别为33.13%、0.235和56.26%。综上所述,400 MPa处理15 min能使蒜蓉具有最佳品质及抗氧化特性。

仙草提取物对猪肉脯贮藏期间品质的影响

研究添加3 mL/100 g仙草提取物对水分含量25%的猪肉脯25℃贮藏期间质构、感官、脂质氧化和蛋白质氧化的影响。结果表明:仙草提取物组猪肉脯贮藏期间的拉伸强度及延展性均显著高于空白对照组和2,6-二叔丁基对甲酚(butylated hydroxytoluene,BHT)组(P<0.05);3组猪肉脯的亮度值、红度值和黄度值均随贮藏时间的延长而显著降低(P<0.05);贮藏12 d后,各组猪肉脯总巯基含量及挥发性盐基氮含量变化显著(P<0.05),与空白对照组相比,仙草提取物显著延缓了猪肉脯贮藏过程中巯基的损失(P<0.05),抑制了挥发性盐基氮的产生;贮藏期间猪肉脯的硫代巴比妥酸反应物值呈显著上升趋势(P<0.05),仙草提取物组及BHT组显著低于空白对照组(P<0.05);空白对照组、仙草提取物组及BHT组的菌落总数分别在贮藏12、18、15 d超过国标限量,说明仙草提取物能够将猪肉脯在25℃条件下的贮藏时间延长6 d。综上所述,仙草提取物能够有效减缓猪肉脯脂质及蛋白质氧化,抑制微生物生长,延长猪肉脯的货架期。

重组蛋白正确折叠与修饰的提高策略

随着分子生物学的研究和不断发展,基因表达技术有了很大的进步。到目前为止,人们已经研究出多种表达系统用以生产重组蛋白,但没有一种表达系统能够完全满足当前需要,各种活性肽和蛋白质类药物的需求逐年攀升,不仅对表达量有要求,更需要正确的翻译后折叠、修饰,使表达蛋白和天然构象更加接近,具有更高的活性和稳定性。结合目前的研究工作从表达系统与宿主、分泌表达、共表达、融合表达和培养条件等方面综述了其对重组蛋白正确折叠以及翻译后修饰的影响,并提出可能改进的策略。